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中国林蛙变态发育中舌鳃骨的形态变化

陕西师范大学学报（自然科学版） 2022年第5期50卷 122-126页

作者：裴跃斌王宏元梁刚陕西师范大学生命科学学院陕西西安710119

为揭示中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪变态发育中舌鳃骨的形态变化,采用改良的Toyal骨骼双染色法对Gosner(G)26~46期中国林蛙蝌蚪舌鳃骨进行染色,并观察、比较和采集图像。结果显示,中国林蛙蝌蚪的舌鳃骨由角舌骨、关联骨、鳃下骨板... 详细信息

为揭示中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪变态发育中舌鳃骨的形态变化,采用改良的Toyal骨骼双染色法对Gosner(G)26~46期中国林蛙蝌蚪舌鳃骨进行染色,并观察、比较和采集图像。结果显示,中国林蛙蝌蚪的舌鳃骨由角舌骨、关联骨、鳃下骨板和鳃篮4部分构成。在变态发育中,舌鳃骨始终以软骨状态存在。G26期蝌蚪的舌鳃骨已具备完整结构,G26~G38期舌鳃骨各部分呈等速率生长,至G38期舌鳃骨达到最大;G39~G41期舌鳃骨开始自行吸收,形态略变小;G42期舌鳃骨形态已有较大变化;G43~G46期舌鳃骨的角舌骨、关联骨和鳃下骨板均发生变形与重塑,鳃篮逐渐消失,舌鳃骨发育为成体舌骨。为了适应生理功能的变化,中国林蛙蝌蚪舌鳃骨的形态结构经历了由小到大、又由大变小、最终在舌鳃骨原来位置重塑出成体舌骨的发育过程。

关键词：中国林蛙蝌蚪舌鳃骨变态发育

基于COⅠ基因对东北林蛙、中国林蛙等蛙属24种的鉴定

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中国实验方剂学杂志 2021年第16期27卷 150-158页

作者：王孟虎孙一帆许亮康廷国张腾腾左亚锋朱丽婷孟祥松汤建徐倩亳州学院安徽亳州236800 辽宁中医药大学辽宁大连116600 亳州职业技术学院安徽亳州236800 安徽中医药大学第二附属医院合肥230061

目的:利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ)技术对东北林蛙等24种进行鉴别,构建邻接(NJ)系统发育树,对24种进行系统聚类分析,为东北林蛙等蛙类的鉴别,分类及新种的发现提供一定的依据。方法:收集东北林蛙、中国林蛙、黑... 详细信息

目的:利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ)技术对东北林蛙等24种进行鉴别,构建邻接(NJ)系统发育树,对24种进行系统聚类分析,为东北林蛙等蛙类的鉴别,分类及新种的发现提供一定的依据。方法:收集东北林蛙、中国林蛙、黑龙江林蛙、徂崃林蛙、桓仁林蛙各10只,提取其DNA并进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,将扩增成功的序列测序,共测得50条COⅠ基因序列;从GenBank数据库中获得蛙科蛙属24种163条COⅠ基因序列及蛙科侧褶蛙属,臭蛙属,琴蛙属,水蛙属,湍蛙属各一条COⅠ基因序列;利用MEGA X进行序列比对,分析各物种COⅠ基因序列简约性信息位点,计算种内,种间遗传距离,构建NJ树进行系统聚类分析。结果:东北林蛙等24种COⅠ基因序列长度为554 bp,共有210个简约性信息位点,各物种种内遗传距离均蛙与明全蛙种间遗传距离为0.004外,其余各物种种间遗传距离范围为0.024~0.228;桑植蛙与明全蛙聚为一支,部分东北林蛙与Rana uenoi聚为一支,中国林蛙有2个独立的分支,其余各物种均独立聚为一支。结论:DNA条形码COⅠ技术能够对东北林蛙等21种进行鉴定及鉴别,支持桑植蛙与明全蛙,韩国林蛙与昆嵛林蛙为同物异名,其中一支中国林蛙可能是蛙科蛙属未下载的4个种之一或新种。这表明DNA条形码COⅠ技术不仅可以鉴定及鉴别东北林蛙等24种蛙类,也可以为蛙科蛙属的分类,新种或亚种的发现提供一定的科学依据。

关键词：东北林蛙中国林蛙蛙科蛙属 DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基I基因(COⅠ)

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中国林蛙驯养调查及哈蟆油与蟾蜍油比较研究

中国林蛙驯养调查及哈蟆油与蟾蜍油比较研究

作者：田梓琪辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:了解林蛙主产区的人工驯养现状及存在的问题,制定动物药材哈蟆油的生产及产地加工技术规程草案。通过对林蛙和蟾蜍的输卵管进行性状特征、显微结构、理化性质、化学成分、药效作用方面的对比,分析两者的异同点,对蟾蜍油的毒性成分... 详细信息

目的:了解林蛙主产区的人工驯养现状及存在的问题,制定动物药材哈蟆油的生产及产地加工技术规程草案。通过对林蛙和蟾蜍的输卵管进行性状特征、显微结构、理化性质、化学成分、药效作用方面的对比,分析两者的异同点,对蟾蜍油的毒性成分及急性毒性进行研究,以期为蟾蜍油资源利用提供实验依据。材料与方法:考察对象与材料辽宁、吉林两省具有一定规模的中国林蛙驯养企业;不同产地的哈蟆油样品2批,蟾蜍油样品9批。方法:1中国林蛙人工驯养情况调查实地考察重点对林蛙的生态环境与人工驯养中的孵化、繁育、放养、越冬,以及哈蟆油药材的生产及产地加工等各阶段进行实地调查。主要关注人工驯养中的产卵期繁育技术、蝌蚪期幼体食物饲养、病虫害防治、夏季幼蛙放养、越冬期,以及哈蟆油生产与产地加工技术等内容。2哈蟆油与蟾蜍油对比研究2.1药材对比研究观察哈蟆油和蟾蜍油完整干燥样品,观察二者性状特征;采用普通光学显微镜,观察哈蟆油和蟾蜍油的腺体细胞显微结构,比较细胞形态上的异同;按《中国药典》四部中膨胀度测定法（通则2101）测定二者膨胀度。2.2化学成分对比研究采用分光光度法,对二者的水溶性蛋白质和总磷脂含量进行对比研究;采用HPLC法对二者的1-MH、氨基酸类成分、核苷类成分、磷脂类成分、胆固醇类成分、雌二醇类成分含量进行对比研究。2.3药效作用对比研究采用小鼠游泳实验模型进行抗疲劳药效作用对比,采用小鼠缺氧实验模型进行耐缺氧药效作用对比,并对结果进行统计学分析。2.4蟾蜍油毒性成分测定及急性毒性实验2.4.1蟾蜍油中华蟾酥毒基含量测定以华蟾酥毒基为对照品,采用HPLC法,测定蟾蜍油中华蟾酥毒基成分的含量2.4.2蟾蜍油样品进行急性毒性实验参照《GB 15193.3-2003食品安全性毒理学评价程序》进行急性毒性试验。结果:1中国林蛙人工驯养情况调查林蛙养殖目前处于半人工驯养状态。孵化与繁育技术日益完善,病虫害的防治手段既有有效的预防措施也有针对性的治疗手段,放养期在深林中处于天然放养状态,越冬主要依靠自然环境条件和哈蟆池,技术较为完善。哈蟆油药材目前采用的方法有晾晒剥取、冷冻剥取、新鲜剥取。2哈蟆油与蟾蜍油对比研究2.1药材对比哈蟆油和蟾蜍油干燥样品在外观上具有明显差异,哈蟆油呈块状有特异性窝沟,蟾蜍油呈鸡肠状弯曲多层重叠,二者气味都微腥,但哈蟆油气腥,味微甘,蟾蜍油则有腥臭味;哈蟆油和蟾蜍油腺体细胞显微结构相近,但哈蟆油细胞细胞核和细纹相对较多;蟾蜍油膨胀度平均值为48.1,哈蟆油膨胀度平均值为68.4,蟾蜍油均低于哈蟆油。2.2化学成分对比2.2.1哈蟆油和蟾蜍油的差异性成分是水溶性蛋白质与雌二醇。2.2.2哈蟆油和蟾蜍油的相似性成分是:1-MH、氨基酸、核苷类、磷脂类成分及胆固醇。2.3药效作用对比研究哈蟆油可延长小鼠游泳时间,蟾蜍油组与空白组无统计学差异,但有增加小鼠运动时间的趋势。哈蟆油可延长小鼠耐缺氧时间,蟾蜍油组与空白组无统计学差异,但可明显延迟小鼠出现呼吸急促的现象。2.4蟾蜍油毒性成分测定及急性毒性实验2.4.1蟾蜍油中华蟾酥毒基含量测定在《中国药典》的实验条件下,未检出华蟾酥毒基。2.4.2蟾蜍油样品进行急性毒性实验经过连续14日观察。雌雄小鼠活动正常,睡眠正常,进食进水情况正常,未见不良反应。结论:1综合调查显示,哈蟆油药材其生产及产地加工过程中存在一定问题,为了促进行业发展,制定了《动物药材生产及产地加工技术规程哈蟆油》标准草案。2蟾蜍油与哈蟆油的共性及差异:2.1蟾蜍油与哈蟆油的相似:蟾蜍油的腺体细胞结构与哈蟆油相似,化学成分上磷脂类、核苷类、胆固醇、1-MH、氨基酸含量并无明显差异,蟾蜍油中氨基酸含量更具有营养价值。2.2蟾蜍油与哈蟆油的差异:化学成分中水溶性蛋白质和雌二醇含量具有明显差异。在抗疲劳和抗应激药效作用上,蟾蜍油虽无显著效果但有呈现效果的趋势。3蟾蜍油中未检测出毒性成分华蟾酥毒基,且急性毒性未见不良反应,故蟾蜍油口服具有一定程度的安全性。

关键词：中国林蛙哈蟆油蟾蜍油成分比较药效比较

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中国林蛙立体式地窖越冬的初步研究

黑龙江畜牧兽医 2017年第10期 249-251页

作者：崔健于晶凤李慧刘学龙延边大学农学院吉林延吉133000

中国林蛙为两栖纲无尾目蛙科蛙属动物，是我国特产的珍贵野生动物，具有较高营养价值。随着中国林蛙室外封闭式养殖技术的研究深入，大规模林蛙越冬的方式是急待解决的一项重要课题。有些地区采取人工窖式越冬的方法，取得了初步成果，... 详细信息

中国林蛙为两栖纲无尾目蛙科蛙属动物，是我国特产的珍贵野生动物，具有较高营养价值。随着中国林蛙室外封闭式养殖技术的研究深入，大规模林蛙越冬的方式是急待解决的一项重要课题。有些地区采取人工窖式越冬的方法，取得了初步成果，但此种方法没有充分利用窖内空间，对生产者来说，这无疑造成了一定的浪费。为了解决这一问题，进行了人工立体式地窖越冬的试验，

关键词：中国林蛙立体式越冬地窖野生动物营养价值养殖技术无尾目

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九寨沟中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群差异分析

四川动物 2023年第4期42卷 439-445页

作者：黄飞云向朋尚可杨宇赵春霖岳碧松四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

通过16S rRNA高通量测序方法分析采自四川九寨沟国家级自然保护区的中华蟾蜍Bufo gargarizans和中国林蛙Rana chensinensis的肠道菌群结构,结果表明:中华蟾蜍和中国林蛙共有的扩增序列变体(ASV)数目为440,其中特有的ASV分别为313和539... 详细信息

通过16S rRNA高通量测序方法分析采自四川九寨沟国家级自然保护区的中华蟾蜍Bufo gargarizans和中国林蛙Rana chensinensis的肠道菌群结构,结果表明:中华蟾蜍和中国林蛙共有的扩增序列变体(ASV)数目为440,其中特有的ASV分别为313和539。在门级水平上,中华蟾蜍和中国林蛙肠道中疣微菌门Verrucomicrobiota、厚壁菌门Firmicutes和拟杆菌门Bacteroidota的总丰度分别为96.18%和79.00%。在属级水平上,丰富度0.1%以上的有17个属级单元,总丰度分别占中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群的69.82%和41.37%,其中阿克曼菌属Akkermansia最丰富,分别占48.35%和10.75%。在中国林蛙肠道中,拟杆菌属Bacteroides、另枝菌属Alistipes、脱硫弧菌属Desulfovibrio、丹毒杆菌属Erysipelatoclostridium、瘤胃球菌属Ruminococcus UBA1819、理研菌属Rikenella表现出更高的均匀度。研究结果为进一步深入研究中华蟾蜍和中国林蛙肠道微生物结构和功能提供了基础资料。

关键词：中华蟾蜍中国林蛙肠道微生物 16S rRNA测序阿克曼菌属

中国林蛙和中华大蟾蜍跳跃能力的比较以及中国林蛙后肢的软骨内骨化发育机制

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中国林蛙和中华大蟾蜍跳跃能力的比较以及中国林蛙后肢的软骨内骨...

作者：杨红玉陕西师范大学

学位级别：硕士

两栖动物是生物进化中首次出现四肢的动物。四肢的出现有助于两栖动物在陆地上运动,进而适应陆地生活。不同种属两栖动物的运动方式与前后肢长度关系密切:后肢长度相对长于前肢的个体擅长跳跃,而前肢长度长于后肢的个体擅长步行跳跃。... 详细信息

两栖动物是生物进化中首次出现四肢的动物。四肢的出现有助于两栖动物在陆地上运动,进而适应陆地生活。不同种属两栖动物的运动方式与前后肢长度关系密切:后肢长度相对长于前肢的个体擅长跳跃,而前肢长度长于后肢的个体擅长步行跳跃。跳跃是无尾类动物的一种独特运动方式,有助于个体逃避敌害。因此,无尾类动物的生存状况与其跳跃能力的强弱密切相关。然而,关于无尾类动物物种之间跳跃性能比较的研究仍知之甚少。研究发现,跳跃能力依赖于相对后肢长度和相对后肢肌肉重量。此外,后肢-盆骨关节和髂骨-荐椎关节以及荐椎-尾杆骨关节也在跳跃运动中发挥了关键作用。骨骼是四肢结构框架的基础,并为肌肉提供了附着点。附肢骨骼的形成主要通过软骨内骨化过程,并且在时间和空间上受到基因相互作用网络的严格调控。在哺乳动物中,这些基因主要包括以下三大类:以甲状腺激素（THs）为代表的系统因子、以SRY-box包含基因（Sox）为代表的转录因子以及以成纤维生长因子（FGFs）和骨形态发生蛋白（BMPs）为代表的局部分泌因子。本文第一部分比较了中国林蛙（Rana chensinensis）和中华大蟾蜍（Bufo gargarigans）幼蛙（Gs46期）的跳跃能力。首先对两个物种各自的平均最大跳跃距离和形态参数进行了测定。其次通过骨骼双色法比较二者的骨化程度,并通过苏木精-伊红（H＆E）和Masson三色染色法对后肢骨骼切片进行染色观察。第二部分以中国林蛙蝌蚪为研究对象,探究中国林蛙发育过程中跳跃相关结构的变化及其内部分子机制。通过形态学方法测定中国林蛙Gs 40期至Gs 46期发育过程中的形态参数变化。选取Gs 40、Gs 42和Gs 46期的中国林蛙进行骨骼双染色实验,以观察骨骼发育程度。并使用H＆E和Masson染色法检测发育过程中后肢骨骼切片和甲状腺组织切片的变化。此外,通过转录组测序技术对Gs 40、Gs 42和Gs 46期中国林蛙后肢软骨内骨化过程相关基因的表达水平进行了分析。其结果及结论如下:第一部分:中国林蛙的平均最大跳跃距离大于中华大蟾蜍的平均最大跳跃距离,表明中国林蛙的跳跃能力优于中华大蟾蜍。形态学测量结果分析发现中国林蛙的体长、后肢长和体重等形态指标均高于中华大蟾蜍。骨骼双染色法结果表明中国林蛙的骨化程度高于中华大蟾蜍,其中中国林蛙的尾杆骨已与荐后椎发生融合,呈现完整的棒状结构,而中华大蟾蜍的尾杆骨未与荐后椎发生融合。骨骼切片染色结果表明中国林蛙胫腓骨中的皮质骨融合趋势远远超过中华大蟾蜍。这些结构上的差异可能导致中国林蛙和中华大蟾蜍跳跃能力的不同,较高的骨骼结构发育水平有利于个体跳跃能力的增强。第二部分:发育过程中的中国林蛙骨骼长度不断增加,骨化程度不断加深。尾杆骨和胫腓骨皮质骨结构在Gs 46期发育及融合程度最高。甲状腺组织学观察结果显示,甲状腺组织的面积及滤泡上皮细胞高度在发育过程中存在差异,这些差异与骨骼发育中不同的THs需求水平相适应。除此之外,骨化相关差异表达基因的转录分析结果与哺乳动物相似,表明两栖动物软骨内骨化基因的调控方式可能与哺乳动物一致。而骨化相关基因在不同发育时期表达水平的差异表明后肢的软骨内骨化在发育过程中逐渐增强。这些变化可能为中国林蛙的骨骼提供更大的机械强度,增强其运动能力进而为两栖动物在陆地上的运动提供了进一步的保障。综上所述,本研究通过比较中国林蛙和中华大蟾蜍的平均最大跳跃距离,并运用形态学和组织学等方法研究了跳跃能力相关的外部形态特征、内部骨骼结构和基因表达调控水平。结果表明中国林蛙的跳跃能力优于中华大蟾蜍。中国林蛙良好的跳跃能力离不开自身的外部形态特征以及尾杆骨、胫腓骨等结构的完整性,且这种完整性是在发育过程中逐渐完善的。此外,后肢骨骼的发育持续受到软骨内骨化相关基因在分子水平上的表达调控。这些结果有利于帮助我们理解两栖动物跳跃运动的生理机制,也为理解两栖动物的生活及生存能力提供了理论依据。

关键词：跳跃能力中国林蛙中华大蟾蜍后肢软骨内骨化

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中国林蛙与黑龙江林蛙产油性能比较研究

中药材 2016年第12期39卷 2711-2715页

作者：宋百军李长生黄朝云李栋王春青吉林农业科技学院动物科技学院吉林吉林132109

目的:为科学指导林蛙养殖,并提供哈蟆油质量评价的理论依据,对中国林蛙与黑龙江林蛙体重与哈蟆油产量相关性及哈蟆油膨胀度差异性进行对比研究。方法:采集3年生的雌性中国林蛙100只、雌性黑龙江林蛙50只,采用鲜蛙取油法和干蛙取油法获得... 详细信息

目的:为科学指导林蛙养殖,并提供哈蟆油质量评价的理论依据,对中国林蛙与黑龙江林蛙体重与哈蟆油产量相关性及哈蟆油膨胀度差异性进行对比研究。方法:采集3年生的雌性中国林蛙100只、雌性黑龙江林蛙50只,采用鲜蛙取油法和干蛙取油法获得3种哈蟆油样品,测定3种哈蟆油样品膨胀度;采用SPSS 17.0统计学软件,分析中国林蛙体重、黑龙江林蛙体重与产油性能的相关性,比较3种哈蟆油膨胀度的差异性。结果:中国林蛙及黑龙江林蛙的体重与哈蟆油产量呈极显著正相关;3种哈蟆油在室温水浸8 h后的膨胀度存在显著差异。林蛙体重与哈蟆油产量具有极显著正相关;3年生雌性中国林蛙的哈蟆油产量为(1.04±0.31)g,显著高于3年生雌性黑龙江林蛙产量(0.73±0.34)g;2种林蛙的干油产率分别为(2.88±0.44)%和(2.95±0.71)%,没有显著差异。结论:依据在室温水浸8 h后的膨胀度可以区分鲜蛙取油法和干蛙取油法的哈蟆油样品,但2种取油方法对哈蟆油性状质量无显著影响。

关键词：中国林蛙黑龙江林蛙鲜蛙取油法干蛙取油法膨胀度哈蟆油

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中国林蛙饵料仿生诱喂装置的研制

农业工程学报 2009年第2期25卷 104-106页

作者：史晓敏张艳春计青山石戈浙江海洋学院机电工程学院舟山316004 浙江海洋学院海洋科学学院舟山316004

为了实现中国林蛙工厂化养殖,降低养殖成本和养殖风险、改善养殖环境、提高林蛙的蛙油品质,设计研制了饵料仿生诱喂装置,对几种理论可行的装置方案进行试制和初步试验,确定了3轴不同相位凸轮传动的最佳方案,根据最佳方案设计和制作了样... 详细信息

为了实现中国林蛙工厂化养殖,降低养殖成本和养殖风险、改善养殖环境、提高林蛙的蛙油品质,设计研制了饵料仿生诱喂装置,对几种理论可行的装置方案进行试制和初步试验,确定了3轴不同相位凸轮传动的最佳方案,根据最佳方案设计和制作了样机并进行了林蛙取食试验,所设计的装置占用蛙池面积仅为每池0.48 m2,该装置制造成本低、操作简单,林蛙取食率最高达到了79.2%。试验结果表明:装置所产生的饵料仿生蠕动能够满足中国林蛙取食要求,取得了满意的结果。

关键词：运动仿生凸轮机构饲喂装置中国林蛙

中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的测定

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生物工程学报 2009年第1期25卷 101-108页

作者：虞凤慧张丽芳李俊峰李晓帆付欣尚德静辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室辽宁师范大学生命科学学院大连116029

采用RT-PCR和3′RACE方法,从中国林蛙皮肤总RNA中克隆出了6条编码不同抗菌肽前体的cDNA序列,分别命名为:preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb、preprotemporin-1CEc、preprobrevinin-1CEa、preprobrevinin-1CEb和preprochensinin-1。cDNA碱基序列全长为289～315bp,编码59～65个氨基酸。6个抗菌肽前体由3部分结构域组成:22个氨基酸残基组成的信号肽、多个酸性氨基酸残基组成的中间序列、高度变异的成熟肽。preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb和preprotemporin-1CEc属于temporin-1家族抗菌肽前体,具有肽链短,C-端酰胺化的特点;preprobrevinin-1CEb和preprobrevinin-1CEa属于brevinin-1家族抗菌肽前体,在肽链的C-端含有RANA盒结构,可在2个半胱氨酸残基间形成二硫键,组成7肽环;preprochensinin-1在已知多种数据库中没有发现序列同源的多肽,被鉴定为新抗菌肽。人工合成temporin-1CEa、temporin-1CEb、brevinin-1CEa和chensinin-1四种中国林蛙皮肤抗菌肽,活性检测结果表明:它们对金黄葡萄球菌等3种革兰氏阳性细菌的生长具有明显抑制作用,同时抑制乳腺癌MCF-7细胞和宫颈癌HeLa细胞生长。

关键词：中国林蛙 cDNA克隆序列分析抗菌活性抗癌活性