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兔髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系的建立

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北京大学学报（医学版） 2002年第2期34卷 103-107页

作者：常嘉马绪臣魏明洁王晶焦岩涛北京大学口腔医院颞下颌关节病及口颌面痛诊治中心北京100081

目的 :建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系。方法 :利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞 ,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代 ;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质 ,进行三维培养 ;分别对培养细胞... 详细信息

目的 :建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系。方法 :利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞 ,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代 ;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质 ,进行三维培养 ;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片 ,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察。藻酸盐凝胶三维体系培养 6周后 ,以EDTA分解凝胶 ,收获培养的软骨细胞 ,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力。结果 :藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好 ;培养 6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低 ,培养细胞保持了良好的分化表型。结论 :成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系 ,在该体系中 ,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好。

关键词：髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系细胞培养

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造血细胞三维培养体系的研究

中华血液学杂志 2008年第2期29卷 138-140页

作者：谭竞刘霆四川大学华西医院血液科成都610041

造血干细胞（HSC）体外培养是研究HSC生物特性的重要实验平台，也是今后实现造血干／祖细胞扩增，用于干细胞移植的必经之路。如同生物体体内其他细胞一样，HSC所生存的微环境具有三维组织结构。传统的二维造血细胞培养体系在空间结构... 详细信息

造血干细胞（HSC）体外培养是研究HSC生物特性的重要实验平台，也是今后实现造血干／祖细胞扩增，用于干细胞移植的必经之路。如同生物体体内其他细胞一样，HSC所生存的微环境具有三维组织结构。传统的二维造血细胞培养体系在空间结构、细胞外基质、细胞因子等方面还不能模拟体内的三维造血微环境。尽管三维培养体系已经广泛地运用于实体肿瘤、组织再生和组织工程研究，但是造血微环境的三维空间结构对造血细胞调控作用研究还不多。我们就近年来造血细胞三维培养体系研究作一综述。

关键词：三维培养体系造血细胞三维空间结构造血微环境造血干细胞三维组织结构细胞培养体系干细胞移植

构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的体外实验研究

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中国输血杂志 2013年第11期26卷 1075-1080页

作者：王甜甜王世春林放孟强陈艺心赵树铭第三军医大学第一附属医院输血科中国人民解放军重庆血站重庆400038

目的探讨利用壳聚糖-明胶支架和旋转培养系统(RCCS)构建三维培养体系(3D)培养脐血干细胞向血小板分化效果。方法支架构建:冷冻干燥法制备壳聚糖-明胶支架,扫描电镜观察支架表面特征;细胞培养:免疫磁珠分选脐血CD34+细胞并在自制支架结合... 详细信息

目的探讨利用壳聚糖-明胶支架和旋转培养系统(RCCS)构建三维培养体系(3D)培养脐血干细胞向血小板分化效果。方法支架构建:冷冻干燥法制备壳聚糖-明胶支架,扫描电镜观察支架表面特征;细胞培养:免疫磁珠分选脐血CD34+细胞并在自制支架结合RCCS的培养系统中培养,观察细胞的生长状况,对分化所得血小板作形态及功能鉴定,并与二维培养体系(2D)的培养结果比较。结果成功构建壳聚糖-明胶支架:浓度为0.5%,预冻温度为-30℃,孔径为(86±21)μm、吸水率为(87.62±10.19)%、孔隙率为(92.56±1.12)%,生物相容性好,无毒副作用;该系统诱导培养CD34+d5增殖(87.02±4.35)倍,而2D培养增值(20.78±5.03)倍(P培养至21 d收集的类血小板颗粒在镜下观察具有正常的血小板形态特征,黏附功能良好,黏附率为(43.05±1.93)%,2D为(41.37±1.06)%(P>0.05);经凝血酶诱导后可发生聚集;细胞膜CD62p表达的阳性率为(73.82±1.01)%,2D为(75.26±2.57)%(P>0.05)。结论壳聚糖-明胶支架和RCCS系统构建的3D培养有利于脐血干细胞的体外增殖和向血小板的诱导分化。

关键词：脐血三维培养体系壳聚糖-明胶旋转培养系统 CD34+细胞血小板体外实验

构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的实验研究

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构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的实验研究

作者：王甜甜第三军医大学

学位级别：硕士

目的：通过构建壳聚糖-明胶三维支架，并用三维支架与旋转培养系统(RCCS)形成的三维培养体系(3D)来培养脐血分离的CD34+细胞，观察脐血干细胞向血小板分化的情况。方法： 1、冷冻干燥法制备不同浓度配比的壳聚糖-明胶支架，扫描电镜... 详细信息

目的：通过构建壳聚糖-明胶三维支架，并用三维支架与旋转培养系统(RCCS)形成的三维培养体系(3D)来培养脐血分离的CD34+细胞，观察脐血干细胞向血小板分化的情况。方法： 1、冷冻干燥法制备不同浓度配比的壳聚糖-明胶支架，扫描电镜观察支架表面特征，测量支架的孔径大小、并计算孔隙率、吸水率以及相容性测定，选取适合脐血干细胞生长的支架。 2、用磁珠分选的方法对人脐血CD34+细胞进行分离鉴定，将脐血CD34+细胞附着在壳聚糖-明胶支架上，放入RCCS系统进行3D培养，倒置显微镜观察细胞形态，扫描电镜观察细胞在支架上的粘附生长状况，MTT法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞标志物，以及对分化所得的血小板进行形态及功能鉴定，并与二维培养体系(2D)进行比较。结果： 1、成功构建壳聚糖-明胶支架，选用壳聚糖、明胶各0.5g，预冻温度为-30℃条件下制备支架，孔径为(86±21)μm、吸水率为(87.62±10.19)%、孔隙率为(92.56±1.12)%，细胞相容性好，无毒副作用，适宜脐血干细胞培养用三维支架。 2、磁珠分选出脐血CD34+细胞，将细胞以5×104/ml的种植率种植在2D和3D体系中。扫描电镜观察细胞粘附于支架上，生长状况良好;3D培养第8d CD34+细胞可增殖(87.02±4.35)倍，2D培养到第5d达到峰值，细胞可增殖(20.78±5.03)倍，两者间具有统计学意义(P 培养到第7d、14d，3D体系测得的的结果为((28.70±1.75)、(82.40±2.91))%，2D体系中测得的结果为((27.18±2.63)、(80.33±3.56))%;3D培养系统所得类血小板颗粒较2D多，3D培养系统所得类血小板颗粒细胞数为(31.60±0.74)×106/ml，2D培养条件所得类血小板颗粒细胞数为(7.91±0.93)×106/ml，其黏附率为(43.05±1.93)%，2D为(41.37±1.06)%，两者无统计学意义;两种培养系统所收集的类血小板颗粒在镜下观察都具有聚集能力，流式细胞仪检测类血小板细胞膜有活化后标志物CD62p的表达，阳性率分别为((73.82±1.01)、(75.26±2.57))%，差异不显著，无统计学差异。结论： 1、通过冷冻干燥法成功构建了适合脐血干细胞生长的壳聚糖-明胶三维支架。 2、壳聚糖-明胶支架和RCCS系统构建的三维培养体系利于脐血干细胞的增殖生长。

关键词：三维培养体系壳聚糖-明胶 RCCS 脐血CD34+细胞血小板

从能力拓扑到学习拓扑的三维员工培养体系构建

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企业改革与管理 2020年第5期 92-93页

作者：王桂哲宁爱华张达国网北京市电力公司北京100031 国网北京市电力公司顺义供电公司北京101300

针对员工培养不系统、全面的问题,建立从能力拓扑到学习拓扑的青年员工三维培养体系,能够对青年员工成长方向及道路给出前瞻性引导,明晰员工成长到不同阶段能力要求、学习内容、学习方式及学习资料等,使青年员工清楚地知道到达目标岗位... 详细信息

针对员工培养不系统、全面的问题,建立从能力拓扑到学习拓扑的青年员工三维培养体系,能够对青年员工成长方向及道路给出前瞻性引导,明晰员工成长到不同阶段能力要求、学习内容、学习方式及学习资料等,使青年员工清楚地知道到达目标岗位的前置条件及实现目标的方法,使其能够立足于个人能力现状规划出一条适合其自身发展的学习路径,提前做好职业生涯前数年的总体学习计划,并持续落实,有效提升青年员工学习主动性和针对性。

关键词：电力企业青年员工能力拓扑学习拓扑三维培养体系

3D培养体系下人来源诱导性多能干细胞向肝细胞的转化

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中国组织工程研究 2018年第29期22卷 4681-4686页

作者：李嘉晋王荣丽李婷婷何东石伟西南医科大学临床医学院四川省泸州市646000 绵阳市人民医院重症医学科四川省绵阳市621000 绵阳市人民医院肾病内科四川省绵阳市621000

背景:生物型人工肝的构建有望成为治疗急性肝衰竭的有效方法,但构建人工肝的种子细胞来源、培养模式、营养获取等方面仍存在较多难题,制约血液净化-人工肝的发展与临床应用。目的:探讨在不添加外源血清等异种来源物质的条件下将人诱导... 详细信息

背景:生物型人工肝的构建有望成为治疗急性肝衰竭的有效方法,但构建人工肝的种子细胞来源、培养模式、营养获取等方面仍存在较多难题,制约血液净化-人工肝的发展与临床应用。目的:探讨在不添加外源血清等异种来源物质的条件下将人诱导性多能干细胞诱导分化为肝细胞样细胞的可行性。方法:应用含Transwell小室的6孔板构建3D培养体系,外源添加丙戊酸和尼克酰胺对人诱导性多能干细胞进行诱导分化,并将分化的肝细胞样细胞与生物补片共培养。实验分为5组:人诱导性多能干细胞为A组、正常肝细胞为B组、不添加尼克酰胺诱导分化的肝细胞样细胞为C组、添加尼克酰胺诱导分化的肝细胞样细胞为D组、在生物外科补片上培养的肝细胞样细胞为E组。倒置相差显微镜下观察D组肝细胞样细胞的形态;免疫荧光检测D组细胞中肝细胞核因子4α和甲胎蛋白的表达;荧光实时定量PCR和Western blot检测A、B、C、D组细胞中甲胎蛋白与白蛋白的mRNA和蛋白表达;流式细胞术检测A、C、D组细胞的分化效率;免疫细胞化学检测B组和E组细胞中胆盐输出泵蛋白的表达;ELISA检测D组和E组上清液中乳酸脱氢酶活性、白蛋白和尿素氮含量。结果与结论:(1)D组细胞由梭形逐渐转变成多边形;(2)D组细胞中肝细胞核因子4α和甲胎蛋白呈阳性表达;(3)D组细胞中甲胎蛋白、白蛋白的基因和蛋白表达明显高于A组和C组(P三维培养体系和生物外科补片联合应用有助于促进诱导性多能干细胞在体外诱导分化为功能性肝细胞样细胞。

关键词：诱导性多能干细胞肝衰竭人工肝 Transwell小室三维培养体系生物外科补片尼克酰胺丙戊酸生物人工肝干细胞诱导多功能干细胞肝,人工烟酰胺丙戊酸肝细胞组织工程

新型两亲性肽自组装凝胶与神经干细胞相容性研究

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生物医学工程学杂志 2009年第4期26卷 807-810页

作者：宋玉林黄华斌郑启新廖琦南昌大学第二附属医院骨科南昌330006 华中科技大学同济医学院协和医院骨科武汉430022

体外培养出神经干细胞(NSCs),接种于两亲性含IKVAV序列肽基三维凝胶内部,观察凝胶与NSCs的细胞相容性。从乳鼠大脑皮层机械分离获取NSCs,免疫组织化学方法鉴定;1wt%两亲性肽溶液在DMEM/F12触发下自组装为三维多孔凝胶,透射电镜(TEM)观... 详细信息

体外培养出神经干细胞(NSCs),接种于两亲性含IKVAV序列肽基三维凝胶内部,观察凝胶与NSCs的细胞相容性。从乳鼠大脑皮层机械分离获取NSCs,免疫组织化学方法鉴定;1wt%两亲性肽溶液在DMEM/F12触发下自组装为三维多孔凝胶,透射电镜(TEM)观察凝胶超微结构;1×105/mlNSCs悬液接种于三维凝胶内部(三维培养体系)及多聚赖氨酸包被的盖波片表面(二维培养体系),无血清培养,DAPI/Brdu免疫荧光双标,荧光显微镜观察NSCs的成活及增殖情况。分离培养的细胞为Nestin阳性的NSCs,可分化为NSE阳性的神经元样细胞及GFAP阳性的神经胶质样细胞;TEM显示凝胶由纳米纤维构成,纤维直径有3～5nm,长度100～1500nm;二维培养体系中,Brdu标记细胞较为稀少,多呈单个分布,而在三维培养体系中标记的细胞大多聚集为球;三维培养Brdu标记细胞阳性率明显高于二维培养(P三维凝胶与NSCs细胞相容性好,可促进NSCs增殖。

关键词：两亲性肽细胞相容性二维培养体系三维培养体系

三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

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中国组织工程研究 2015年第1期19卷 24-29页

作者：毕晓娟郭晨明李亮段显琳江明新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院干细胞研究室、新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院乳腺外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院血液病中心、新疆维吾尔自治区血液病研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪... 详细信息

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论:分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。

关键词：组织工程干细胞间质干细胞软骨脂肪干细胞三维培养体系软骨微球诱导分化间充质干细胞脂肪源间充质干细胞人脂肪间充质干细胞无支架微球培养条件优化软骨诱导

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机械刺激对体外培养椎间盘细胞的影响

江苏医药 2007年第1期33卷 70-72页

作者：葛灵张宁任永信南京医科大学第一附属医院骨科 219929

椎间盘组织和细胞的生长受多种因素的影响,机械刺激是其中之一。细胞三维培养体系希望模拟体组织中细胞所处的生理环境。在椎间盘组织中细胞存在复杂应力环境,如牵张力、压应力、振动等。近年来,随着机械作用细胞培养模型的建立,应力对... 详细信息

椎间盘组织和细胞的生长受多种因素的影响,机械刺激是其中之一。细胞三维培养体系希望模拟体组织中细胞所处的生理环境。在椎间盘组织中细胞存在复杂应力环境,如牵张力、压应力、振动等。近年来,随着机械作用细胞培养模型的建立,应力对体外培养椎间盘细胞作用的研究得以实现。

关键词：椎间盘细胞体外培养机械刺激椎间盘组织三维培养体系细胞培养模型应力环境生理环境