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Tmod1通过影响黏着斑的活性调控巨噬细胞的迁移

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医用生物力学 2021年第S01期36卷 61-61页

作者：江思瑜谢利德姚伟娟北京大学医学部基础医学院生理与病理生理学系血液流变学研究中心北京100083 承德医学院基础医学院承德067000

目的探讨原肌球调节蛋白1(Tropomodulin1,Tmod1)在调控巨噬细胞迁移中的作用及其机制。方法培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,转染Tmod1的质粒或siRNA在细胞中过表达或敲低Tmod1表达。利用Transwell检测细胞迁移能力,利用蛋白免疫印迹检测黏着... 详细信息

目的探讨原肌球调节蛋白1(Tropomodulin1,Tmod1)在调控巨噬细胞迁移中的作用及其机制。方法培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,转染Tmod1的质粒或siRNA在细胞中过表达或敲低Tmod1表达。利用Transwell检测细胞迁移能力,利用蛋白免疫印迹检测黏着斑蛋白表达,采用免疫共沉淀联合质谱分析鉴定Tmod1的相互作用蛋白。

关键词：巨噬细胞黏着斑质谱分析蛋白免疫印迹免疫共沉淀活性调控调节蛋白相互作用蛋白

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细胞铺展动力学的研究进展

力学学报 2012年第5期44卷 807-823页

作者：李建军赵亚溥中国科学院力学研究所非线性力学国家重点实验室北京100190

细胞与细胞外基质之间的相互作用在细胞的迁移、分化、凋亡等生理过程中起着重要的作用,细胞铺展作为细胞与细胞外基质作用的第1步,受到了人们的广泛关注.首先阐述了细胞铺展的关键生物动力学过程,对铺展3个不同阶段的特点进行了总结和... 详细信息

细胞与细胞外基质之间的相互作用在细胞的迁移、分化、凋亡等生理过程中起着重要的作用,细胞铺展作为细胞与细胞外基质作用的第1步,受到了人们的广泛关注.首先阐述了细胞铺展的关键生物动力学过程,对铺展3个不同阶段的特点进行了总结和归纳,并运用力学的观点阐明了细胞铺展的驱动力及驱动机制,详细讨论了聚合力、黏附力以及细胞张力等3种主要作用力在细胞铺展过程中的作用规律以及相应的物理模型.在此基础上,从细胞的黏性流动及力学平衡两个方面出发,简要综述了已有相关研究结果的不足之处,介绍了当前建立细胞铺展动力学模型的主要思路,并探讨了今后面向细胞生物学需求的相关细胞动力学的研究方向.

关键词：细胞铺展肌动蛋白丝黏着斑牵拉力膜张力黏性流动

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中华肿瘤杂志 2024年第2期46卷 108-117页

作者：马刚梁寒张汝鹏孙意国家恶性肿瘤临床医学研究中心、天津市肿瘤防治重点实验室、天津市恶性肿瘤临床医学研究中心、天津医科大学肿瘤医院胃部肿瘤科天津300060 北京大学医学部基础医学院北京100191

目的探讨Ras相关结合蛋白23(RAB23)在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合(GEO)数据库的GSE20347... 详细信息

目的探讨Ras相关结合蛋白23(RAB23)在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合(GEO)数据库的GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织RAB23 mRNA的表达水平。免疫组织化学检测106例配对食管鳞癌和癌旁正常组织、33例淋巴结阳性与10例淋巴结阴性患者原发灶与淋巴结组织中RAB23蛋白含量。在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中瞬时敲降RAB23表达(转染si-RAB23-1和si-RAB23-9)或者稳定敲降RAB23表达(转染sh-RAB23), 采用Western blot法验证RAB23敲降效率, 采用细胞计数试剂盒8法和裸鼠皮下成瘤实验检测食管鳞癌细胞的增殖能力, 采用Transwell实验和裸鼠尾静脉-肺转移实验检测食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力, 采用细胞黏附实验检测食管鳞癌细胞的黏附能力, 采用转录组测序技术分析RAB23敲降后对细胞转录谱的影响, 并通过Western blot检测验证相关信号通路。结果 16例食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为0.009 7±0.008 9, 高于癌旁正常组织[0.003 2±0.003 7, P=0.006]。对GEO数据库GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织表达谱的生信分析显示, 食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为4.30±0.25, 高于癌旁正常组织(4.10±0.17, P=0.037)。106例食管鳞癌组织中, 51例RAB23低表达, 55例RAB23高表达;而配对癌旁正常组织中, 82例RAB23低表达, 24例RAB23高表达, 食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于配对癌旁正常组织(P黏着斑相关信号通路均被削弱, sh-RAB23组KYSE30和KYSE150细胞中p-FAK和p-paxillin表达水平降低。结论 RAB23在食管鳞癌组织中高表达, 与淋巴结转移有关。敲低RAB23表达后能够削弱黏着斑相关信号通路, 进而抑制食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附。

关键词：食管鳞状细胞癌 Ras相关结合蛋白23 黏着斑侵袭迁移

Stanford A型主动脉夹层差异表达基因生物学通路分析

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复旦学报（医学版） 2015年第3期42卷 379-383,388页

作者：潘荪洪涛王春生复旦大学附属中山医院心外科上海200032

目的通过对急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉组织差异表达基因的通路分析,探讨主动脉夹层的发病机制。方法应用人类全基因组表达谱微阵列芯片检测急性Stanford A型主动脉夹层患者与器官捐献者主动脉组织的基因表达,GenomeStudio Ge... 详细信息

目的通过对急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉组织差异表达基因的通路分析,探讨主动脉夹层的发病机制。方法应用人类全基因组表达谱微阵列芯片检测急性Stanford A型主动脉夹层患者与器官捐献者主动脉组织的基因表达,GenomeStudio Gene Expression Module v1.0软件进行数据结果分析。采用荧光定量real-time PCR验证芯片结果。以KEGG数据库对差异表达基因进行通路分析。结果筛选出差异表达基因数1 309个,real-time PCR验证结果与芯片检测结果一致。通路分析发现两组之间黏着斑通路的基因表达发生显著变化,同时血管平滑肌收缩通路和肌动蛋白细胞骨架调节通路的基因表达也有显著差异。结论差异基因通过黏着斑通路、血管平滑肌收缩通路和肌动蛋白细胞骨架调节通路相互作用,可能在急性Stanford A型主动脉夹层的发病机制中发挥了重要作用。

关键词：主动脉夹层基因表达谱通路分析黏着斑

不同孔径梯度纳米羟基磷灰石三维支架制备及对MC3T3-E1生物学性能的影响

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中国组织工程研究 2022年第21期26卷 3338-3344页

作者：杨姣姣胡明李岩夏德林西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科四川省泸州市646000 泰州职业技术学院药学院泰州市骨组织工程技术研究中心江苏省泰州市225300

背景:骨组织工程支架孔径是评估其物理性能的重要因素,寻求孔径及力学性能二者的最佳结合点一直是骨组织工程亟待解决的问题。目的:制备不同孔径梯度的三维支架,并研究其对MC3T3-E1细胞生物学行为的影响。方法:将直径300,500,800μm的... 详细信息

背景:骨组织工程支架孔径是评估其物理性能的重要因素,寻求孔径及力学性能二者的最佳结合点一直是骨组织工程亟待解决的问题。目的:制备不同孔径梯度的三维支架,并研究其对MC3T3-E1细胞生物学行为的影响。方法:将直径300,500,800μm的蜡球造孔剂分别与羟基磷灰石混合,采用改良型粒子浸出法制备孔径均一的纳米羟基磷灰石三维支架,分别记为D300、D500、D800组支架;将3种直径的蜡球从小到大依次堆积,采用改良型粒子浸出法制备孔径梯度纳米羟基磷灰石三维支架,记为D-Gradient组支架,检测4组支架的孔隙率。将MC3T3-E1细胞分别接种于4组支架上,以细胞单独培养的为空白对照组,检测细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性、细胞黏附及细胞骨架重排与成骨分化标志性因子转录水平。结果与结论:(1)4组支架的孔隙率为60%-80%;(2)接种24 h后,各组支架均可促进MC3T3-E1细胞的增殖,增殖指数大小为:D-Gradient组>D500组>D800组>D300组>空白对照组;D300组、D500组、D-Gradient组支架均可促进MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶的分泌,碱性磷酸酶分泌量多少为:D300组>D500组>D-Gradient组>D800组≈空白对照组;D300组、D500组、D-Gradient组支架均可促进MC3T3-E1细胞骨桥蛋白与骨钙素m RNA的表达,两种基因表达量由高到低为:D300组>D500组D-Gradient组>D800组≈空白对照组;(3)接种48 h后的免疫荧光染色显示,与空白对照组相比,4支架上的MC3T3-E1细胞均呈现出较好的黏附及运动活性,黏着斑肌动蛋白荧光强度由高到低为:D-Gradient组>D500组>D800C组>D300组>空白对照组;(4)结果表明,孔径梯度纳米羟基磷灰石三维支架可促进MC3T3-E1细胞的生长、增殖、黏附及成骨分化。

关键词：羟基磷灰石梯度支架孔径孔隙率成骨分化增殖指数黏着斑骨桥蛋白骨钙素

整合素β3亚单位胞内区在骨桥蛋白诱导血管平滑肌细胞黏附和迁移中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第1期22卷 9-16页

作者：李菁菁温进坤韩梅陈英珠河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

为阐明整合素β3亚单位胞内区及其不同保守序列在骨桥蛋白(OPN)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中所起的作用,构建了整合素β3亚单位胞内区肽段真核表达载体(pEGFP-C3-β3CD),并人工合成了含有β3亚单位胞内区不同保守序列(NXXY)的... 详细信息

为阐明整合素β3亚单位胞内区及其不同保守序列在骨桥蛋白(OPN)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中所起的作用,构建了整合素β3亚单位胞内区肽段真核表达载体(pEGFP-C3-β3CD),并人工合成了含有β3亚单位胞内区不同保守序列(NXXY)的寡肽(肽-747和肽-759),通过导入VSMC,观察它们对OPN诱导VSMC黏附和迁移的影响.结果显示,整合素β3胞内区在VSMC中强制性表达可使细胞在OPN上的黏附和迁移明显下降(分别为对照组的34.3%和31.7%);导入肽-747、肽-759和肽-747+肽-759均可显著抑制VSMC的黏附和迁移,其中肽-747+肽-759的作用更强(分别为对照组的36.4%和31.1%).免疫荧光结果显示,在转染pEGFP-C3-β3CD或肽-747+肽-759的VSMC中,黏着斑蛋白的磷酸化水平降低,黏着斑形成明显减少.研究结果表明,整合素β3亚单位胞内区及其NXXY保守序列在黏着斑相关蛋白募集、黏着斑形成及VSMC黏附和迁移方面发挥重要作用.

关键词：整合素β3亚单位胞内区寡肽黏附迁移黏着斑

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干细胞迁移机理的近场扫描光学显微术研究

分析测试学报 2010年第6期29卷 548-552页

作者：陈家楠潘运龙丁晖覃莉蔡继业暨南大学生命科学技术学院生物纳米技术实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院普外科广东广州510632 暨南大学医学院组织胚胎学教研室广东广州510632

将内皮细胞生长因子(VEGF)置于甲基纤维素碟中形成VEGF的浓度梯度分布,并将人脐带间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)于此浓度梯度中培养,观察VEGF能否诱导MSCs定向迁移。应用近场扫描光学显微术(Near-field scanning optical m... 详细信息

将内皮细胞生长因子(VEGF)置于甲基纤维素碟中形成VEGF的浓度梯度分布,并将人脐带间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)于此浓度梯度中培养,观察VEGF能否诱导MSCs定向迁移。应用近场扫描光学显微术(Near-field scanning optical microscopy,NSOM)同时获取了VEGF诱导前后的MSCs的形貌和光学信息。结果表明,近场光学图观测到形貌图上所没有的黑色斑点,分析认为这些黑斑为细胞的黏着斑。近场光学图显示经过VEGF诱导后细胞的黏着斑数量明显增加。同时,对诱导前后干细胞的骨架蛋白进行免疫荧光标记并用共聚焦显微镜进行观察,结果表明细胞骨架由诱导前的无序状态转变为诱导后的有序状态,说明诱导后的干细胞处于迁移状态。光学超微结构图则显示了诱导后干细胞表面的光学细节比诱导前细胞大量增加,出现了大量直径约200 nm的光斑,这是由于细胞表面大量分泌黏附分子等蛋白分子引起的,这些结果为VEGF能够诱导MSCs进行定向迁移提供了实验依据和可视化证明。也表明NSOM不但能提供高分辨的光学分辨率,还可提供生物细胞精细结构的更深层次的光学信息。

关键词：近场光学显微镜间充质干细胞黏着斑

电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞的影响

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口腔疾病防治 2024年第3期32卷 169-177页

作者：蔡东轩李毅王岚张燕李广文张玉梅口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔医学重点实验室、第四军医大学口腔医院修复科陕西西安710032 西北有色金属研究院陕西西安710016

目的探讨电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的影响,为种植基台表面改性设计提供实验依据。方法根据试样不同表面进行分组:NC组(阴性对照,光滑表面无其他处理)、NM-1组(纳米网-1,1 mol/L NaO... 详细信息

目的探讨电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的影响,为种植基台表面改性设计提供实验依据。方法根据试样不同表面进行分组:NC组(阴性对照,光滑表面无其他处理)、NM-1组(纳米网-1,1 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)、NM-2组(纳米网-2,5 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)。扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)观察不同试样表面形貌及HGFs在其表面的黏附状态,接触角测量仪测定试样表面亲水性。CCK-8评估HGFs在不同试样表面的增殖情况;qRT-PCR检测HGFs在不同试样表面Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COL1A1)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COL3A1)、纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、黏着斑蛋白(vinculin,VCL)、整合素α2(integrinα2,ITGA2)、整合素β1(integrinβ1,ITGB1)等黏附相关基因表达水平;免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察HGFs在不同试样表面vinculin蛋白表达情况;天狼猩红染色评价HGFs在不同试样表面胶原纤维分泌合成情况。结果SEM观察到NM-1组和NM-2组表面形成有序均一的三维网状结构,网格直径NM-1组约为30 nm,NM-2组约为150 nm;NM-1组和NM-2组对比NC组,水接触角显著下降(P0.05)。SEM镜下可见HGFs黏附24 h后在各组试样表面均黏附良好,NM-1组和NM-2组细胞与NC组对比伸展面积更大,形态纤长,细胞伪足更发达。qRTPCR结果显示NM-1组中COL1A1、COL3A1、FN1、FAK、VCL等黏附相关基因表达水平显著高于NC组和NM-2组(P黏着斑数量最多(P<0.01)。天狼猩红染色结果显示NM-1组胶原纤维分泌合成量最高(P<0.0001)。结论Ti6Al4V经电化学脱合金改性后所构建的三维纳米网状结构有促进HGFs黏附增殖和胶原分泌合成的作用,其中网格直径约为30 nm的NM-1组对HGFs的促进作用明显。

关键词：电化学脱合金 Ti6Al4V 种植体基台表面改性三维网状结构人牙龈成纤维细胞细胞黏附细胞增殖黏着斑

含凝血酶原1型结构域的蛋白质1在颅内动脉瘤发生及破裂中的作用研究进展

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中国脑血管病杂志 2024年第12期21卷 856-864页

作者：文斌吴浩甘肃省天水市第一人民医院神经外科 741000

颅内动脉瘤破裂是造成蛛网膜下腔出血的首要病因,具有高病死率、高致残率的特点。电子显微镜下,颅内动脉瘤内膜表面内皮细胞的连接处可见小孔和扩大的间隙。黏着斑是连接细胞外的复杂大分子复合物结构,其作用为维持脑血管的完整性,含凝... 详细信息

颅内动脉瘤破裂是造成蛛网膜下腔出血的首要病因,具有高病死率、高致残率的特点。电子显微镜下,颅内动脉瘤内膜表面内皮细胞的连接处可见小孔和扩大的间隙。黏着斑是连接细胞外的复杂大分子复合物结构,其作用为维持脑血管的完整性,含凝血酶原1型结构域的蛋白质1(THSD1)和踝蛋白相互作用可将内皮细胞拴系至下层基底膜上,组装形成黏着斑并促进其成熟,以维持血管内膜完整。THSD1可通过细胞内吞途径及小干扰核糖核酸调节自身数量及功能,THSD1突变后其翻译蛋白THSD1功能异常,易于发生颅内动脉瘤。该文从THSD1基因的定位与功能、颅内动脉瘤发生的病理机制、THSD1与动脉瘤发生的关系及THDSI功能的调节等方面进行综述,以期为颅内动脉瘤的治疗提供新的思路和靶点。

关键词：颅内动脉瘤黏着斑 THSD1 综述