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鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

菌物系统 2000年第1期19卷 51-55页

作者：陈作红张志光张天晓湖南师范大学生命科学学院长沙410081

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物，每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带，获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性... 详细信息

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物，每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带，获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来，通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间，平均链锁聚类分析可将２６种鹅膏菌分为二大类，且一些具菌环和苞状菌托的种类聚在一起，与形态分类基本相吻合。

关键词：鹅膏菌属亲缘关系 RAPD分析物种鉴定

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西藏鹅膏菌属的分布特征

真菌学报 1991年第4期10卷 288-295页

作者：卯晓岚中国科学院微生物研究所北京100080

西藏地区已知鹅膏菌属(Amanita)真菌28种。西藏东南部的生态环境有利于该属种类的繁殖生长,约有90%以上的种集中分布在这里,同时反映了十分明显的垂直分布和对高山的适应特征。绝大多数种分布在海拔2500～3500m的森林带。另外该属全部... 详细信息

西藏地区已知鹅膏菌属(Amanita)真菌28种。西藏东南部的生态环境有利于该属种类的繁殖生长,约有90%以上的种集中分布在这里,同时反映了十分明显的垂直分布和对高山的适应特征。绝大多数种分布在海拔2500～3500m的森林带。另外该属全部种均属树木的外生菌根菌。本文还将鹅膏菌属的菌托初步划分为袋状型(Saccate type)、浅杯型(Vadosocupulatetype)、领口型(Collared type)、颗粒型(易碎型Granulate type)、小托型(Microvolvate type)、粉托型(Pulverulent type)等六种类型,并简要讨论了各种菌托类型与所处生态环境的适应性。

关键词：鹅膏菌属分布特征菌托类型西藏

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西藏鹅膏菌属的分类研究

真菌学报 1990年第3期9卷 206-217页

作者：卯晓岚中国科学院微生物研究所

本文报告了西藏地区鹅膏菌属(Amanita)的真菌26种。其中灰鳞鹅膏菌(Amanita griseofarinosa Hongo),红鹅膏菌[***(Peck)Glib.],浅杏黄鹅膏菌[***(Quél.)Kühn.＆ Romagn.],黄赭毒鹅膏菌(*** Atk.),黄毒蝇鹅膏菌(*** Atk.),史米斯鹅膏菌(*** Bas),褐黄鹅膏菌:(***.)等是我国新纪录种。西藏地区的首次新纪录13种。该属真菌均是树木的外生菌根真菌,有毒种多,具有重要的经济价值。

关键词：鹅膏菌属新纪录种分类西藏

纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法检测鹅膏菌属毒性相关内源性前体蛋白

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食品安全质量检测学报 2023年第21期14卷 147-156页

作者：王希希白玉李鹏昊李晓辉高舸王炼成都市疾病预防控制中心成都610041

目的建立纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法测定鹅膏菌属中MSDIN毒性相关前体蛋白的方法。方法样品经纯水提取、超滤分离后,采用StageTips C18进行样品除盐;以0.1%甲酸水溶液和含0.1%甲酸的乙腈/水(4:1,V:V)溶液为流动相,采用梯度洗脱方... 详细信息

目的建立纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法测定鹅膏菌属中MSDIN毒性相关前体蛋白的方法。方法样品经纯水提取、超滤分离后,采用StageTips C18进行样品除盐;以0.1%甲酸水溶液和含0.1%甲酸的乙腈/水(4:1,V:V)溶液为流动相,采用梯度洗脱方式,经AcclaimTMPepMapTM100 C18(70 mm×75μm,3μm)预富集,AcclaimTMPepMapTM100 C18(150 mm×75μm,3μm)分离,采用电喷雾离子源正离子模式测定,Protein Discover软件对蛋白质进行鉴定;分别对蛋白提取液种类、蛋白质纯化方法和蛋白酶种类进行对比和优化。结果优化前处理条件后选择纯水作为提取溶剂,提取液经Vivaspin Turbo 4(3 kDa)分离纯化和StageTips C18除盐后,样品在非酶解状态下进行分析;将本方法用于2017—2020年四川地区食物中毒事件中收集到的23株鹅膏菌属类蘑菇,共鉴定MSDIN毒性相关内源性前体蛋白50个;与市售8种可食用蘑菇比较,差异表达前体蛋白41个,其中13条前体蛋白为全部23株鹅膏菌属类蘑菇共有,可作为鹅膏菌属潜在的特征性靶标分子。结论该方法简单快速、特异性强,可作为形态学鉴定、DNA测序和毒素检测的补充方法,初步用于鹅膏菌属的快速识别。

关键词：纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法 MSDIN毒性相关内源性前体蛋白鹅膏菌属

基于DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究

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基于DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究

作者：白文明华南农业大学

学位级别：硕士

鹅膏菌属(Amanita)是大型真菌中分布较广的大属。目前所报道的蘑菇中毒事件中90%以上是由误食鹅膏菌属物种所引起,也是蘑菇中毒事件中致死率最高的种属。在毒蘑菇所引起的食物中毒事件中,蘑菇样品经过了加工食用而导致原始形态特性的丢... 详细信息

鹅膏菌属(Amanita)是大型真菌中分布较广的大属。目前所报道的蘑菇中毒事件中90%以上是由误食鹅膏菌属物种所引起,也是蘑菇中毒事件中致死率最高的种属。在毒蘑菇所引起的食物中毒事件中,蘑菇样品经过了加工食用而导致原始形态特性的丢失,因此无法使用形态学识别的方法对其进行物种鉴别。分子生物学技术因其高度的特异性和准确度,是目前应用最多的一类分类方法。其中,DNA条形码技术是物种鉴别以及用于发现新型物种的常用方法。为解决长久存储以及因加工食用所导致的样品基因组DNA发生的降解及质量低等问题,本研究对常见的、易误食的有毒鹅膏菌属,开发基于DNA条形码的有毒鹅膏菌属精确鉴别技术。主要研究内容如下:1)基于常规DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究本研究收集了27个鹅膏菌属物种共38份样本,提取样品基因组DNA,应用通用引物扩增其内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)、核糖体大亚基(Large Subunit Ribosomal,LSU)、RNA聚合酶的第二大亚基(the Second Largest Subunit of RNA Polymerase II,RPB2)、β-微管蛋白(β-tubulin)基因序列并进行Sanger双向测序,将得到的序列进行校对拼接后与NCBI的Gen Bank数据库中的参考序列进行比对鉴别物种来源;计算物种的种内、种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统发育树。研究结果表明,β-tubulin、ITS基因序列鉴别能力优于RPB2、LSU基因序列,可将β-tubulin与ITS两者联合使用用于鹅膏菌属的物种鉴别,为有毒蘑菇诱发的食源性中毒风险进行预警。2)基于微型DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究通过分析有毒鹅膏菌的内转录间隔区序列,设计了一对微型DNA条形码的通用引物(ITS-39F/278R),对43份鹅膏菌属样品进行PCR扩增及Sanger双向测序,将得到的序列进行校对拼接后与NCBI的Gen Bank数据库中的参考序列进行比对,通过计算物种的种内、种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统发育树,分析微型DNA条形码的鉴别能力及准确性。研究结果表明,设计的引物具有良好的通用性,43份鹅膏菌样品均能扩增出长度为290 bp的目的基因片段;微型DNA条形码能够准确地鉴别出43份鹅膏菌样品,与常规DNA条码鉴别结果完全一致。为进一步验证微型DNA条形码的适用性,对鹅膏菌样品进行静态模拟体外消化,使其发生一定程度的降解,结果表明所建立的微型DNA条形码能够对消化后的样品进行物种成分鉴别。本研究开发的微型DNA条形码在分析保存时间长久的鹅膏菌以及误食毒蘑菇后的呕吐物等场景中具有较大的应用潜力,可作为鹅膏菌属中毒事件中物种鉴定及溯源的优选条形码。3)利用HTML5制作鹅膏菌属物种信息二维码通过基于HTML5(超文本标记语言)对本实验所得物种序列信息以及形态特征等信息进行编码,并将其转化为二维码图像,利用不同终端移动设备进行扫描,即可获得样品的详细信息。将二维码技术与DNA条形码技术相结合,为每个鹅膏菌物种提供一个标准二维DNA条形码,实现了序列的信息化,将DNA条形码的应用提升到一个更加实用化的水平。综上,本研究建立了基于β-tubulin与ITS靶基因联合使用的常规DNA条形码技术的鹅膏菌属物种鉴别方法,为有毒蘑菇分类鉴别、亲缘关系分析提供一定的理论基础,并为有毒蘑菇诱发的食源性中毒风险进行预警提供技术支持。另外,针对加工食用后以及长久存储的样品,建立了基于ITS基因序列的微型DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别方法,可以为蘑菇中毒事件中中毒原因排查过程提供理论参考及技术支撑。

关键词：鹅膏菌属 DNA条形码微型DNA条形码二维码物种鉴别