纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法检测鹅膏菌属毒性相关内源性前体蛋白

作     者：王希希 白玉 李鹏昊 李晓辉 高舸 王炼 WANG Xi-Xi;BAI Yu;LI Peng-Hao;LI Xiao-Hui;GAO Ge;WANG Lian

作者机构：成都市疾病预防控制中心成都610041 

出 版 物：《食品安全质量检测学报》 (Journal of Food Safety and Quality)

年 卷 期：2023年第14卷第21期

页      面：147-156页

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 083202[工学-粮食、油脂及植物蛋白工程] 0703[理学-化学] 

基　　金：成都市医学科研课题项目(2021231) 

主　　题：纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法 MSDIN毒性相关内源性前体蛋白 鹅膏菌属 

摘      要：目的建立纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法测定鹅膏菌属中MSDIN毒性相关前体蛋白的方法。方法样品经纯水提取、超滤分离后,采用StageTips C18进行样品除盐;以0.1%甲酸水溶液和含0.1%甲酸的乙腈/水(4:1,V:V)溶液为流动相,采用梯度洗脱方式,经AcclaimTMPepMapTM100 C18(70 mm×75μm,3μm)预富集,AcclaimTMPepMapTM100 C18(150 mm×75μm,3μm)分离,采用电喷雾离子源正离子模式测定,Protein Discover软件对蛋白质进行鉴定;分别对蛋白提取液种类、蛋白质纯化方法和蛋白酶种类进行对比和优化。结果优化前处理条件后选择纯水作为提取溶剂,提取液经Vivaspin Turbo 4(3 kDa)分离纯化和StageTips C18除盐后,样品在非酶解状态下进行分析;将本方法用于2017—2020年四川地区食物中毒事件中收集到的23株鹅膏菌属类蘑菇,共鉴定MSDIN毒性相关内源性前体蛋白50个;与市售8种可食用蘑菇比较,差异表达前体蛋白41个,其中13条前体蛋白为全部23株鹅膏菌属类蘑菇共有,可作为鹅膏菌属潜在的特征性靶标分子。结论该方法简单快速、特异性强,可作为形态学鉴定、DNA测序和毒素检测的补充方法,初步用于鹅膏菌属的快速识别。