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鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 749-756页

作者：张景辉武景琦房立春刘涛吴家强于可响徐怀英吕俊峰艾武郭慧君邱建华亓丽红宋玲玲山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250131 山东农业大学动物科技学院山东济南250131 山东省农业科学院家禽研究所山东泰安271017

根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×10^(3... 详细信息

根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×10^(3)copies/μL。在鲁中、鲁西北及鲁南地区不同规模的养鹅场中随机采取320份样本,GAstV的阳性率为21.56%(69/320),NDRV的阳性率为3.44%(11/320),混合感染阳性率为2.81%(9/320),单一RT-PCR结果与双重RT-PCR方法一致。该方法的建立为快速诊断GAstV和NDRV提供了可靠的手段。

关键词：鹅星状病毒鹅源新型鸭呼肠孤病毒双重RT-PCR

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鹅星状病毒通用型TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国家禽 2024年

作者：陈立功穆英丽张诚潘保革范乐乐魏忠华王学静刘聚祥河北农业大学农业农村部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站河北省畜牧兽医研究所

为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法，试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针，采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度，在优化退火温度的... 详细信息

为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法，试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针，采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度，在优化退火温度的基础上，分别建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线，进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性，建立的方法用于临床样品的检测，并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示：优化后的反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40（或0.50）μmol/L，探针浓度均为0.50μmol/L，扩增线性范围分别为3.26×10～3～3.26×10～8拷贝/μL和7.09×10～3～7.09×10～8拷贝/μL，相关系数均为0.998；该方法可特异性检出两种GAstV，但对新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号；其检测限分别为3.26×10～2拷贝/μL和7.09×10～1拷贝/μL；组内变异系数和组间变异系数均低于3%。建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示，GAstV阳性率为90.57%(96/10～6)；而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明，建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。

关键词：鹅星状病毒荧光定量RT-PCR TaqMan探针

鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国家禽 2024年

作者：姚展杏王超林寅盛赵丹张嘉家伍辉吉朱婉君张济培陈济铛佛山天牧生物科技有限公司佛山科学技术学院生命科学与工程学院

为建立一种快速检测鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）Ⅰ型（GAstV-1）与Ⅱ型（GAstV-2）的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法，试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物，将PCR扩增... 详细信息

为建立一种快速检测鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）Ⅰ型（GAstV-1）与Ⅱ型（GAstV-2）的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法，试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物，将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体，构建重组质粒作为阳性质粒标准品，建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法，并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估，并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示：建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上，批间、批内重复变异系数均小于0.7%，最低检测限度均为10 copies/μL；该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增，同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应；该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%，其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份，仅GAstV-2阳性的有18份，仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明，建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测，并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。

关键词：鹅星状病毒 GAstV-1 GAstV-2 双重荧光定量PCR 雏鹅痛风

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鹅星状病毒研究进展

畜牧与兽医 2024年第6期56卷 144-150页

作者：周慧孙敏华刘荣昌廖明李林林华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广东广州510642 仲凯农业工程学院广东广州510225

鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)是近年来新发的一种传染性疾病的病原,引起我国多个省份主要养鹅地区暴发一种高致病率和高致死率的雏鹅痛风。发病的雏鹅以内脏和关节出现尿酸盐沉积为主要病变,该病可通过粪口和种蛋广泛的传播,给... 详细信息

鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)是近年来新发的一种传染性疾病的病原,引起我国多个省份主要养鹅地区暴发一种高致病率和高致死率的雏鹅痛风。发病的雏鹅以内脏和关节出现尿酸盐沉积为主要病变,该病可通过粪口和种蛋广泛的传播,给养鹅业造成巨大经济损失,目前尚无有效的防治手段。本文对GAstV的流行病学、致病性、诊断方法等研究进展进行综述,以期对雏鹅痛风疫苗研究及综合防控等提供参考。

关键词：鹅星状病毒流行现状致病性诊断方法

鹅星状病毒capsid蛋白对细胞因子的影响

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江苏农业科学 2024年第4期52卷 193-196页

作者：饶丹陈明睿刘佳音高赛楠何书海张宁董建国无信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 河南牧业经济学院河南郑州450046 河南丰源和普农牧股份有限公司河南漯河462000

为了解鹅星状病毒(GAstV)capsid蛋白对细胞因子的影响,试验将构建的pCMV-capsid真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果显示,capsid蛋白于1... 详细信息

为了解鹅星状病毒(GAstV)capsid蛋白对细胞因子的影响,试验将构建的pCMV-capsid真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果显示,capsid蛋白于12、36h显著抑制CCL2转录,12h显著促进CCL5表达,24h显著抑制CCL5表达;capsid蛋白于24、36h显著促进IL-1β的转录;capsid蛋白于24、36h显著抑制IFN-α的转录;capsid蛋白于36h显著促进TNF-α的转录;capsid蛋白于24h显著抑制IFITM1的转录,于36h显著促进IFITM1和IFITM2的转录。结果表明,GAstVcapsid蛋白过表达能够诱导IL-1β、TNF-α和IFITM的转录,抑制CCL2和IFN-α的转录;对于CCL5,capsid蛋白早期促进CCL5的转录,后期抑制CCL5的转录;对于IFITM1,capsid蛋白早期抑制IFITM1转录,后期促进IFITM1转录。

关键词：鹅星状病毒细胞因子转录 RdRp蛋白

鹅星状病毒RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响

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江苏农业科学 2024年第7期52卷 164-168页

作者：饶丹尹磊吴佩王媛媛何书海张宁董建国信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 河南牧业经济学院河南郑州450046 河南丰源和普农牧股份有限公司河南漯河462000

为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,... 详细信息

为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h极显著抑制CCL2转录,12 h极显著促进CCL5表达,24、36 h极显著抑制CCL5表达(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24、36 h极显著促进IL-1β转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12 h极显著促进IFN-α的转录,于24、36 h极显著抑制IFN-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h显著或极显著抑制TNF-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24 h极显著抑制IFITM1转录(P<0.01),于36 h显著抑制IFITM1转录(P<0.05),于12、36 h极显著促进IFITM2转录(P<0.01),于24 h极显著抑制IFITM2的转录(P<0.01)。表明GAstV RdRp蛋白过表达能够诱导IL-1β的转录,抑制CCL2、TNF-α和IFITM1的转录;GAstV RdRp蛋白早期促进CCL5和IFN-α的转录,后期抑制CCL5和IFN-α的转录;GAstV RdRp蛋白早期和晚期促进IFITM2转录,中期抑制IFITM2转录。

关键词：鹅星状病毒细胞因子转录 RdRp蛋白

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一株基因Ⅱ型鹅星状病毒的分离鉴定及培养特性

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福建农业学报 2024年第4期39卷 378-386页

作者：兰琴刘荣昌张佳雪陈炜焦文龙梁齐章江南松万春和程龙飞陈红梅傅秋玲傅光华黄瑜福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福建福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

【目的】明确鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的致病性和体外培养特性。【方法】对广东某鹅场表现为内脏和关节痛风的发病鹅组织样品进行病原学检测、病毒分离鉴定、病毒基因序列测定与分析、病毒培养特性及致病性研究。【结果】从... 详细信息

【目的】明确鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的致病性和体外培养特性。【方法】对广东某鹅场表现为内脏和关节痛风的发病鹅组织样品进行病原学检测、病毒分离鉴定、病毒基因序列测定与分析、病毒培养特性及致病性研究。【结果】从中分离到1株鹅星状病毒,命名为GD2208株;ORF2基因核苷酸序列比对分析显示,该毒株与基因Ⅱ型鹅星状病毒(GAstV-Ⅱ)参考株同源性最高,为97.4%~99.1%;进化树分析显示该毒株与GAstV-Ⅱ参考株处于同一进化分支。动物回归试验显示,以该毒株感染3日龄雏鹅后致死率为20%,感染鹅临床症状、剖检病变及病理组织学变化与自然发病鹅相似。禽胚及细胞适应性研究结果显示,该毒株能在鹅胚中稳定增殖,但盲传4代后仍无法适应SPF鸡胚和番鸭胚;病毒在GEK和LMH细胞中均能稳定增殖且可见明显细胞病变,在DF-1上可稳定繁殖,但盲传至8代后仍未见细胞病变。【结论】本研究自表现痛风症状雏鹅中分离到1株GAstV-Ⅱ毒株,该毒株感染3日龄雏鹅可发生典型痛风症状,对鹅胚、GEK、LMH和DF-1细胞均有一定适应性,以上结果为进一步开展GAstV的致病机制、疫苗和药物研发奠定了基础。

关键词：鹅星状病毒分离鉴定培养特性

一株新型鹅星状病毒HNxy2111株全基因组测序分析

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中国家禽 2024年

作者：董建国麻冰洁王瑞芦一丹杨海倩杨大苗梁自怡王念念饶丹焦凤超张宁何书海信阳农林学院动物科技学院河南丰源和普农牧股份有限公司河南牧业经济学院

为分析信阳地区鹅星状病毒（GAstV）的遗传变异情况，研究从信阳某鹅场痛风病鹅采集病料，进行病原分离鉴定和全基因组扩增测序，获得GAstV基因组，随后进行遗传进化和同源性分析。结果显示：分离一株GAstV，命名为HNxy2111，基因组全长... 详细信息

为分析信阳地区鹅星状病毒（GAstV）的遗传变异情况，研究从信阳某鹅场痛风病鹅采集病料，进行病原分离鉴定和全基因组扩增测序，获得GAstV基因组，随后进行遗传进化和同源性分析。结果显示：分离一株GAstV，命名为HNxy2111，基因组全长7 175 bp;HNxy2111基因组及ORF2基因均与参考毒株G519亲缘关系最近，处于同一分支，属于GAstV-Ⅱ型；HNxy2111基因组、ORF1a、ORF1b编码氨基酸序列与GAstV-Ⅱ型中的G519同源性最高，均为99.2%。ORF1b编码的氨基酸序列与GD AHAU2同源性最高，为100%。与G519相比，HNxy2111 ORF1a、ORF1b和ORF2编码的蛋白质分别发生了8处、3处和5处突变。综上所述，HNxy2111属于GAstV-Ⅱ型，与国内经典鹅星状病毒有较近的遗传关系，ORF1a、ORF1b和ORF2编码的蛋白有一定的突变。

关键词：鹅星状病毒基因组遗传进化分析同源性分离鉴定

新疆地区鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

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中国兽医学报 2024年第7期44卷 1401-1407页

作者：肖海侠张凌王燕马万鹏阿斯也木·亚森高锦苏战强新疆农业大学动物医学学院沙雅县红旗镇畜牧兽医站昆仑绿源鹅业养殖科技有限公司

为了解新疆和田地区鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)的感染情况和分子遗传学特征，无菌采集和田县、于田县和皮山县3个鹅场死亡雏鹅的内脏及肛拭子，通过RT-PCR对GAstV进行检测；应用LMH细胞进行病毒分离鉴定，并对分离株进行全基... 详细信息

为了解新疆和田地区鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)的感染情况和分子遗传学特征，无菌采集和田县、于田县和皮山县3个鹅场死亡雏鹅的内脏及肛拭子，通过RT-PCR对GAstV进行检测；应用LMH细胞进行病毒分离鉴定，并对分离株进行全基因组测序与遗传特征分析。结果显示：GAstV在上述地区的总阳性率为11.25%(65/578);通过病毒分离鉴定出2株GAstV,命名为GAstV/XJHT-1和GAstV/XJHT-2。序列测定显示2株病毒的基因组长为7 190、7 125 bp;全基因组同源性分析显示2个分离株均与GAstV-1和GAstV-2的同源性均高于95%,与其他来源(鸡、鸭、火鸡)的同源性为54.1%～61.5%。遗传进化分析显示，分离的GAstV与河南和安徽的GAstV分离株遗传距离较近，表明分离株GAstV可能源于上述两地引进的雏鹅苗或鹅蛋。本试验为进一步研制疫苗或防控产品提供了依据。

关键词：鹅星状病毒分离鉴定全基因组测序同源性遗传进化