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鱼鳔类肝素的分离纯化与结构鉴定

食品科学 2019年第15期40卷 84-91页

作者：周斯仪钟赛意苏伟明杜振兴陈建平洪鹏志章超桦广东海洋大学深圳研究院广东深圳518108 广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 广东省水产品加工与安全重点实验室广东湛江524088 广东省海洋生物制品工程实验室广东湛江524088

本研究以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素化合物,采用阴离子交换树脂吸附、氯化钠溶液梯度洗脱和醇沉法进行分离纯化;并进一步分析其结构特征,分别通过紫外光谱法、高效凝胶色谱分析其纯度和分子质量,醋酸纤维素薄膜电泳初步鉴定其种类,... 详细信息

本研究以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素化合物,采用阴离子交换树脂吸附、氯化钠溶液梯度洗脱和醇沉法进行分离纯化;并进一步分析其结构特征,分别通过紫外光谱法、高效凝胶色谱分析其纯度和分子质量,醋酸纤维素薄膜电泳初步鉴定其种类,柱前衍生-高效液相色谱法分析其单糖组成,傅里叶变换红外光谱分析其官能团结构,酶裂解-质谱/质谱法测定其二糖组成,核磁共振鉴定其一级结构。结果显示:鱼鳔类肝素的得率为(2.21±0.03) mg/g,纯度较高,类肝素含量为(85.79±0.63)%,分子质量约为84 000 u;单糖组成为葡萄糖醛酸(glucuronic acid,GlcA)和N-乙酰基半乳糖胺(N-acetylgalactosamine,GalNAc),同时含有少量的艾杜糖醛酸、半乳糖;电泳位移与硫酸软骨素相似,且具有羧基、乙酰氨基、硫酸基轴向伸缩等特征吸收峰。最终确定鱼鳔类肝素主要组成是由重复的二糖单位[→4GlcUAβ1→3GalNAc(4S)β1→]构成的硫酸软骨素A。

关键词：鱼鳔类肝素分离纯化结构鉴定

TGF-β/Smads信号通路介导脯氨酸促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积

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水生生物学报 2022年第11期46卷 1649-1657页

作者：荣华李德强马敏伟豆腾飞史庆超孔令富毕保良宁丽军华南农业大学海洋学院广州510642 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 内江师范学院长江上游鱼类资源保护与利用四川省重点实验室内江641112

为了进一步验证转化生长因子(TGF-β)/Smads信号通路在脯氨酸(Pro)促进鱼鳔胶原蛋白沉积中的作用,研究利用TGF-β/Smads通路抑制剂干扰,分析干扰前后鱼鳔中胶原蛋白含量及相关基因转录水平的变化。根据前期实验获得的Pro最佳添加量,制... 详细信息

为了进一步验证转化生长因子(TGF-β)/Smads信号通路在脯氨酸(Pro)促进鱼鳔胶原蛋白沉积中的作用,研究利用TGF-β/Smads通路抑制剂干扰,分析干扰前后鱼鳔中胶原蛋白含量及相关基因转录水平的变化。根据前期实验获得的Pro最佳添加量,制定饲料配方,饲喂浅色黄姑鱼1月后,通过腹腔注射氧化苦参碱(Oxymatrine)为期1个月。在实验结束后,测量各项指标,评估干扰前后, Pro促进鱼鳔胶原蛋白沉积的效果及变化。实验结果表明:Pro能显著上调TGF-β/Smads通路中相关基因的表达,并促进鱼鳔胶原蛋白沉积,Oxymatrine干扰显著下调了TGF-β/Smads通路中相关基因(Col1α1、Col1α2、TGF-β和Smad2)表达,同时导致鱼鳔中胶原蛋白沉积下降。由此推断Pro通过激活TGF-β/Smads通路促进鱼鳔中胶原蛋白沉积,而Oxymatrine干扰抑制了TGF-β/Smads通路,导致Smad2与Col1α2启动子结合受阻,进而下调了Col1α2基因的转录,从而降低鱼鳔中胶原蛋白的沉积。综上表明, TGF-β/Smads信号通路在Pro促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积过程中起着重要调控作用,其中Col1α1、Col1α2、TGF-β和Smad2扮演着重要角色,研究结果可为鱼类胶原蛋白代谢的营养调控提供新思路和新方法。

关键词：脯氨酸 TGF-β/Smads信号通路鱼鳔胶原蛋白浅色黄姑鱼

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鱼鳔胶原蛋白的研究进展

大连海洋大学学报 2020年第1期35卷 31-38页

作者：李玉玲范志强刘雯恩王梅文周艳芳彭新生广东医科大学药学院广东东莞523808 广东医科大学生物医药产业化协同创新中心广东东莞523808 广东医科大学海洋医药研究院广东湛江524023

鱼鳔是鱼类加工产生的重要副产物,来源丰富,利用酸法、酶法、热水法、盐法、碱法和发酵法从鱼鳔中提取出的胶原蛋白具有免疫原性低、组织相容性高、细胞活化能力强、可降解性好等多种优良生物学性状,在骨科治疗、细胞培养、伤口愈合、... 详细信息

鱼鳔是鱼类加工产生的重要副产物,来源丰富,利用酸法、酶法、热水法、盐法、碱法和发酵法从鱼鳔中提取出的胶原蛋白具有免疫原性低、组织相容性高、细胞活化能力强、可降解性好等多种优良生物学性状,在骨科治疗、细胞培养、伤口愈合、药物制作、生物发电等医学领域展示出巨大的应用价值。通过综述不同来源鱼鳔胶原蛋白的多种常用制备工艺和结构特征,阐述了其生物医学应用,分析了目前研究中存在的问题并展望了未来应用发展,以期利用副产品鱼鳔填补医用领域的空缺。

关键词：鱼鳔胶原蛋白制备医学应用

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鱼鳔质量标准的提升

中成药 2020年第5期42卷 1144-1149页

作者：段秀俊刘培杨超孙铭忆何娟娟范姣姣段青青山西中医药大学山西晋中030619

目的提升鱼鳔质量标准.方法通过性状鉴别、显微鉴别、TLC进行定性研究,2015年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、总氮含有量,全自动氨基酸分析仪测定17种氨基酸(Asp、Thr、Ser、Glu、Pro、Gly、Cys、Ala、Val、Met、... 详细信息

目的提升鱼鳔质量标准.方法通过性状鉴别、显微鉴别、TLC进行定性研究,2015年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、总氮含有量,全自动氨基酸分析仪测定17种氨基酸(Asp、Thr、Ser、Glu、Pro、Gly、Cys、Ala、Val、Met、Ile、Leu、Tyr、Phe、Lys、His、Arg)含有量.结果海鱼鱼鳔在形状、大小、颜色等方面与河鱼鱼鳔有所区别.显微鉴别特征为蛋白质及平滑肌纤维.TLC斑点清晰,分离度理想.水分、总灰分、酸不溶性灰分、总氮含有量范围分别为5.98% ~ 12.01%、0.23% ~ 3.49%、0.03% ~0.85%、14.16% ~ 18.45%.17种氨基酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 7),平均加样回收率97.80%~ 101.70%,RSD 2.02%~2.50%,总含有量范围为48.60~139.1 mg/g.结论该方法专属性强,重复性好,可用于鱼鳔的质量控制.

关键词：鱼鳔氨基酸性状鉴别显微鉴别 TLC 2015年版《中国药典》全自动氨基酸分析仪

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鱼鳔胶原肽的制备工艺及功能活性研究进展

食品工业科技 2022年第6期43卷 436-442页

作者：董旭赵峡刘楚怡中国海洋大学医学院药学院海洋药物教育部重点实验室山东青岛266003 青岛海洋生物医药研究院山东青岛266000

我国渔业资源丰富,在水产加工过程中,大部分鱼鳔都被当作废料丢弃。研究发现,鱼鳔中含有丰富的胶原蛋白,经过酸、蛋白酶、热水等处理后可以提取得到,而鱼鳔经过蛋白酶进一步水解后可得到具有多种生理活性和功能的小分子肽。根据研究报... 详细信息

我国渔业资源丰富,在水产加工过程中,大部分鱼鳔都被当作废料丢弃。研究发现,鱼鳔中含有丰富的胶原蛋白,经过酸、蛋白酶、热水等处理后可以提取得到,而鱼鳔经过蛋白酶进一步水解后可得到具有多种生理活性和功能的小分子肽。根据研究报道鱼鳔胶原蛋白寡肽具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳等功能,鱼鳔胶原蛋白在食品、医药等领域有着巨大潜力。本文对近年来国内外对于鱼鳔胶原蛋白及寡肽的制备、功能活性进行了总结,为以后鱼鳔胶原蛋白方面的研究提供参考。

关键词：鱼鳔胶原肽制备功能活性

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脯氨酸对浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积及相关基因表达的影响

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动物营养学报 2022年第5期34卷 3184-3193页

作者：荣华杨钰香王晓雯严晖高宇毕保良史庆超孔令富云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南省高校高原渔业资源保护与可持续利用重点实验室昆明650201 内江师范学院长江上游鱼类资源保护与利用四川省重点实验室内江641112

鱼鳔富含胶原蛋白,而脯氨酸(Pro)是胶原蛋白合成所需的底物。本试验旨在研究饲料中添加不同水平Pro对浅色黄姑鱼生长、胶原蛋白沉积及相关基因表达的影响。试验选用450尾初始体重为(8.64±0.14) g的浅色黄姑鱼,随机分为6个组,分别投喂添... 详细信息

鱼鳔富含胶原蛋白,而脯氨酸(Pro)是胶原蛋白合成所需的底物。本试验旨在研究饲料中添加不同水平Pro对浅色黄姑鱼生长、胶原蛋白沉积及相关基因表达的影响。试验选用450尾初始体重为(8.64±0.14) g的浅色黄姑鱼,随机分为6个组,分别投喂添加0、5、10、15、20和25 g/kg Pro的等氮等脂饲料,每组3个重复(网箱),每个重复25尾鱼。试验期8周。试验结束后,测定浅色黄姑鱼的生长性能、各组织中的胶原蛋白及氨基酸含量以及与胶原蛋白代谢相关的基因相对表达量。结果表明:饲料中添加不同水平Pro对浅色黄姑鱼生长性能没有显著影响(P>0.05),但能显著促进鱼鳔中胶原蛋白沉积(P鱼鳔中部分氨基酸含量(P鱼鳔胶原蛋白含量估算出饲料中Pro最适添加水平为14.88 g/kg。另外,鱼鳔中Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)和脯氨酰4-羟化酶亚基α1(P4HA1)基因的相对表达量随着饲料中Pro添加水平的提高而提高(P鱼鳔胶原蛋白的沉积,最佳的添加水平为14.88 g/kg,且Pro促进鱼鳔胶原蛋白沉积潜在受到Ⅰ型胶原蛋白α链基因的调控。

关键词：浅色黄姑鱼鱼鳔脯氨酸胶原蛋白基因表达

nano-ZnO对斑马鱼鱼鳔发育毒性效应研究

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环境科学学报 2020年第1期40卷 290-298页

作者：刘涛杜青平秦春怡林俊熙彭皇强石瑛雷施恩周奕彤广东工业大学环境科学与工程学院广州510006 太原师范学院生物系太原030619 Annandale-on-Hudson Bard College New YorkAmerica 12504

根据鱼鳔发育的不同阶段,从受精后0 h(0 hours post fertilization,0 hpf)开始对5个发育阶段(0 hpf~孵化前、0~120 hpf、0~168 hpf、孵化后~120 hpf、120~168 hpf)的斑马鱼进行nano-ZnO暴露实验,研究不同浓度的nano-ZnO对斑马鱼鱼鳔的影... 详细信息

根据鱼鳔发育的不同阶段,从受精后0 h(0 hours post fertilization,0 hpf)开始对5个发育阶段(0 hpf~孵化前、0~120 hpf、0~168 hpf、孵化后~120 hpf、120~168 hpf)的斑马鱼进行nano-ZnO暴露实验,研究不同浓度的nano-ZnO对斑马鱼鱼鳔的影响.结果表明,nano-ZnO悬浮液中溶解的Zn^2+不是导致斑马鱼死亡和鱼鳔缺损的唯一或主要原因.nano-ZnO暴露浓度越高,斑马鱼的死亡率和鱼鳔缺损率越高,存在剂量-效应关系.15 mg·L^-1 nano-ZnO可造成90%的斑马鱼鱼鳔缺损和死亡,10 mg·L^-1 nano-ZnO可导致斑马鱼鱼鳔面积缩小70%.斑马鱼鱼鳔早期发育阶段(0~168 hpf)对nano-ZnO敏感度大小为:出芽阶段(0 hpf~孵化前)>充气阶段(孵化后~120 hpf)>充气完成阶段(120~168 hpf).斑马鱼鱼鳔的发育面积和发育时间也受nano-ZnO暴露染毒的影响而发生变化.斑马鱼死亡率和鱼鳔缺损率(鱼鳔发育)之间存在相关性(r=0.978,p鱼鳔的发育缺损是造成斑马鱼胚胎死亡的主要原因之一,但nano-ZnO对斑马鱼鱼鳔的影响机理,尤其是对鱼鳔出芽阶段和充气阶段的致毒机理需要进一步研究.

关键词：纳米氧化锌斑马鱼鱼鳔发育阶段毒性效应

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鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性研究

食品与机械 2017年第9期33卷 9-14页

作者：郑婷婷涂宗财唐平平张露沙小梅王辉江西师范大学功能有机小分子教育部重点实验室江西南昌330022 江西师范大学生命科学学院江西南昌330022 南昌大学食品与科学技术国家重点实验室江西南昌330047

以DPPH自由基、OH自由基清除能力和还原力为评价指标,探究pH、温度、食品配料、金属离子、防腐剂以及体外模拟胃、肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性的影响。结果表明:鱼鳔胶原肽在酸性环境中抗氧化活性保持得较好,在碱性条件下丧失较快... 详细信息

以DPPH自由基、OH自由基清除能力和还原力为评价指标,探究pH、温度、食品配料、金属离子、防腐剂以及体外模拟胃、肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性的影响。结果表明:鱼鳔胶原肽在酸性环境中抗氧化活性保持得较好,在碱性条件下丧失较快;鱼鳔胶原肽具有较强的耐热性,高温不会降低其抗氧化活性;蔗糖、葡萄糖以及防腐剂(苯甲酸钠和山梨酸钾)对鱼鳔胶原肽的活性影响不明显,但添加高浓度的食盐会降低鱼鳔胶原肽的抗氧化活性;金属离子Zn^(2+)、Cu^(2+)对鱼鳔胶原肽抗氧化活性的影响较大,Ca^(2+)的影响较小,K^+、Mg^(2+)无显著影响;模拟胃肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化活性无显著影响。

关键词：鱼鳔胶原肽抗氧化活性稳定性

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鱼鳔类肝素提取工艺优化及抗凝血活性研究

食品与机械 2018年第7期34卷 151-157,219页

作者：周斯仪屈义钟赛意杜振兴苏伟明谌素华洪鹏志吴小禾广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院广东深圳518108 广东省水产品加工与安全重点实验室广东湛江524088 中山火炬职业技术学院广东中山528436

以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素,研究其提取工艺参数和体外抗凝血活性。在单因素试验基础上,以加酶量、酶解时间和温度为影响因子,类肝素得率为响应值,采用响应曲面法优化鱼鳔类肝素(HSB)提取工艺,并通过测定活化部分凝血活酶时间(AP... 详细信息

以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素,研究其提取工艺参数和体外抗凝血活性。在单因素试验基础上,以加酶量、酶解时间和温度为影响因子,类肝素得率为响应值,采用响应曲面法优化鱼鳔类肝素(HSB)提取工艺,并通过测定活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和血浆凝血酶时间(TT)评价其抗凝血活性。结果显示,最优提取条件为2709碱性蛋白酶添加量5.4 mg/mL,酶解温度50℃,时间20h,在该条件下类肝素得率为(1.79±0.05)%,与预测值相差3.24%;同时,所提取的类肝素具有一定的抗凝血活性,并通过外源性凝血途径和共同凝血途径发挥作用。

关键词：鱼鳔类肝素酶法抗凝血活性