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大熊猫和泡菜样品来源魏斯氏菌的益生特性分析

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大熊猫和泡菜样品来源魏斯氏菌的益生特性分析

作者：王海娟成都医学院

学位级别：硕士

目的分离鉴定来自成都大熊猫粪便及湖南泡菜样品中的魏斯氏菌(Weissella),并对其益生性质进行分析。材料与方法(1)使用菌落观察法、生理生化鉴定法及16S rRNA鉴定法对来自大熊猫粪便及泡菜样品的魏斯氏菌进行分离鉴定。对分离鉴定出来... 详细信息

目的分离鉴定来自成都大熊猫粪便及湖南泡菜样品中的魏斯氏菌(Weissella),并对其益生性质进行分析。材料与方法(1)使用菌落观察法、生理生化鉴定法及16S rRNA鉴定法对来自大熊猫粪便及泡菜样品的魏斯氏菌进行分离鉴定。对分离鉴定出来的魏斯氏菌进行耐酸和耐胆盐实验,并测定其β-葡糖苷酶活性,探讨魏斯氏菌的益生性质。(2)通过PCR扩增魏斯氏菌基因组中的β-葡糖苷酶基因,连接电转化到大肠杆菌(Escherichia coli DH5α)后提取质粒送成都擎科梓熙生物技术有限公司测序。将β-葡糖苷酶基因的PCR扩增片段和克隆载体pET22b双酶切后进行连接,电转化到大肠杆菌(*** BL21)。IPTG诱导重组酶的表达并测定其酶活,对包涵体表达的重组酶进行纯化复性。(3)对分离鉴定的魏斯氏菌提取质粒,胶回收分离纯化质粒条带,将纯化后的质粒进行测序,并对测序结果进行序列分析。结果(1)从大熊猫粪便样品中分离出1株食窦魏斯氏菌(***),从泡菜样品中分离出4株融合魏斯氏菌(***)。5株魏斯氏菌均能发酵纤维二糖,均能在pH 3.0的条件下生长;融合魏斯氏菌QJ013及HH053对胆盐耐受性较好,在0.2%胆盐条件下能够生长。(2)从食窦魏斯氏菌M2中克隆得到β-葡糖苷酶基因并在大肠杆菌中得到表达。该基因与已知菌株*** strain 37的β-葡糖苷酶基因的同源性为93%。(3)从融合魏斯氏菌QJ012中分离得到一个质粒pQJ012,其核苷酸序列同食窦魏斯氏菌中的pJY33和pKLCA的相似性分别为93%、92%。ORF1编码复制蛋白(Rep),该复制蛋白氨基酸序列与质粒pJY33和pKLCA的相似性分别为91%、85%。结论本实验共分离得到5株魏斯氏菌,首次从大熊猫肠道中分离得到食窦魏斯氏菌。5株魏斯氏菌均具有一定的耐酸性(pH 3.0),QJ013和HH053能耐受0.2%胆盐,符合益生菌的一般益生性质。分离得到的5株魏斯氏菌均能降解纤维二糖,我们从来自大熊猫肠道的食窦魏斯氏菌M2中克隆得到β-葡糖苷酶基因并在大肠杆菌中得到表达,说明食窦魏斯氏菌可能参与了宿主体内纤维素的消化过程。从融合魏斯氏菌QJ012中分离得到一个质粒pQJ012,我们推定pQJ012的复制方式为滚环复制,属于滚环复制pT181家族成员,尚未发现该质粒编码相关益生功能蛋白。

关键词：魏斯氏菌益生性质 β-葡糖苷酶质粒

酱曲源魏斯氏菌的筛选及其体外安全性与益生性研究

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酱曲源魏斯氏菌的筛选及其体外安全性与益生性研究

作者：魏梓晴佛山科学技术学院

学位级别：硕士

魏斯氏菌(Weissella)是发酵食品中常见的乳酸菌,具有多种益生特性且对食品发酵进程和风味形成至关重要,颇具应用前景。魏斯氏菌作为酱油酿造过程中的优势细菌,其对优化酱油生产工艺和提升酱油品质具有重要作用。酿造酱油的第一步是制曲... 详细信息

魏斯氏菌(Weissella)是发酵食品中常见的乳酸菌,具有多种益生特性且对食品发酵进程和风味形成至关重要,颇具应用前景。魏斯氏菌作为酱油酿造过程中的优势细菌,其对优化酱油生产工艺和提升酱油品质具有重要作用。酿造酱油的第一步是制曲,且后续发酵的大部分微生物来自酱曲,筛选酱曲源安全且具有益生特性的魏斯氏菌,可为靶向调控魏斯氏菌提升酱油品质提供科学依据,促进魏斯氏菌在传统发酵食品的有效应用。本课题基于高通量测序技术分析酱曲发酵过程中微生物群落结构及种群演替规律;通过传统可培养法分离出酱曲核心微生物,筛选并鉴定出魏斯氏菌;通过吲哚实验、溶血实验、产生物胺实验、毒力基因检测、药敏试验验证魏斯氏菌的安全性;筛选安全性好的魏斯氏菌进行体外模拟胃液实验、模拟胆盐实验、模拟肠液实验、体外黏附能力测定等益生性研究。主要研究结果如下:(1)基于高通量测序技术确定了发酵时间对微生物群落结构变化的影响及不同发酵阶段的核心微生物。结果表明,发酵0 h细菌群落丰度最大,48 h的群落多样性最高;酱曲样品主要的细菌门有3类(厚壁菌门、蓝细菌门和变形菌门);主要的细菌属有7类(魏斯氏菌属、norank＿f＿norank＿o＿Chloroplast、葡萄球菌属、norank＿f＿Mitochondria、库特氏菌属、明串珠菌属和泛菌属),其中魏斯氏菌属是整个酱曲发酵过程的绝对优势菌属;发酵中后期氨基酸代谢、碳水化合物代谢的相对丰度较前期有明显增加。(2)通过生理生化鉴定与分子生物学鉴定相结合的方法,从3份酱曲样品中共分离出61株魏斯氏菌,其中融合魏斯氏菌54株,食窦魏斯氏菌4株,类肠膜魏斯氏菌3株。(3)通过体外安全性评价方法分析了61株魏斯氏菌的安全性。结果表明,所有魏斯氏菌均不产生吲哚类物质;部分菌株为α溶血,产酪胺、尸胺、腐胺阳性菌株,携带cyl A、gel E、asa1毒力基因;对氨苄西林、红霉素、四环素、氯霉素、克林霉素敏感,对万古霉素耐药,对卡那霉素、头孢噻肟、诺氟沙星有不同程度的耐药情况。经综合评价安全的菌株有13株,其中融合魏斯氏菌11株,食窦魏斯氏菌1株,类肠膜魏斯氏菌1株。(4)通过体外益生性评价方法分析了13株安全的魏斯氏菌的益生特性。结果表明,部分魏斯氏菌具有较好的胃液、胆盐、肠液耐受性和良好的自凝聚力、疏水能力。综合以上结果,*** JQ11、JQ70、JQ79和*** JQ109在益生特性评估中优良,推测这4株菌能够顺利通过胃肠道环境并定植其中,具备在体内发挥益生性质的潜力。本论文通过对酱油制曲阶段优势细菌魏斯氏菌的系统研究,共分离出魏斯氏菌61株,经过体外安全性评价较安全的有13株,其中*** JQ11、JQ70、JQ79和*** JQ109表现出较好的益生性。研究结果体现了魏斯氏菌在消化系统中的益生效果,为其作为益生菌的开发利用等研究提供了理论依据,同时为提升酱油品质、推动传统发酵食品行业发展提供了新方向。

关键词：酱曲高通量测序魏斯氏菌安全性益生性

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魏斯氏菌的研究现状

成都医学院学报 2014年第6期9卷 747-750页

作者：王海娟戴雨珂潘渠成都医学院病原生物学教研室成都610500 成都医学院公共卫生系成都610500

魏斯氏菌（Weissella）属于乳酸菌（lactic acid bacteria）,其在微生物学、医药学、发酵、工业及食品加工等方面的作用近年来开始受到研究者的关注。本文主要对魏斯氏菌中的质粒、β-葡糖苷酶、噬菌体及其益生作用等作一综述。1魏斯氏... 详细信息

魏斯氏菌（Weissella）属于乳酸菌（lactic acid bacteria）,其在微生物学、医药学、发酵、工业及食品加工等方面的作用近年来开始受到研究者的关注。本文主要对魏斯氏菌中的质粒、β-葡糖苷酶、噬菌体及其益生作用等作一综述。1魏斯氏菌的主要特征目前GenBank数据库中（http：//***/genbank/）魏斯氏菌属已命名的有15个种。

关键词：魏斯氏菌质粒 β-葡糖苷酶益生作用

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魏斯氏菌质粒的初步研究

魏斯氏菌质粒的初步研究

辣白菜中分离含内源性质粒的魏斯氏菌及其鉴定

遗传学进步促进粮食安全与人口健康高峰论坛

作者：金红星河北工业大学化工学院生物工程系

为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品,在低温下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。辣白菜进行二段发酵,首先将洗净的大白菜用盐水浸泡,然后腌渍... 详细信息

为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品,在低温下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。辣白菜进行二段发酵,首先将洗净的大白菜用盐水浸泡,然后腌渍好的大白菜中添加辣椒面、大蒜、生姜、芝麻等调味品继续发酵。韩国的普通成年人平均每天消耗50～200g辣白菜。将辣白菜汁液均匀涂布在含2%(m/V)CaCO的MRS平板上,30℃恒温培养箱中培养24～36h,在国内首次分离获得了魏斯氏菌。通过对其进行镜检、生理生化特性检测以及16SrDNA序列的系统发育树分析确定其分类地位。结果表明它属于Weissella cibaria,命名为kimshi006,在NCBI上的登录号为HM369807。

关键词：辣白菜魏斯氏菌质粒分析

来源： cnki会议评论

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中国酿造 2012年第1期31卷 77-79页

作者：金红星杨希寅成文玉河北工业大学化工学院天津300130

为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品,在低温条件下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。将辣白菜汁液均匀涂布在含2%(m/v)CaCO3的MRS平板上,30℃... 详细信息

为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品,在低温条件下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。将辣白菜汁液均匀涂布在含2%(m/v)CaCO3的MRS平板上,30℃恒温培养箱中培养24h～36h,在中国内地首次分离获得了魏斯氏菌。通过对该菌进行镜检、生理生化特性检测以及16S rDNA序列的系统发育树分析确定其分类地位。结果表明其属于Weissella cibaria,命名为kimshi006,在NCBI上的登录号为HM369807。这一魏斯氏菌菌株含有2条内源性质粒,其大小分别为大约3000bp和8000bp。

关键词：辣白菜魏斯氏菌内源性质粒分离鉴定

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乳酸乳球菌和魏斯氏菌的分离及鉴定

乳酸乳球菌和魏斯氏菌的分离及鉴定

不同盐浓度下添加食窦魏斯氏菌WS20对酱油品质及风味的影响

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会

作者：商婷婷张日俊中国农业大学饲料生物技术实验室动物营养学国家重点实验室

(目的)试验以生牛奶、自制泡菜水、青贮料、市售奶酪为样品,进行乳酸乳球菌和魏斯氏菌的筛选与鉴定。(方法)通过培养基中菌落形态观察和镜检细胞形态观察,共筛得6株疑似乳酸球菌(分别命名为ST1、ST2、ST6、ST7、ST8、ST9)。经生理生化... 详细信息

(目的)试验以生牛奶、自制泡菜水、青贮料、市售奶酪为样品,进行乳酸乳球菌和魏斯氏菌的筛选与鉴定。(方法)通过培养基中菌落形态观察和镜检细胞形态观察,共筛得6株疑似乳酸球菌(分别命名为ST1、ST2、ST6、ST7、ST8、ST9)。经生理生化、耐盐性、耐热性试验以及1 6S rDNA序列分析鉴定,(结果)这6株菌分属两个属:ST1、ST2、ST7、ST9为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),其中ST2为乳酸乳球菌乳脂亚种(lactococcus lactis ***),ST7为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis ***);ST6、ST8属于魏斯氏菌属(Wissella),其中ST6为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。(结论)研究表明,生牛奶和泡菜水分别是乳酸乳球菌和魏斯氏菌的优良生境,传统方法与分子生物技术相结合可更准确快速地分离及鉴定菌株。

关键词：乳酸乳球菌魏斯氏菌形态观察生理生化鉴定 16S rDNA序列分析

来源： cnki会议评论

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不同盐浓度下添加食窦魏斯氏菌WS20对酱油品质及风味的影响

中国食品科学技术学会第二十届年会

作者：张家越宋璐瑶汪佳怡贺博禹艳春刘君蒋雪薇长沙理工大学食品与生物工程学院加加食品集团股份有限公司

魏斯氏菌是一种广泛存在于发酵食品、肉类和乳制品中的乳酸菌,具有低pH耐受性、高胆盐耐受性和抑菌活性,可为酱油提供柔和酸感。为了探明不同盐浓度下食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria) W20对酱油发酵的影响,将酱油成品曲与不同盐浓度的... 详细信息

魏斯氏菌是一种广泛存在于发酵食品、肉类和乳制品中的乳酸菌,具有低pH耐受性、高胆盐耐受性和抑菌活性,可为酱油提供柔和酸感。为了探明不同盐浓度下食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria) W20对酱油发酵的影响,将酱油成品曲与不同盐浓度的盐水按料水比1:2(w:v)混合搅拌均匀后,分别制成最终盐浓度为80 g/L、100 g/L、120 g/L、140 g/L、160 g/L的酱醪,对发酵90天的酱油进行理化指标、挥发性风味物质及感官评分进行研究,以不同盐浓度未接种WS20的发酵酱油为对照组。结果显示:盐浓度为120 g/L发酵酱油氨态氮含量达到10.93 g/L,显著高于其他样品,90d发酵酱油总酸、还原糖及可溶性无盐固形物含量分别为13.88 g/L、29.48 g/L和178.95 g/L。分析5个试验组添菌发酵酱油中挥发性风味物质,发现所有试验组挥发性风味物质种类和含量均比对照组显著提高,其中盐浓度为120g/L试验组挥发性风味物质种类最多,比对照组增加8种,含量比对照组提升18.95%。感官评分显示,不同盐浓度的魏斯氏菌发酵试验组对酱油的色泽、香气、滋味均有提升,其中120 g/L盐浓度发酵酱油色泽、香气、滋味和总分分别比对照组提高12.60%、9.74%、13.03%和11.53%。综合而言,食窦魏斯氏菌WS20在酱油酿造中最佳盐浓度为120 g/L,适合应用于减盐发酵中提升酱油品质和风味。

关键词：魏斯氏菌酱油发酵盐浓度品质风味

来源： cnki会议评论

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魏斯氏菌在发酵食品中的应用研究

食品安全导刊 2020年第33期 181-181页

作者：刘境李福君通辽职业学院药品食品系

魏斯氏菌是乳酸菌中的一种有益微生物,多存在于发酵肉制品、发酵香肠、泡菜、酱油等发酵食品当中,对于提高产品的风味质量和食品的安全性具有重要意义。

关键词：魏斯氏菌乳酸菌应用

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酱醪细菌菌株的分离及功能分析

微生物学通报 2017年第8期44卷 1899-1907页

作者：胡传旺李巧玉周朝晖李铁桥陈坚堵国成方芳江南大学生物工程学院江苏无锡214122 工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 广东珠江桥生物科技股份有限公司广东中山528415 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122

【目的】分离获得来源于酱醪的细菌,考察菌株与酱油品质相关的特性,初步评价其应用于酱油发酵的潜力。【方法】从日式酱油发酵的酱醪体系中分离和筛选优势或特征细菌菌株,比较它们的耐盐性及其在高盐条件下产蛋白酶、有机酸、挥发性物... 详细信息

【目的】分离获得来源于酱醪的细菌,考察菌株与酱油品质相关的特性,初步评价其应用于酱油发酵的潜力。【方法】从日式酱油发酵的酱醪体系中分离和筛选优势或特征细菌菌株,比较它们的耐盐性及其在高盐条件下产蛋白酶、有机酸、挥发性物质和氨基酸等的能力。【结果】从日式酱油酱醪中共分离得到9株细菌,分别属于魏斯氏菌(Weissella)、乳酸足球菌(Pediococcus)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、芽孢杆菌(Bacillus)、四联球菌(Tetragenococcus)和葡萄球菌(Staphylococcus)属。其中耐盐的细菌有类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)CQ03、嗜酸乳酸足球菌(Pediococcus acidilactici)JY07、戊糖乳酸足球菌(Pediococcus pentosaceus)JY08、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)JY09和嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)MRS1。在高盐条件下,对它们的特性分析表明:解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B2产蛋白酶和糖化酶的能力较强,*** CQ03可水解原料产生较多鲜味氨基酸,*** MRS1产有机酸能力较强,它和***09代谢产生的挥发性物质较多。【结论】筛选得到9株在促进原料水解和提高风味物质合成方面有潜力的菌株,如果应用到酱油工业生产中,将有利于缩短发酵周期,提高酱油品质。

关键词：酱油魏斯氏菌嗜盐四联球菌足球菌芽孢杆菌风味物质