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miR-30b在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

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中国病理生理杂志 2021年第1期37卷 54-59页

作者：周薇徐金升白亚玲张慧然何雷张胜雷张东雪河北医科大学第四医院肾内科河北石家庄050011

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组。采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录... 详细信息

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组。采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录因子Runx2的表达。体外培养原代大鼠胸主动脉VSMCs并分为正常组和高磷组。采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测VSMCs的钙化情况;ELISA法测定VSMCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-qPCR测定VSMCs中miR-30b及Runx2 mRNA的表达;Western blot检测Runx2蛋白的表达。为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,转染miR-30b模拟物(mimic-30b),检测VSMCs钙化、Runx2表达和ALP活性的变化。结果:与sham组比较,CRF+VC组大鼠胸主动脉钙盐沉积和Runx2表达均显著增加(P高磷诱导的大鼠VSMCs钙化增加(P高(P高(P高磷可诱导大鼠VSMCs钙化,可能是通过抑制miR-30b表达、促进细胞表型转化实现的。

关键词：微小RNA-30b 高磷血管钙化血管平滑肌细胞表型转化

高磷饮食对5/6肾切除大鼠继发性甲状旁腺功能亢进及肾脏纤维化的影响及金雀异黄素干预作用

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上海医学 2010年第11期33卷 1043-1047,F0003页

作者：袁伟杰彭燕张威朱楠王莉君郝静梅长林上海交通大学附属第一人民医院肾内科 200080 第二军医大学附属长征医院肾内科

目的观察高磷饮食对5/6肾切除大鼠继发性甲状旁腺功能亢进、肾脏纤维化的影响及金雀异黄素的干预作用。方法 8～10周龄雄性Sprague-Dawley大鼠24只,体重200 250 g,随机分为4组,每组6只:假手术正常磷饮食组(Sham十NP组),5/6肾切除正常磷... 详细信息

目的观察高磷饮食对5/6肾切除大鼠继发性甲状旁腺功能亢进、肾脏纤维化的影响及金雀异黄素的干预作用。方法 8～10周龄雄性Sprague-Dawley大鼠24只,体重200 250 g,随机分为4组,每组6只:假手术正常磷饮食组(Sham十NP组),5/6肾切除正常磷饮食组(STNx+NP组),5/6肾切除高磷饮食组(STNx+HP组),5/6肾切除高磷饮食+金雀异黄素灌胃组(STNx+HP+Gen组)。高磷饮食配方:磷1.2%,钙1.6%,维生素D 1 U/kg。正常磷饮食配方:磷0.6%,钙0.6%,维生素D 1 U/kg。5/6肾脏切除分两步进行。造模术后第4、8、12、16周,检测血清肌酐(SCr)、磷、钙、1,25(OH)_2D_3、全段甲状旁腺激素(iPTH)水平。特定饮食结束时,处死大鼠,取肾脏组织,石蜡切片行苏木精-伊红(H-E)染色,进行病理积分。结果 Sham+NP组各项指标在实验过程中均无明显变化(P值均>0.05)。STNx+NP组、STNx+HP组、STNx+HP+Gen组SCr、磷、iPTH的水平均随着特定饮食喂养时间的延长逐渐升高。16周时与4周时的差异均有统计学意义(P值均磷、iPTH与STNx+NP组的差异均有统计学意义(P值均0.05)。Sham+NP组、STNx+NP组、STNx+HP组和STNx+HP+Gen组的肾小球硬化指数分别为0、1.01±0.02、1.83±0.03、1.51±0.03,STNx+HP组和STNx+HP+Gen组显著高于STNx+NP组(P值均高于STNx+HP+Gen组(P高磷饮食可促进5/6肾大部切除大鼠甲状旁腺功能亢进的发生,并加剧其肾功能恶化,金雀异黄素可部分减轻其肾脏毒性作用,改善甲状旁腺功能亢进。

关键词：高磷继发性甲状旁腺功能亢进动物模型金雀异黄素 5/6肾切除

水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

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中国现代应用药学 2020年第24期37卷 2945-2952页

作者：李芬芬尹忠诚张颖徐州医科大学江苏徐州221004 徐州医科大学附属医院肾内科江苏徐州221006

目的探讨水蛭素对高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的影响及机制。方法采用β-甘油磷酸诱导体外培养的大鼠VSMCs,建立钙化模型,加入不同浓度水蛭素进行干预,实验设置5个组:对照组、钙化组、低浓度水... 详细信息

目的探讨水蛭素对高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的影响及机制。方法采用β-甘油磷酸诱导体外培养的大鼠VSMCs,建立钙化模型,加入不同浓度水蛭素进行干预,实验设置5个组:对照组、钙化组、低浓度水蛭素组、中浓度水蛭素组、高浓度水蛭素组。通过茜素红S染色及细胞内钙含量检测各组细胞钙化情况;用qRT-PCR及Western blotting检测各组细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的mRNA和蛋白表达量及细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以测定各组细胞转分化情况。结果与对照组比较,高磷诱导的钙化组中茜素红S染色可见明显橘红色钙化结节,钙含量检测显示细胞内钙含量明显增加(P高(P高(P高(P高磷诱导大鼠VSMCs转分化来减轻VSMCs的钙化,其机制可能与上调α-SMA的表达,下调ALP活性、RUNX2及BMP2的表达有关。

关键词：水蛭素血管平滑肌细胞血管钙化高磷

高磷条件下不同磷效率小麦对磷的吸收及根际土壤磷组分差异

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核农学报 2013年第11期27卷 1762-1770页

作者：展晓莹张丽刘晓斌张淑香中国农业科学院农业资源与农业区划研究所/耕地培育技术国家工程实验室北京100081

采用根箱土培试验,研究在速效磷较高的河北潮土(17.79mg·kg-1)施磷(P)量为0、25、50mg P·kg-1土对小麦的生物量、含磷量和土壤有机、无机磷形态的影响,供试品种为典型磷高效型小麦小偃54和磷低效型小麦京411。本文用小麦的生物量与含... 详细信息

采用根箱土培试验,研究在速效磷较高的河北潮土(17.79mg·kg-1)施磷(P)量为0、25、50mg P·kg-1土对小麦的生物量、含磷量和土壤有机、无机磷形态的影响,供试品种为典型磷高效型小麦小偃54和磷低效型小麦京411。本文用小麦的生物量与含磷量表现对磷的吸收,结果表明:增加磷肥投入可以提高两种小麦的含磷量以及京411的生物量,小偃54的生物量在P25水平下最高。P0和P25水平下小偃54的各部分生物量和含磷量显著高于京411。两种处理下小偃54的根系生物量分别比京411高出87%和56%,总含磷量分别比京411高出40.2%、39.7%。种植小麦后潮土中无机磷形态按含量大小排序为:Ca10-P>Ca8-P>Al-P>Ca2-P>Fe-P,Ca2-P、Fe-P、Ca8-P的有效性较高;有机磷形态按含量大小排序为:中等活性有机磷>高稳性有机磷>中稳性有机磷>活性有机磷。小偃54与京411对5种无机形态磷的吸收无显著性差异。不施磷肥,种植过小偃54的内室土中等活性有机磷的质量分数比京411低24%,P50处理时小偃54比京411高18%,差异均达到显著性水平。适量施用磷肥有利于小麦干物质量积累和含磷量的提高。小偃54对中等活性有机磷的活化能力高于京411,高磷条件削弱了两种磷效率小麦生长指标的差异。

关键词：高磷磷效率磷形态小麦根际

高磷饮食+5/6肾切除制备慢性肾衰竭继发甲状旁腺功能亢进大鼠模型

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第二军医大学学报 2006年第7期27卷 784-786页

作者：李丹赵学智第二军医大学长征医院肾内科上海200003

目的：构建慢性肾衰竭继发甲状旁腺功能亢进大鼠模型，为研究肾性甲旁亢的发病机制及治疗奠定基础。方法：36只8～10周龄健康雄性SD大鼠，体质量200-250g，随机分为6组（n=6）：5／6肾切除高磷饲料组（STNx＋HP）；5／6肾切除低磷饲料组... 详细信息

目的：构建慢性肾衰竭继发甲状旁腺功能亢进大鼠模型，为研究肾性甲旁亢的发病机制及治疗奠定基础。方法：36只8～10周龄健康雄性SD大鼠，体质量200-250g，随机分为6组（n=6）：5／6肾切除高磷饲料组（STNx＋HP）；5／6肾切除低磷饲料组（STNx＋LP）；5／6肾切除正常磷饲料组（STNx＋NP）；假手术高磷饲料组（Sham＋HP）；假手术低磷饲料组（Sham＋LP）；假手术正常磷饲料组（Sham＋NP）。肾切除组大鼠分两步进行肾脏切除，术前1周及2次手术后7、14、21、28d在大鼠眼内眦静脉取血，分别检测大鼠血清中血磷（P）、全段甲状旁腺素（iPTH）水平。术后4周取大鼠残余肾脏及甲状腺与甲状旁腺的复合体，进行病理组织学检查。结果：STNx＋NP组、STNx＋LP组和STNx＋HP组术后存活大鼠数分别为5只、4只和4只；假手术各组大鼠未见死亡。肾切除组术后各时段血清iPTH水平均高于术前和各自假手术组（P〈0．05）；STNx＋HP组血清iPTH水平明显高于STNx＋NP组和STNx＋LP组（P〈0．05）。STNx＋HP组术后各时段血清P水平高于术前和Sham＋HP组（P〈0．05）；而STNx＋NP组、STNx＋LP组与各自假手术组无显著差异，且均低于STNx＋HP组（P〈0．05）。STNx＋HP组大鼠术后28d组织病理学观察可见肾小球纤维化及硬化；甲状旁腺组织观察可见腺体增大，腺体中主要见主细胞及甲状旁腺嗜酸性细胞。结论：高磷饮食合并5／6肾切除可建立大鼠慢性肾功能衰竭继发甲状旁腺功能亢进模型，具有动物成本低，操作方法简便，实验周期短，动物死亡率低等优点。

关键词：肾功能衰竭,慢性甲状旁腺功能亢进症,继发性高磷 5/6肾切除模型,动物

高磷对血管平滑肌细胞钙化的影响及阿托伐他汀的干预效应

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中华肾脏病杂志 2008年第7期24卷 482-486页

作者：战晓丽袁伟杰于建平傅鹏郭云珊刘凌第二军医大学长海医院肾内科上海200433

目的观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响，及探讨阿托伐他汀在RVSMC钙化中的保护作用及相关机制。方法用不同的试剂培养RVSMC，分别为正常磷组（Pi 1．4mmol／L）、高磷组（Pi 2．0mmol／L、2．6mmol／L）、凋亡抑制组（P... 详细信息

目的观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响，及探讨阿托伐他汀在RVSMC钙化中的保护作用及相关机制。方法用不同的试剂培养RVSMC，分别为正常磷组（Pi 1．4mmol／L）、高磷组（Pi 2．0mmol／L、2．6mmol／L）、凋亡抑制组（Pi 2．6mmol／L＋ZVAD—FMK 0．1μmol／L、Pi 2．6mmol／L＋ZVAD—FMK 1．0μmol／L、Pi 2．6mmol／L＋ZVAD—FMK 2．0μmol／L）和阿托伐他汀组（Pi 2．6mmol／L＋Statin 1 nmol／L、Pi 2．6mmol／L＋Statin 10 nmol／L、Pi 2．6mmol／L＋Statin 100 nmol／L）。甲O-酚酞络合酮方法测定平滑肌细胞钙含量，BCA法测定蛋白含量，用蛋白含量标化钙含量，同时以von Kossa染色观察细胞钙化情况。ELISA方法测定不同时间各组细胞的相对凋亡量。结果（1）培养第3、6、9天时，Pi 2．0mmol／L、Pi 2．6mmol／L组与Pi 1．4mmol／L组相比，RVSMC钙沉积较多（P〈0．05）。（2）培养第6天时，Pi 2．6mmol／L＋ZVAD—FMK 1．0μmol／L、Pi 2．6mmol／L＋ZVAD—FMK 2．0μmol／L组与Pi 2．6mmol／L组相比，RVSMC钙沉积较少（P〈0．05）；Pi 2．6mmol／L＋Statin 10nmol／L、Pi 2．6mmol／L＋Statin 100nmol／L组与Pi 2．6mmol／L组相比，细胞钙沉积较少（P〈0．05）。von Kossa染色显示Pi 2．6mmol／L组细胞有大量黑色颗粒沉积，而Pi 2．6mmol／L＋Statin 100nmol／L组较少。（3）培养第3、6、9天时，Pi 2．6mmol／L与Pi 1．4mmol／L相比，细胞相对凋亡量较多（P〈0．05）；培养第12、24小时，Pi 2．0mmol／L、Pi 2．6mmol／L组与Pi 1．4mmol／L组相比，细胞相对凋亡量较多（P〈0．05）；培养第6天、第24小时时，Pi 2．6mmol／L＋Statin 10nmol／L、Pi 2．6mmol／L＋Statin 100nmol／L与Pi 2．6mmol／L组相比，细胞相对凋亡量较少（P〈0．05）。结论高磷培养可诱导RVSMC体外钙化。阿托伐他汀对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用，此作用可能与其降低RVSMC凋亡有关。

关键词：肌细胞,平滑肌钙质沉着症细胞凋亡高磷阿托伐他汀

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陕西镇安某高磷混合型铁锰矿选矿实验研究

矿产综合利用 2021年第1期42卷 83-87页

作者：贾宝亮孙亚峰王小钊王虎白新悦陕西省地质矿产试验研究所有限公司陕西西安710054

该锰矿样品中含Mn 14.26%,TFe 11.90%,P 0.52%,P/Mn(0.036)>0.006%,Mn/Fe<3。物质成分研究结果表明该锰矿石属于高磷混合型铁锰矿石,矿石成分、矿石结构复杂。对该试样进行了粗粒抛尾、弱磁选、磁化焙烧锰铁分离等探索实验和原矿筛析、... 详细信息

该锰矿样品中含Mn 14.26%,TFe 11.90%,P 0.52%,P/Mn(0.036)>0.006%,Mn/Fe高磷混合型铁锰矿石,矿石成分、矿石结构复杂。对该试样进行了粗粒抛尾、弱磁选、磁化焙烧锰铁分离等探索实验和原矿筛析、磨矿细度、强磁选等实验研究。最终采用原矿-磨矿-强磁选别的工艺流程,获得了产率59.66%,精矿Mn品位21.51%,回收率Mn 90.01%的锰精矿。

关键词：高磷混合型铁锰矿磁选

外泌体参与调节高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

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中华肾脏病杂志 2021年第5期37卷 424-430页

作者：熊云峰王琰曲丽娟余毅联勤保障部队第900医院(原南京军区福州总医院)血液净化科福州350025 福建医科大学福总临床医学院福州350025 联勤保障部队第900医院(原南京军区福州总医院)病理科福州350025

目的探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)钙化中的调节作用。方法体外培养VSMC(A7r5细胞),随机分为正常磷组(0.9 mmol/L)、高磷组(2.6 mmol/L)及高磷外泌体诱导组(即高磷组细胞提取的外泌体... 详细信息

目的探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)钙化中的调节作用。方法体外培养VSMC(A7r5细胞),随机分为正常磷组(0.9 mmol/L)、高磷组(2.6 mmol/L)及高磷外泌体诱导组(即高磷组细胞提取的外泌体加入正常培养的VSMC中)。至培养第7天,收集正常磷组、高磷组细胞培养换液过程中获得的培养液,通过超速离心法得到沉淀物,BCA蛋白定量法测定所得沉淀物蛋白含量,分别对所得沉淀物用透射电镜观察沉淀物形态及大小,Western印迹法检测外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101蛋白(tumor susceptibility gene 101 protein,TSG101)、CD9;并对外泌体微RNA(microRNA,miRNA,miR)进行提取,实时定量PCR法检测miR-30b、miR-204、miR-211含量。分别培养7 d后,观察高磷外泌体诱导组VSMC对外泌体的摄取过程,观察3组细胞形态,茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,邻甲苯酚络合铜检测细胞钙离子含量,比色法检测细胞碱性磷酸酶含量,Western印迹法检测成骨特异性转录因子(Runx2)蛋白表达情况。结果(1)VSMC培养液经超速离心法所获沉淀物,经电镜形态学鉴定为外泌体,Western印迹法证实外泌体标志蛋白TSG101、CD9表达阳性。(2)外泌体内富含miRNA,经测定,高磷组外泌体中负向调控Runx2转录的miR-30b、miR-204、miR-211表达较正常磷组明显下调(均P高磷培养VSMC 7 d后,钙盐沉积明显,与正常磷组相比,钙含量、碱性磷酸酶活性明显增高(均P高(P高磷组外泌体加入正常培养的VSMC中,外泌体可被VSMC摄取并成功诱导VSMC发生钙化,VSMC钙化指标及Runx2表达水平均明显增高。结论高磷诱导VSMC发生钙化,促进Runx2表达增高,其机制可能是借由VSMC释放外泌体传递细胞信号而实现。

关键词：血管钙化外泌体微RNAs 高磷

雏鸡实验性锰缺乏症及高磷对缺锰影响的病理学研究

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畜牧兽医学报 1996年第3期27卷 275-284页

作者：杨金堂冯泽光四川农业大学动物科技学院

１５０只１日龄艾维茵（Ａｖｉａ）肉鸡随机分为５组，各喂以低Ｍｎ（基础日粮含锰１５．７ｐｐｍ），低Ｍｎ高Ｐ＿１（基础日粮＋Ｐ０．１５％），低Ｍｎ高Ｐ＿２（基础日粮＋Ｐ０．４０％）、补锰高Ｐ１（基础日粮＋Ｍｎ１００ｐｐｍ... 详细信息

１５０只１日龄艾维茵（Ａｖｉａ）肉鸡随机分为５组，各喂以低Ｍｎ（基础日粮含锰１５．７ｐｐｍ），低Ｍｎ高Ｐ＿１（基础日粮＋Ｐ０．１５％），低Ｍｎ高Ｐ＿２（基础日粮＋Ｐ０．４０％）、补锰高Ｐ１（基础日粮＋Ｍｎ１００ｐｐｍ＋Ｐ０．１５％）时ＰＭ以（基础日粮＋Ｍｎ１００ｐｐｍ）日粮，饲喂４周。低锰，低锰高Ｐ＿１、低锰高Ｐ＿２组第１周开始发病，第二周达高峰。发病症状为共济失调，跛行。单腿发病，病腿向外前侧伸展，严重者患肢瘫痪，以跗关节着地，拖腿而行；双腿患病则内收呈“Ｏ”字形。尸体剖检见跟腱向内滑脱，跗关节肿大、扭曲、变形。特征性组织学病变为胫骨髓板增殖区变窄，细胞排列紊乱，粘多糖减少。超微结构变化为软骨细胞线粒体减少及空泡变。粗面内质网断裂、扩张，池内分离及核蛋白体脱落。高尔基复合体萎缩。基质中粘多糖颗粒显著减少。心肌纤维、肝细胞和睾丸精原细胞线粒体肿大，嵴脱落及严重空泡变。低Ｍｎ及低Ｍｎ高Ｐ组的胫骨和肝组织中锰含量与对照组相比有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。

关键词：锰缺乏高磷病理学雏鸡鸡病