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基于iTRAQ技术的BMP-2诱导肌源C2C12细胞向成骨细胞分化过程中的蛋白质组学研究

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中华骨科杂志 2015年第6期35卷 663-669页

作者：周一林许长鹏戚芮榛侯毅龙江艺冯东阳余斌南方医科大学南方医院创伤骨科广州510515

目的应用iTRAQ技术观察BMP-2诱导肌源C2C12细胞向成骨细胞分化过程中蛋白质表达组的变化.方法将肌源C2C12细胞接种于BMP-2诱导分化体系中进行分化诱导,提取第7天的分化蛋白以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测,分析差异表达的蛋白质,并进... 详细信息

目的应用iTRAQ技术观察BMP-2诱导肌源C2C12细胞向成骨细胞分化过程中蛋白质表达组的变化.方法将肌源C2C12细胞接种于BMP-2诱导分化体系中进行分化诱导,提取第7天的分化蛋白以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测,分析差异表达的蛋白质,并进行生物信息学分析.结果 iTRAQ试剂标记的BMP-2诱导肌源C2C12分化细胞蛋白质表达谱分析筛选出明显差异表达蛋白质点为23个,表达上调的蛋白质点8个,下调的蛋白质点15个.通过趋势分类发现上述差异蛋白在C2C12细胞成骨分化的各时期（第1至7天）均存在蛋白的差异表达.其中部分上调蛋白在分化早期表达水平升高、部分上调蛋白在分化晚期表达水平升高;同样,部分下调蛋白在分化早期表达水平下降,部分下调蛋白在分化晚期表达水平下降.初步鉴定SERCA3、细胞色素b5、S100A4、ATPase inhibitor、ATPIF1等5个蛋白表达出现动态变化,证实上述蛋白可能与诱导成骨分化机制有关.结论本研究差异蛋白表达趋势的结果显示全程监测C2C12细胞成骨分化的必要性,提示iTRAQ技术是研究细胞分子蛋白改变的有效的蛋白质组学方法,SERCA3、细胞色素b5、S100A4、ATPase inhibitor、ATPIF1等5个蛋白可作为诱导成骨分化机制研究的候选靶标.

关键词：骨形态发生蛋白质2 成骨细胞细胞分化蛋白质组学

BMP2基因变异致身材矮小、面部畸形和骨骼异常伴或不伴心脏异常综合征1例

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中华围产医学杂志 2023年第2期26卷 155-158页

作者：薛会丽林敏郭群黄海龙徐两蒲福建省妇幼保健院医学遗传诊疗中心(福建省产前诊断与出生缺陷重点实验室) 福州350001

本文报道对1个连续2次妊娠中孕期超声均提示小下颌、腭裂家系的遗传学分析。孕妇第1次妊娠足月经阴道分娩一男婴。该婴儿于生后2周夭折, 确诊为Pierre Robin序列征(Pierre Robin sequence, PRS), 其染色体核型、基因组拷贝数变异未见异... 详细信息

本文报道对1个连续2次妊娠中孕期超声均提示小下颌、腭裂家系的遗传学分析。孕妇第1次妊娠足月经阴道分娩一男婴。该婴儿于生后2周夭折, 确诊为Pierre Robin序列征(Pierre Robin sequence, PRS), 其染色体核型、基因组拷贝数变异未见异常, 未行遗传学病因检测。本次妊娠Ⅲ级彩超检查提示胎儿腭裂、小下颌及羊水过多等, 疑诊PRS, 要求产前遗传学病因诊断。胎儿染色体核型及基因组拷贝数变异未见异常, 胎儿家系全外显子组测序、生物信息学分析及家系Sanger测序验证结果提示胎儿及胎儿哥哥BMP2基因均存在遗传自母亲的c.79delG p.E27Sfs*24可能致病性变异。经咨询, 孕妇选择终止妊娠。因连续2次妊娠胎儿表型相似, 结合其遗传学病因分析, 提示BMP2基因c.79delG p.E27Sfs*24杂合变异是该家系连续2次妊娠胎儿表型异常的致病原因。

关键词： Pierre Robin综合征骨形态发生蛋白质2 全外显子组测对序腭裂产前诊断

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NELL-1:高效特异的新型生长因子

北京大学学报（医学版） 2016年第2期48卷 380-383页

作者：秦雪嫣赵华翔张倩陈峰林久祥北京大学口腔医学院.口腔医院正畸科北京100081 北京大学口腔医学院.口腔医院中心实验室北京100081

骨与其他组织的再生往往需要种子细胞、支架材料和相关生长因子三方面的参与,而生长因子作为维持微环境的重要组成部分,对于组织再生起着重要作用。人类尼尔样-1型分子（Nel-like molecule-1,NELL-1）基因位于第11号染色体p15.1-p15.2,

关键词： Nell1蛋白骨形态发生蛋白质2 骨生成软骨发生

重组人骨形成蛋白-2提高人乳腺癌细胞MCF-7的迁移性

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中国病理生理杂志 2010年第5期26卷 931-936页

作者：黄培德黄飞程陈阳肖刚周智优汪炬周天鸿暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学化学系广东广州510632 暨南大学生物系广东广州510632

目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP2)对人乳腺癌细胞MCF-7迁移性的影响。方法:用rhBMP2诱导人乳腺癌细胞MCF-7,并利用原子力显微镜观察细胞的形态结构变化。通过划痕愈合和transwell实验研究rhBMP2诱导下人乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的... 详细信息

目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP2)对人乳腺癌细胞MCF-7迁移性的影响。方法:用rhBMP2诱导人乳腺癌细胞MCF-7,并利用原子力显微镜观察细胞的形态结构变化。通过划痕愈合和transwell实验研究rhBMP2诱导下人乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的变化。结果:rhBMP2诱导组的细胞形态产生变化,多数细胞伸出板状伪足产生极性,细胞长度变长;相反,对照组细胞的伪足不明显,多数细胞趋于圆形,细胞直径短。划痕愈合和transwell实验显示,与对照组相比,rhBMP2诱导的MCF-7细胞的迁移和侵入能力明显加强。结论:rhBMP2能够诱导人乳腺癌细胞MCF-7获得迁移表型,并提高了MCF-7细胞的迁移和侵入能力。

关键词：骨形态发生蛋白质2 MCF-7细胞细胞运动

软骨寡聚基质蛋白对BMP-2诱导骨髓间质干细胞分化的影响

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中华骨科杂志 2015年第3期35卷 275-283页

作者：郭鹏师钟丽刘安林调毕方刚史明敏严世贵浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的探讨过表达软骨寡聚基质蛋白（cartilage oligomeric matrix protein,COMP）对BMP-2诱导骨髓间质干细胞成骨及成软骨分化的影响.方法用BMP-2诱导骨髓间质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间质干细胞过表达COMP... 详细信息

目的探讨过表达软骨寡聚基质蛋白（cartilage oligomeric matrix protein,COMP）对BMP-2诱导骨髓间质干细胞成骨及成软骨分化的影响.方法用BMP-2诱导骨髓间质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间质干细胞过表达COMP,空载质粒作为对照.以RT-PCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原、RUNX2、骨桥蛋白、骨钙蛋白以及成软骨相关基因Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达变化;通过碱性磷酸酶染色观察成骨过程中的碱性磷酸酶活性,茜素红染色观察成骨终末阶段矿化结节的生成情况,阿利新蓝染色观察细胞基质蛋白多糖的合成情况.结果 COMP组目的基因COMP mRNA的表达显著升高;骨桥蛋白mRNA表达水平较对照组低,呈现出一致的下调趋势（P＜0.05）;Ⅰ型胶原、RUNX2、骨钙蛋白mRNA表达水平在诱导早期均高于对照组（P＜0.05）,但在诱导晚期均明显低于对照组（P＜0.05）;成软骨指标（Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖）的基因表达水平强于对照组,呈一致的上调趋势（P＜0.05）;SOX9 mRNA表达水平高于对照组,仅在第7天时差异具有统计学意义（P＜0.05）;细胞成骨染色（碱性磷酸酶染色、茜素红染色）均弱于对照组,而阿利新蓝染色强于对照组.结论 COMP能抑制BMP-2诱导骨髓间质干细胞成骨分化,促进BMP-2诱导骨髓间质干细胞成软骨分化.

关键词：细胞外基质蛋白质类骨形态发生蛋白质2 间质干细胞细胞分化基因表达

大鼠肺动脉平滑肌细胞Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及机制

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中国病理生理杂志 2011年第3期27卷 443-449页

作者：李春香李福海夏伟时庆汪大琨山东大学齐鲁医院儿科山东济南250012 山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东济南250012

目的:研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径,探讨它们在肺血管重构中的作用机制。方法:分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路,应用骨形态发生蛋白2(BMP... 详细信息

目的:研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径,探讨它们在肺血管重构中的作用机制。方法:分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路,应用骨形态发生蛋白2(BMP-2)启动BMP信号通路,并用Rho激酶抑制剂Y-27632、MEK抑制剂U0126进行干预。培养细胞分成5组:(1)对照组;(2)BMP-2组;(3)BMP-2+PDGF-BB组;(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组;(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126组。免疫荧光染色标记p-Smad1在细胞核内外的分布并计算p-Smad1核迁移阳性细胞百分数(即核迁移率)。分离平滑肌细胞核蛋白和胞浆蛋白,West-ern blotting分析p-Smad1在细胞内的总量和细胞核内外相对含量的变化。Kit-WST-8试剂盒检测细胞增殖。结果:BMP-2组p-Smad1在细胞内的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率明显高于对照组(P2+PDGF-BB组p-Smad1的核迁移率和在细胞核中的相对含量明显低于BMP-2组(P0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组细胞内p-Smad1的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率与BMP-2组基本相似(P>0.05)。BMP-2组的A值明显小于对照组(P2组的A值明显大于BMP-2组(P2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组的A值均小于PDGF-BB+BMP-2组(P2抑制BMP-2引起的p-Smad1核迁移,促进平滑肌细胞增殖。

关键词：肺动脉平滑肌细胞 Rho激酶骨形态发生蛋白质2 p-Smad1核迁移

血清OPN、BMP2、RBP4与糖尿病肾病患者肾功能及骨密度的相关性

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中国医师杂志 2024年第6期26卷 876-880,885页

作者：马小芬张士奇薛丹丹张宜明焦占峰金呈强李相济宁医学院附属医院肾内科济宁272029 济宁医学院附属医院医学检验科济宁272029

目的探讨血清骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)与糖尿病肾病(DN)患者肾功能及骨密度的关系。方法选取2020年1月至2021年12月在济宁医学院附属医院确诊的120例DN患者作为DN组,60例单纯糖尿病患者作为T2DM组... 详细信息

目的探讨血清骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)与糖尿病肾病(DN)患者肾功能及骨密度的关系。方法选取2020年1月至2021年12月在济宁医学院附属医院确诊的120例DN患者作为DN组,60例单纯糖尿病患者作为T2DM组,糖耐量试验正常的研究对象60例作为对照组,对比三组的血糖、血清OPN、BMP2、RBP4、腰椎骨密度(LBMD)、股骨颈骨密度(FNBMD)及肾功能指标,并按照DN患者的尿白蛋白排泄率(UAER)将患者分为微量白蛋白尿DN组(71例)和大量白蛋白尿DN组(49例),进行分层对比,采用简单线性相关分析法分析DN患者OPN、BMP2、RBP4与肾功能及骨密度指标的相关性。结果DN组患者的空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA 1c)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、胱抑素(CysC)水平显著高于T2DM组和对照组,差异均有统计学意义(均P2DM组FPG、HbA 1c高于对照组,差异均有统计学意义(均P2高于T2DM组和对照组,DN组的RBP4、LBMD、FNBMD低于T2DM组和对照组,差异均有统计学意义(均P2DM组的OPN、BMP2高于对照组,RBP4低于对照组,差异均有统计学意义(均P蛋白尿DN组患者的FPG、HbA 1c、Scr、UAER、CysC水平显著高于微量白蛋白尿DN组患者,差异均有统计学意义(均P蛋白尿DN组患者的OPN、BMP2高于微量白蛋白尿DN组患者,大量白蛋白尿DN组患者的RBP4、LBMD、FNBMD低于微量白蛋白尿DN组患者,差异均有统计学意义(均P2与UAER、CysC均呈正相关(均P2与LBMD、FNBMD均呈负相关(均P2、RBP4与DN患者肾功能受损程度及骨量丢失密切相关,可在一定程度上反映T2DM患者骨代谢及骨质疏松病情程度。

关键词：骨桥蛋白质骨形态发生蛋白质2 视黄醇结合蛋白质4 糖尿病肾病蛋白尿骨密度

利奈唑胺对MRSA感染致慢性骨髓炎大鼠细菌负荷和骨修复的影响

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天津医药 2023年第7期51卷 729-733页

作者：陈立喜陈元良卓泽铭王和杰中南大学湘雅医学院附属海口市人民医院骨科 570208 海南省海口市骨科与糖尿病医院骨科

目的探究利奈唑胺对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染致慢性骨髓炎大鼠细菌负荷及骨修复的影响。方法将45只Wistar大鼠随机均分为假手术组、模型组、利奈唑胺组,每组15只。模型组、利奈唑胺组大鼠双侧胫骨近端骨缺损后接种10μL 1.0... 详细信息

目的探究利奈唑胺对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染致慢性骨髓炎大鼠细菌负荷及骨修复的影响。方法将45只Wistar大鼠随机均分为假手术组、模型组、利奈唑胺组,每组15只。模型组、利奈唑胺组大鼠双侧胫骨近端骨缺损后接种10μL 1.0×108 CFU/mL MRSA,构建慢性骨髓炎模型。造模后7 d,利奈唑胺组腹腔注射利奈唑胺54 mg/kg,假手术组及模型组给予等体积葡萄糖注射液,连续14 d。观察创口愈合情况、Rissing评分、胫骨X线Norden评分和细菌负荷情况,HE染色观察胫骨组织病理改变,酶联免疫吸附试验检测病灶周围骨骼肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;蛋白免疫印迹法检测胫骨组织TGF-β1、激活素受体样激酶1(ALK-1)、Smad1/5、p-Smad1/5、骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达。结果假手术组全部甲级愈合,模型组乙级愈合3只、丙级愈合12只,利奈唑胺组乙级愈合9只、丙级愈合6只,差异有统计学意义(χ^(2)=35.111,P蛋白表达升高,BMP-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,利奈唑胺干预后可以逆转上述指标的改变(P<0.05)。结论利奈唑胺可通过抑制TGF-β/BMP通路活化减轻MRSA感染所致慢性骨髓炎大鼠细菌负荷,促进骨修复。

关键词：骨髓炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌利奈唑酮转化生长因子β1 骨形态发生蛋白质2 激活素受体,Ⅰ型 Smad蛋白质类

软骨寡聚基质蛋白过表达对BMP-2诱导骨髓间充质干细胞分化的影响

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中国生物工程杂志 2016年第10期36卷 1-7页

作者：沈鹏飞王斌谢子康郑冲瞿玉兴常州市中医医院常州213000

目的:研究软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)过表达对BMP-2诱导骨髓间充质干细胞成骨及成软骨分化的影响。方法:BMP-2诱导骨髓间充质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间充质干细胞过表达CO... 详细信息

目的:研究软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)过表达对BMP-2诱导骨髓间充质干细胞成骨及成软骨分化的影响。方法:BMP-2诱导骨髓间充质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间充质干细胞过表达COMP,采用实时定量PCR和Western blotting分析COMP基因过表达、成骨相关基因Ⅰ型胶原、RUNX2、骨钙蛋白以及成软骨相关基因Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖、X型胶原的表达变化;通过茜素红染色观察成骨终末阶段矿化结节的生成情况,阿利新蓝染色观察细胞基质蛋白多糖的合成情况。结果:质粒转染后骨髓间充质干细胞COMP基因蛋白和mRNA表达水平显著提高(P2、Ⅰ型胶原(Col1a1)mRNA水平均显著低于对照组(P2、骨钙蛋白(Osteocalcin)蛋白表达水平明显低于对照组(P蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA水平均显著高于对照组(P2a1)蛋白表达均明显多于对照组(P2诱导其成骨分化,促进骨髓间充质干细胞成软骨分化,并抑制软骨细胞的成熟肥大,为软骨组织工程研究提供新的方向。

关键词：骨髓间充质干细胞软骨寡聚基质蛋白骨形态发生蛋白质2 基因过表达细胞分化