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纳米αFe2O3对牙髓干细胞增殖及骨向分化和矿化能力的影响

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东南大学学报（自然科学版） 2018年第1期48卷 165-169页

作者：夏阳陈慧敏胡姝颖孙剑飞章非敏顾宁东南大学江苏省生物材料与器材重点实验室南京210009 南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室南京210029 苏州纳米科技协同创新中心苏州215123

对纳米αFe_2O_3进行二巯基丁二酸表面修饰,采用透射电子显微镜(TEM)观察其形貌,利用振动样品磁强计(VSM)检测其磁学性能.配置含纳米αFe_2O_3浓度为10μg/m L的培养基培养牙髓干细胞,以不添加纳米αFe_2O_3的培养基为对照组.采用荧光... 详细信息

对纳米αFe_2O_3进行二巯基丁二酸表面修饰,采用透射电子显微镜(TEM)观察其形貌,利用振动样品磁强计(VSM)检测其磁学性能.配置含纳米αFe_2O_3浓度为10μg/m L的培养基培养牙髓干细胞,以不添加纳米αFe_2O_3的培养基为对照组.采用荧光显微镜观察纳米αFe_2O_3组与常规培养基组的细胞形态,以CCK-8检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性,并进行茜素红染色以检验其矿化能力.结果表明,所用纳米αFe_2O_3为棒状,尺寸约10nm×90 nm,VSM结果显示其没有磁性.纳米αFe_2O_3培养基中牙髓干细胞的形态和增殖情况与常规培养基中情况没有差异,但是碱性磷酸酶活性和矿化能力则显著提高(p向成骨方向分化.

关键词：纳米αFe2O3 牙髓干细胞增殖骨向分化

淫羊藿水提取物对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的影响及其机制

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中草药 2013年第22期44卷 3182-3187页

作者：杨丽朱晓峰王攀攀黄丰张荣华暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学附属第一医院广东广州510630

目的观察淫羊藿水提取物对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化能力及转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响,阐释其防治骨质疏松症的作用机制。方法全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;以碱性磷酸酶(ALP)活性及AL... 详细信息

目的观察淫羊藿水提取物对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化能力及转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响,阐释其防治骨质疏松症的作用机制。方法全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定淫羊藿水提取物促MSCs骨向分化的最佳质量浓度,并以该质量浓度进行MSCs骨向分化实验。按是否添加经典成骨诱导液将大鼠分为对照组、成骨诱导剂组、淫羊藿水提取物(500μg/mL)组、淫羊藿水提取物(500μg/mL)+成骨诱导剂组,每3～4 d各组更换含相应物质培养液1次,连续干预14 d。通过检测各组ALP、I型胶原(Col I)、骨钙素(BGP)和钙化结节等骨向分化指标的变化,以评价淫羊藿水提取物对MSCs骨向分化能力的影响;通过检测TGF-β1、BMP-2的表达,研究淫羊藿水提取物促MSCs骨向分化的作用机制。结果淫羊藿水提取物最佳促MSCs骨向分化的质量浓度为500μg/mL;成骨诱导剂组、淫羊藿水提取物组及淫羊藿水提取物+成骨诱导剂组均能促进MSCs骨向分化及上调TGF-β1和BMP-2的表达。结论淫羊藿促进MSCs骨向分化,上调TGF-β1、BMP-2的表达可能是其作用机制之一。

关键词：淫羊藿水提取物骨髓间充质干细胞骨向分化转化生长因子β1 骨形态发生蛋白2

持续张应力大鼠骨髓基质干细胞骨向分化影响的基因芯片分析

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医用生物力学 2014年第1期29卷 14-19页

作者：张鹏房兵俞创奇代庆刚欧阳宁娟吴玉琼杨筱江凌勇上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颅颌面科上海200011 上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科上海200011

目的通过基因芯片技术研究持续张应力作用下大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化中基因表达差异。方法体外分离及培养大鼠BMSCs,使用Flexercell应力加载系统进行频率1 Hz、幅度10%持续张应力加载6 h。检测持... 详细信息

目的通过基因芯片技术研究持续张应力作用下大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化中基因表达差异。方法体外分离及培养大鼠BMSCs,使用Flexercell应力加载系统进行频率1 Hz、幅度10%持续张应力加载6 h。检测持续张应力下大鼠BMSCs差异表达基因谱,并通过qRT-PCR对部分芯片结果进行验证。结果加力组与对照组相比差异表达基因共有1 244条,其中上调基因793条,下调基因451条。基因本体论(gene ontology,GO)分类发现差异表达基因主要涉及多器官发育、细胞分化、细胞趋化、黏附等功能。Notch、Wnt、FGF及IGF 4条通路可能参与力学诱导下BMSCs成骨分化过程。差异表达基因的PCR验证结果与芯片结果保持一致。结论张应力可诱导BMSCs骨向分化,而基因芯片筛选出的差异表达基因可能是力学刺激诱导骨向分化的作用靶点。

关键词：基因芯片骨髓基质干细胞张应力骨向分化

淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化作用的实验研究

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中国中西医结合杂志 2015年第7期35卷 839-846页

作者：傅淑平杨丽洪浩偶晨张荣华南京中医药大学针药结合重点实验室南京210023 暨南大学药学院中药教研室广州510632

目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）骨向分化的作用特点。方法（1）采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12... 详细信息

目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）骨向分化的作用特点。方法（1）采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12、15、18、21天对细胞上清液中碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性的影响,采用茜素红染色法检测各浓度组BMSCs矿化情况,观察不同浓度的淫羊藿苷促BMSCs骨向分化的作用。（2）将BMSCs细胞分为空白对照组、成骨诱导组及淫羊藿苷组（0.5μg/m L）,在培养第7、14、21天检测各组细胞上清ALP活性,并于第14及21天分别检测各组细胞ALP阳性染色率与矿化结节数,同时采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测3个不同时间点各组细胞中核心结合蛋白因子（Runt-related transcripition factor-2,Runx2）及骨钙素（Osteocalcin）mRNA的表达水平。结果（1）0.05~5.0μg/m L淫羊藿苷均可明显提高细胞上清液中ALP活性,其中0.2~2.0μg/m L浓度组细胞结节数亦明显增加（P〈0.01）。（2）淫羊藿苷促BMSCs骨向分化时,Runx2 mRNA表达水平及ALP活性均先升后降;Osteocalcin mRNA表达水平则持续上升（P〈0.01）;与成骨诱导组比较,作用14天后,淫羊藿苷组ALP活性及ALP阳性染色率均明显提高（P〈0.05,P〈0.01）。结论淫羊藿苷通过上调Runx2基因的表达,促使BMSCs向成骨细胞分化,并通过增加细胞ALP分泌及Osteocalcin基因的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟。

关键词：淫羊藿苷骨髓间充质干细胞骨向分化核心结合蛋白因子骨钙素

牙龈卟啉单胞菌超声提取物对小鼠成骨细胞骨向分化蛋白表达的影响

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中华口腔医学杂志 2013年第7期48卷 398-402页

作者：张剑英俞少杰付云中山大学光华口腔医学院-附属口腔医院牙周科·广东省口腔医学重点实验室广州510055

目的研究牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis , Pg）W83超声提取物对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14（MC3T3-E1）骨向分化相关蛋白表达的影响，探讨Pg超声提取物对细胞成骨功能的作用。方法标准厌氧环境下培养PgW83，收集细菌沉淀，... 详细信息

目的研究牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis , Pg）W83超声提取物对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14（MC3T3-E1）骨向分化相关蛋白表达的影响，探讨Pg超声提取物对细胞成骨功能的作用。方法标准厌氧环境下培养PgW83，收集细菌沉淀，离心后制备细菌的超声提取物，然后以0（对照组）、10、100及1000mg／L的质量浓度加人MC3T3-E1的成骨诱导分化培养基中，培养14d后提取细胞总蛋白，蛋白质印迹法检测细胞骨钙蛋白、骨涎蛋白、骨桥蛋白及骨粘连蛋白的表达改变，酶标仪法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）的表达；培养21d后茜素红染色观察MC3T3-E1矿化结节形成情况；以上实验均重复3次，应用SPSS13．0统计软件对各组结果进行单因素方差分析，检验水准为双侧α=0．05。结果Pg超声提取物作用于MC3T3E114d后，100mg／L实验组细胞表达骨粘连蛋白、骨钙蛋白的相对表达量（分别为0．141±0．023、0．625±0．451）均显著低于对照组（均为1．000±0．000）和10mg／L组（分别为1．035±0．133、0．852±0．110）；1000mg／L组细胞表达骨粘连蛋白、骨钙蛋白的相对表达量（分别为0．020±0．003、0．213±0．053）均显著低于对照组、10及100mg／L组（P〈0．05），Pg超声提取物呈剂量依赖性显著下调骨粘连蛋白和骨钙蛋白的表达。1000mg／L高浓度时，Pg超声提取物显著下调骨桥蛋白的表达（蛋白相对表达量为0．572±0．162），与对照组、10及100mg／L实验组相比骨桥蛋白表达（分别为1．000±0．000、1．029±0．135、1．199±0．337）差异均有统计学意义（P〈0．05）。赡超声提取物不改变骨涎蛋白的表达，对照组、10、100及1000mg／L组间骨涎蛋白的相对表达量（分别为1．000±0．000、0．831±0．182、0．897±0．115、0．778±0．235）差异无统计学意义（P〉0．05）。Pg超声提取物抑制MC3T3-E1的ALP活性，其抑制作用随各实验组质量浓度的增加逐渐增强，10、100、1000mg／L质量浓度组ALP活性[分别为（0．0140±0．0011）、（0．0057±0．0013）及（0．0020±0．0008）U／gprot]均显著低于对照组[（0．0275±0．0014）U／gprot]（P〈0．05），同时Pg超声提取物作用于MC3T3-E121d后能明显抑制MC3T3-E1矿化结节的形成。结论Pg超声提取物可以下调小鼠成骨细胞骨向分化蛋白的表达，抑制细胞的成骨功能。

关键词：紫单胞菌龈成骨细胞碱性磷酸酶骨向分化

低氧对人牙周膜干细胞骨向分化影响的实验研究

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中华口腔医学杂志 2009年第9期44卷 543-547页

作者：候建霞 Peter M Loomer 北京大学口腔医学院口腔医院牙周科北京100081 Division of Periodontology University of California School of DentistrySan FranciscoU.S.A

目的观察体外低氧培养环境对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSC）生长、增殖及骨向分化的影响，以期为应用hPDLSC治疗牙周病提供依据。方法hPDLSC分别培养于常氧环境（氧的体积分数为20％）和低氧环境（... 详细信息

目的观察体外低氧培养环境对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSC）生长、增殖及骨向分化的影响，以期为应用hPDLSC治疗牙周病提供依据。方法hPDLSC分别培养于常氧环境（氧的体积分数为20％）和低氧环境（氧的体积分数为1.5％-2％）中。在培养的第1，2，4，6天分别提取细胞总RNA和总蛋白。运用蛋白免疫印迹法和半定量反转录聚合酶链反应分析比较不同培养环境下hPDLSC中碱性磷酸酶、骨钙素、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白和骨形成蛋白2的表达。结果在培养的第1、2天低氧轻度刺激hPDLSC的增殖（低氧组4值分别为0.516和0.697，常氧组A值分别为0.418和0.617），第3天后则明显抑制hPDLSC的增殖（低氧组A值0.870，常氧组4值1.242）。在培养第5天后低氧抑制碱性磷酸酶的活性高达90％（低氧组A值0.004，常氧组A值0.049）。低氧抑制富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在蛋白水平的表达，也抑制碱性磷酸酶、骨钙素和骨形成蛋白2在mRNA水平的表达。结论低氧抑制hPDLSC的增殖并下调骨形成蛋白2的表达，继而下调其下游目的基因，如碱性磷酸酶、骨钙素和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白的表达，从而抑制了人牙周膜干细胞骨向分化。

关键词：骨形态发生蛋白质类低氧牙周膜干细胞骨向分化

补肾活血复方含药血清对MSCs增殖和骨向分化影响的时效及量效研究

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中药材 2012年第2期35卷 259-263页

作者：杨丽朱晓峰张荣华暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学附属第一医院广东广州510632

目的:筛选补肾活血复方含药血清促SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化最佳取血时间和浓度。方法:10月龄SD雌性大鼠30只,随机分为补肾活血复方低(11.6 g/kg)、中(34.8 g/kg)、高(104.4 g/kg)剂量组,每组10只。灌胃1次/d,连续12 ... 详细信息

目的:筛选补肾活血复方含药血清促SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化最佳取血时间和浓度。方法:10月龄SD雌性大鼠30只,随机分为补肾活血复方低(11.6 g/kg)、中(34.8 g/kg)、高(104.4 g/kg)剂量组,每组10只。灌胃1次/d,连续12 d。分别于末次灌胃后的0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h取血,分离血清,然后将上述复方含药血清分别用不同添加浓度干预3月龄SD大鼠MSCs,以MTT法检测细胞增殖情况,以碱性磷酸酶(ALP)确定各组MSCs骨向分化情况。结果:补肾活血复方含药血清促MSCs增殖以复方低剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%的添加浓度为佳;促MSCs骨向分化以复方高剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%～30%的添加浓度为佳。结论:补肾活血复方含药血清能促进SD大鼠MSCs增殖及骨向分化。

关键词：补肾活血复方骨髓间充质干细胞增殖骨向分化时效量效

二仙汤对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及骨向分化的影响

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中国组织工程研究 2018年第25期22卷 3963-3968页

作者：吴琪刘波陈志徐彭江西中医药大学江西省南昌市330004 江西省中药药理学重点实验室江西省南昌市330004

背景:骨髓间充质干细胞参与骨形成,研究表明二仙汤能防治骨质疏松症,但对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的作用并不清楚。目的:通过研究二仙汤对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响,探讨二仙汤防治骨质疏松与骨髓间充质干... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞参与骨形成,研究表明二仙汤能防治骨质疏松症,但对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的作用并不清楚。目的:通过研究二仙汤对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响,探讨二仙汤防治骨质疏松与骨髓间充质干细胞之间的关系。方法:将大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、雌激素组、二仙汤高、中、低剂量组。以去卵巢法复制大鼠骨质疏松模型,除假手术组外,其他各组均手术彻底摘除卵巢。假手术组、模型组大鼠灌胃生理盐水,雌激素组大鼠灌胃戊酸雌二醇(0.08 g/L),二仙汤给药组大鼠灌胃二仙汤提取液(含生药量分别为1.2,0.8,0.4 g/m L),给药剂量为10 m L/kg,连续给药90 d。全骨髓贴法分离骨髓间充质干细胞,MTT法绘制细胞生长曲线,碱性磷酸酶检测试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活力,茜素红染色法检测细胞钙结节变化。结果与结论:与模型组相比,高、中、低剂量二仙汤均可显著提高去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力(P骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活力(P骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞钙结节的形成(P骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖、骨向分化能力是二仙汤治疗骨质疏松症的内在机制之一。

关键词：二仙汤骨髓间充质干细胞增殖骨向分化去卵巢大鼠组织工程间充质细胞碱性磷酸酶组织工程

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化过程中的Wnt经典信号通路研究

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华西口腔医学杂志 2015年第6期33卷 627-632页

作者：伍燕邓超杨琨崔晓霞刘琪金岩遵义医学院附属口腔医院遵义563003 贵阳市口腔医院牙周科贵阳550002 第四军医大学组织工程中心西安710032

目的探讨Wnt经典通路相关因子Dickkopf蛋白1(DKK-1)、β-链蛋白(β-catenin)在糖基化终末产物(AGEs)介导的人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨分化过程中的变化。方法通过体外组织块法和有限稀释法克隆化培养获取h PDLSCs,实验分两组:正常h PDL... 详细信息

目的探讨Wnt经典通路相关因子Dickkopf蛋白1(DKK-1)、β-链蛋白(β-catenin)在糖基化终末产物(AGEs)介导的人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨分化过程中的变化。方法通过体外组织块法和有限稀释法克隆化培养获取h PDLSCs,实验分两组:正常h PDLSCs组(N-h PDLSCs组)和AGEs刺激的正常h PDLSCs组(A-h PDLSCs组)。对2组细胞成骨矿化诱导后行碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色;实时聚合酶链反应(real time PCR)检测成骨基因,以及Wnt经典通路中相关因子DKK-1、β-catenin;Western blot检测相关成骨蛋白、细胞核蛋白β-catenin。结果成骨诱导后,A-h PDLSCs组ALP染色明显浅于N-h PDLSCs组;茜素红染色A-h PDLSCs组钙化结节少于N-h PDLSCs组;real time PCR与Western blot的结果显示A-h PDLSCs组BSP、ALP、Runx-2的表达都较低,差异有统计学意义(P骨向分化过程中Wnt经典通路的抑制因子DKK-1下调,细胞核中的β-catenin表达升高,激活了Wnt经典通路,并且抑制了骨分化。

关键词：糖基化终末产物人牙周膜干细胞骨向分化 Wnt经典通路