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4种抗原定量方法观察牛支原体培养特征

中国畜牧兽医 2016年第10期43卷 2634-2639页

作者：王展慧赵萍陈胜利郝华芳秦明明王绍伟刘永生储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

为探索在疫苗研制过程中牛支原体抗原收获时间及抗原定量替代方法,将牛支原体08M株接种于含10%马血清的Thiaucourt’s培养基,在110h内同时监测其颜色变化单位（color change units,CCU）、菌落形成单位（colony forming units,CFU）、... 详细信息

为探索在疫苗研制过程中牛支原体抗原收获时间及抗原定量替代方法,将牛支原体08M株接种于含10%马血清的Thiaucourt’s培养基,在110h内同时监测其颜色变化单位（color change units,CCU）、菌落形成单位（colony forming units,CFU）、菌体蛋白浓度和核酸含量的变化,绘制相应曲线。活菌计数结果（CCU和CFU）显示,牛支原体生长可分为明显的4期,10h进入对数期,30h进入稳定期,活菌数最高可达1.0×108 CCU/mL和7.7×107 CFU/mL,75h进入衰亡期;蛋白浓度从15h开始迅速增长,至35h蛋白浓度最高,为72.06μg/mL,此后维持在58.38～70.65μg/mL;核酸含量从15h开始增长,至25h后Ct值维持在15.32～17.84。结果表明,牛支原体蛋白含量在稳定期初期与活菌数具有良好的相关性。因此,在牛支原体灭活疫苗生产中,稳定期初期是最佳抗原收获时间,可用蛋白浓度法代替活菌计数法进行抗原定量。

关键词：牛支原体抗原定量颜色变化单位菌落形成单位蛋白浓度核酸含量

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牛支原体扩大培养效果测定及生长曲线的观察

黑龙江畜牧兽医 2015年第8期 29-31,34,293页

作者：杨铭伟高家登王超丽杨龙龙剡根强王静梅石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

为了监测培养过程中牛支原体的生长情况,利用含氯化三苯基四氮唑（TTC）牛支原体培养基,采用倾注培养法对牛支原体扩大培养效果进行了菌落形成单位（CFU）计数,通过颜色变化单位（CCU）法进行浓度检测,并测定了OD630值及p H值的变化,据... 详细信息

为了监测培养过程中牛支原体的生长情况,利用含氯化三苯基四氮唑（TTC）牛支原体培养基,采用倾注培养法对牛支原体扩大培养效果进行了菌落形成单位（CFU）计数,通过颜色变化单位（CCU）法进行浓度检测,并测定了OD630值及p H值的变化,据此绘制生长曲线。结果表明：待测牛支原体培养物在梯度稀释后采用倾注培养可方便计数,且计数菌落显色特征明显;CCU法检测待测菌株在96小时时的生长效价为5.0×108CCU/m L;牛支原体纯培养物在不同时段其OD630值变化范围为0.024~0.213,呈现二段式分布,即快速上升阶段和平稳阶段,平稳阶段后有下降趋势;p H值变化范围为6.8~7.9,随时间累积而下降,且在培养48 h内下降速度较快,48~84 h下降缓慢,84 h后基本无变化。

关键词：牛支原体扩大培养菌落形成单位颜色变化单位生长曲线

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3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

中国畜牧兽医 2013年第3期40卷 177-180页

作者：何曼莉费磊岳华汤承西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041

本研究采用改良Thiaucourt’s培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CC... 详细信息

本研究采用改良Thiaucourt’s培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4h为SC01的迟缓期,4～16h为对数生长期,lg CCU/mL最高达到10.7000±0.4700,16～20h为稳定期,20h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D420nm随着培养时间延长逐渐上升,2h时为0.0028±0.0002,4～12hD420nm增加较缓慢,而12～24h增加最快,24h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2h时lg拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30h时lg拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。

关键词：绵羊肺炎支原体颜色变化单位浊度实时荧光定量PCR

山羊支原体山羊肺炎亚种在2种培养基上的生长特性比较

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中国兽医学报 2021年第5期41卷 911-914,919页

作者：张晓亮马水燕郝华芳陈胜利颜新敏马丽娜刘永生储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为筛选出山羊传染性胸膜肺炎疫苗制备中抗原产量高且成本低的培养基,本试验将山羊支原体山羊肺炎亚种M1801株和M1601株接种于含20%马血清的改良Thiaucourt’s肉汤(MTB)和新研制的含5%马血清的培养基(HF3),在120 h内监测其pH值、颜色变... 详细信息

为筛选出山羊传染性胸膜肺炎疫苗制备中抗原产量高且成本低的培养基,本试验将山羊支原体山羊肺炎亚种M1801株和M1601株接种于含20%马血清的改良Thiaucourt’s肉汤(MTB)和新研制的含5%马血清的培养基(HF3),在120 h内监测其pH值、颜色变化单位(color change units, CCU)和菌体蛋白浓度的变化,绘制相应曲线。结果表明,山羊支原体山羊肺炎亚种用HF3培养时pH值下降更慢,2个菌株在HF3培养基中的CCU计数均高于MTB培养基,且高滴度维持时间更长,菌体的蛋白浓度也略高于MTB培养基。结果提示山羊支原体山羊肺炎亚种在HF3培养基中产量更高,较MTB具有更好的效果,且血清浓度低,成本更低廉,为山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗的大批量生产奠定了基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种培养基筛选低血清培养基颜色变化单位蛋白浓度

羊支原体山羊肺炎亚种在两种培养基上的生长特性比较

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畜牧兽医杂志 2022年第5期41卷 4-9页

作者：张洁慧甘肃畜牧工程职业技术学院甘肃武威733006

通过比较山羊支原体肺炎亚种在两种不同培养基上的繁殖情况,筛选出成本低、生长迅速、产量高的适合疫苗制备的培养基。选用山羊支原体肺炎亚种F38株,分别接种到改良的Thiaucourt’s肉汤(MTB)培养基和含5%马血清的改良培养基(HF3)上,在1... 详细信息

通过比较山羊支原体肺炎亚种在两种不同培养基上的繁殖情况,筛选出成本低、生长迅速、产量高的适合疫苗制备的培养基。选用山羊支原体肺炎亚种F38株,分别接种到改良的Thiaucourt’s肉汤(MTB)培养基和含5%马血清的改良培养基(HF3)上,在144h内检测菌落形成单位(colony forming units,CFU)、颜色变化单位(color change units,CCU)、菌体蛋白浓度变化情况,并绘制出生长曲线图。山羊支原体肺炎亚种F38株在HF3培养基中CCU计数和CFU计数均高于MTB培养基上的计数,但蛋白浓度略低于MTB培养基培养情况,HF3培养基较MTB具有更好的培养效果。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种培养基颜色变化单位菌落形成单位蛋白浓度

不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响

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四川畜牧兽医 2013年第6期40卷 29-31页

作者：杜德燕张洪姜来生方鹏飞徐静四川省华派生物制药有限公司四川简阳641400

本试验将猪肺炎支原体在不同容积的玻璃瓶中进行培养,对各自生长过程中不同时间点的颜色变化单位(CCU)和pH进行测定,分析不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示:与小瓶培养的猪肺炎支原体相比,万瓶的生长速度慢、CCU... 详细信息

本试验将猪肺炎支原体在不同容积的玻璃瓶中进行培养,对各自生长过程中不同时间点的颜色变化单位(CCU)和pH进行测定,分析不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示:与小瓶培养的猪肺炎支原体相比,万瓶的生长速度慢、CCU低、收获菌种的pH范围较广。本试验为猪肺炎支原体大规模培养和疫苗生产提供了参考。

关键词：猪肺炎支原体颜色变化单位 pH 疫苗

支原体检验用培养基质控菌株的生长曲线与世代时间测定

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中国兽药杂志 2012年第12期46卷 13-15,18页

作者：刘轶秋丁家波李蓓蓓徐磊张瑞婷中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了摸索用于支原体培养基检验用质控菌株的生长规律,利用活菌计数方法测定滑液支原体、猪鼻支原体不同培养时段的颜色变化单位(CCU),并绘制生长曲线,确定世代时间。结果表明:滑液支原体菌株迟缓期在培养后6 h内,对数期为培养后6～36 h... 详细信息

为了摸索用于支原体培养基检验用质控菌株的生长规律,利用活菌计数方法测定滑液支原体、猪鼻支原体不同培养时段的颜色变化单位(CCU),并绘制生长曲线,确定世代时间。结果表明:滑液支原体菌株迟缓期在培养后6 h内,对数期为培养后6～36 h,稳定期为培养后36～54 h,衰老期为培养54 h之后,世代时间G=231.8 min;猪鼻支原体菌株迟缓期在培养后6 h内,对数期为培养后6～18 h,稳定期为培养后18～126 h,衰老期为培养126 h之后,世代时间G=117.1 min。通过对质控菌株生长规律的初步探索,为培养基检验及质控菌株的使用提供了参考。

关键词：质控菌株生长曲线世代时间颜色变化单位支原体检验培养基

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支原体液体培养基质控菌生长分析

中国药事 2023年第2期37卷 210-214页

作者：董姣姣杨江威赵卓王金恒北京三药科技开发公司北京100176 中国食品药品检定研究院北京100050

目的:摸索肺炎支原体在支原体肉汤培养基和口腔支原体在精氨酸支原体肉汤培养基中的生长规律,比较不同密闭方式对支原体液体培养基灵敏度的影响,同时考察液体培养基基础的有效期。方法:采用变色单位试验法测试肺炎支原体和口腔支原体在... 详细信息

目的:摸索肺炎支原体在支原体肉汤培养基和口腔支原体在精氨酸支原体肉汤培养基中的生长规律,比较不同密闭方式对支原体液体培养基灵敏度的影响,同时考察液体培养基基础的有效期。方法:采用变色单位试验法测试肺炎支原体和口腔支原体在相应液体培养基不同培养时间段的颜色变化单位(CCU),并绘制生长曲线。使用3种不同密闭方式的器具制备液体培养基并检测灵敏度。测试液体培养基基础存放0、15、30、60和90天的灵敏度。结果:使用3种不同密闭方式培养,支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基灵敏度均达到109 CCU·mL^(-1)。支原体肉汤基础和精氨酸支原体肉汤基础存放于2~8℃有效期为90天。结论:本试验为支原体液体培养基灵敏度的检查和研究提供依据。

关键词：质控菌生长曲线颜色变化单位支原体培养基有效期