3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

作     者：何曼莉 费磊 岳华 汤承 HE Man-li;FEI Lei;YUE Hua;TANG Cheng

作者机构：西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2013年第40卷第3期

页      面：177-180页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家"863计划"项目(2012AA101304) 四川省科技创新产业链示范工程项目--山羊现代产业链关键技术集成研究与产业化示范(2011NZ0003) 

主　　题：绵羊肺炎支原体 颜色变化单位 浊度 实时荧光定量PCR 

摘      要：本研究采用改良Thiaucourt’s培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae,MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4h为SC01的迟缓期,4～16h为对数生长期,lg CCU/mL最高达到10.7000±0.4700,16～20h为稳定期,20h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D420nm随着培养时间延长逐渐上升,2h时为0.0028±0.0002,4～12hD420nm增加较缓慢,而12～24h增加最快,24h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2h时lg拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30h时lg拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。