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构建体外错配修复功能分析模型及其在人类结直肠癌细胞株及肿瘤组织中的应用

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复旦学报（医学版） 2004年第3期31卷 284-289,296,F004页

作者：王怡 Clark Alan 王家训孙孟红施达仁复旦大学附属肿瘤医院病理科上海200032 Laboratory of Molecular Genetics National Institute of Environmental Health 中国科学院上海植物生理生态研究所上海200032

目的　构建体外错配修复 (mismatchrepair,MMR)功能分析模型 ,应用于人类结直肠癌细胞株及肿瘤组织 ,分析其整体的MMR功能状态 ;并与微卫星稳定性 (microsatellitestability ,MSS)检测结果比较 ,评价这两种检测方法在结直肠癌基础研究... 详细信息

目的　构建体外错配修复 (mismatchrepair,MMR)功能分析模型 ,应用于人类结直肠癌细胞株及肿瘤组织 ,分析其整体的MMR功能状态 ;并与微卫星稳定性 (microsatellitestability ,MSS)检测结果比较 ,评价这两种检测方法在结直肠癌基础研究和临床诊断治疗中的价值。方法　以噬菌体M 13mp2为材料 ,以lacZα为报告基因 ,构建含有单碱基错配及双碱基缺失的异源双链DNA分子 ;以其为待修复模板和细胞株TK6 (作为MMR功能完整表型 )共同组成体外MMR功能分析模型。提取结肠癌细胞株Lovo及 1例遗传性非腺瘤病性结直肠癌(hereditarynon polyposiscolorectalcancer ,HNPCC) ,1例散发性直肠癌 (sporadicrectalcancer,SRC)肿瘤组织的总蛋白 ,经大T抗原依赖性SV 4 0DNA复制证实其生物学活性保持良好后与构建成功的异源双链DNA共同作用 ,通过作用前后噬斑的变化 ,计算修复效率 ,从而了解其错配修复系统功能状态。采用国际HNPCC合作小组推荐的 5个位点分析细胞及病人正常及肿瘤组织的微卫星稳定性。结果　TK6细胞株微卫星稳定 ,对双碱基缺失del(2 )的修复效率超过 6 0 % ,对单碱基错配G·G的修复效率超过 5 0 % ;而Lovo细胞株微卫星不稳 ,对双碱基缺失del(2 )的修复效率低于 2 0 % ,对单碱基错配G·G的修复效率低于 10 %。 1?

关键词：错配修复功能分析微卫星稳定性遗传性非腺瘤性结直肠癌

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错配修复蛋白表达水平与肾细胞癌预后

华中科技大学学报（医学版） 2004年第1期33卷 94-96页

作者：徐伟刘成倍王祥林庞桂建毕新生广西医科大学第六附属医院泌尿外科玉林537000 广西医科大学第六附属医院病理科玉林537000

目的研究错配修复基因hMLH1和hMSH2在不同肾组织中的表达水平及其对肾癌预后的预测。方法采用免疫组织化学方法检测71例肾癌组织及其癌周正常组织,31例肾良性病变组织石蜡标本中hMLH1、hMSH2的表达水平,同时收集所有标本的详细病理学资... 详细信息

目的研究错配修复基因hMLH1和hMSH2在不同肾组织中的表达水平及其对肾癌预后的预测。方法采用免疫组织化学方法检测71例肾癌组织及其癌周正常组织,31例肾良性病变组织石蜡标本中hMLH1、hMSH2的表达水平,同时收集所有标本的详细病理学资料,将蛋白表达水平与病理结果进行对比。结果 hMLH1和hMSH2的表达水平在肾良性病变中均明显高于癌组织和癌周正常组织,在高分化肾癌中均明显高于低分化肾癌,1年内无复发组显著高于1年内复发组;hMSH2在无转移组中的表达显著高于有转移组,而hMLH1在有无转移组的表达差异无显著性意义。结论 hMLH1、hMSH2两种修复蛋白在肾癌和肾良性病变组织中的表达水平有明显差异,且与肿瘤分化程度和肿瘤复发密切相关;hMSH2与肾癌转移有关,hMLH1与转移的关系不明显。hMSH2和hMLH1蛋白表达水平对肾癌预后有一定的预测作用。

关键词：错配修复蛋白表达肾细胞癌预后

错配修复蛋白hMLH1在子宫内膜癌表达的临床意义

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第6期26卷 676-679页

作者：林美芳柯佩琪罗容珍朱云晓沈宏伟中山大学附属一院妇产超声科中山大学附属一院妇产科广东广州510080 中山大学肿瘤防治中心病理科广东广州510060

【目的】探讨错配修复蛋白hMLH1在子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)的失表达情况及其临床意义。【方法】用免疫组化S-P方法检测hMLH1蛋白在61例子宫内膜癌组织的失表达情况，并分析hMLH1蛋白失表达与子宫内膜癌临床病理的关系... 详细信息

【目的】探讨错配修复蛋白hMLH1在子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)的失表达情况及其临床意义。【方法】用免疫组化S-P方法检测hMLH1蛋白在61例子宫内膜癌组织的失表达情况，并分析hMLH1蛋白失表达与子宫内膜癌临床病理的关系。【结果】子宫内膜癌组织存在hMLH1蛋白失表达，其失表达率为29.5％。hMLH1失表达子宫内膜癌细胞分化较好(P=0.047)，临床预后较好(OR=5.458，P=0.025)，hMLH1失表达为子宫内膜癌独立预后因素(Cox多因素分析，P=0.006)。【结论】 hMLH1基因功能缺失在子宫内膜癌代表较良好的预后，hMLH1失表达有可能作为子宫内膜癌的独立预后因素。

关键词：子宫内膜癌错配修复 hMLH1

错配修复蛋白Tmlh1维持嗜热四膜虫细胞核的稳定性

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第10期36卷 1210-1219页

作者：许静杨茹霞薄涛王伟化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所太原030006 山西大学生命科学学院太原030006

DNA错配修复(DNA mismatch repair,MMR)蛋白Mlh1和其它因子形成多种不同的复合物,在DNA复制后的MMR途径和减数分裂DNA重组中发挥重要作用。然而对Mlh1的功能并不完全清楚,进一步分析Mlh1在不同进化地位生物中的功能具有重要意义。嗜热... 详细信息

DNA错配修复(DNA mismatch repair,MMR)蛋白Mlh1和其它因子形成多种不同的复合物,在DNA复制后的MMR途径和减数分裂DNA重组中发挥重要作用。然而对Mlh1的功能并不完全清楚,进一步分析Mlh1在不同进化地位生物中的功能具有重要意义。嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)含有不同的错配修复复合物,基因表达谱分析发现,MutL复合物中的TMLH1(TTHERM_00127000)在营养生长期和饥饿期低水平表达,在有性生殖减数分裂期表达水平显著上调。免疫荧光定位显示营养生长期,Tmlh1定位于生殖系小核和转录活跃的大核;有性生殖期,定位于功能性小核和亲本大核,但在凋亡的大核和小核中消失。在减数分裂和有丝分裂时期,Tmlh1和α-微管蛋白(α-tubulin)存在共定位;而有性生殖后期,Tmlh1与异染色质蛋白Pdd1共定位于DNA删除的异染色结构域。TMLH1敲除细胞增殖速率降低,DNA损伤修复抑制,导致有性生殖细胞配对率降低和微核形成。1 mmol/L甲基甲磺酸甲酯(methy methanesulfonate,MMS)处理下,ΔTMLH1细胞传代时间增加了4.53%±0.35%,而野生型细胞传代时间增加了0.60%±0.14%。TMLH1敲除突变细胞株小核上呈现强烈的γ-H2A.X的荧光信号。免疫共沉淀和蛋白质谱分析发现,Tmlh1同微管蛋白、错配修复因子MutS、同源重组修复关键因子Rad51,非同源末端修复因子Ku80因子等存在相互作用。这些结果表明,嗜热四膜虫错配修复蛋白Tmlh1通过多种途径参与DNA修复和基因组重排,从而维持四膜虫生长发育和有性生殖过程中细胞核的稳定性。

关键词：错配修复纺锤体异染色质体嗜热四膜虫

分泌型卷曲相关蛋白4在不同DNA错配修复功能状态Ⅱ期肠癌中的表达及意义

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南方医科大学学报 2018年第11期38卷 1300-1305页

作者：陈可绪梁汉霖彭杰文郑燕芳中山市人民医院肿瘤分院广东中山528400 南方医科大学珠江医院肿瘤中心广东广州510282

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR状态分为pMMR和dMMR组。利用Affymetrix Human oeLncRNA基因芯片检测两组不同MM... 详细信息

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR状态分为pMMR和dMMR组。利用Affymetrix Human oeLncRNA基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot技术检测dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果 PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株中的表达明显高于pMMR的肠癌组织(P=0.014)、细胞株(P=0.0079),免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表达呈负相关关系(P=0.041)。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡(P=0.003)和晚期凋亡率(P=0.024)。结论 SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺陷型Ⅱ期肠癌预后。

关键词：肠癌错配修复分泌型卷曲相关蛋白4 增殖凋亡

分枝杆菌非典型错配修复及其在抗生素耐药中的研究进展

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遗传 2023年第11期45卷 1018-1027页

作者：向莎莎谢建平西南大学生命科学学院现代生物医药研究所重庆400715

错配修复(mismatch repair,MMR)是生物体DNA复制后的一种常见修复系统,对于维持基因组稳定性至关重要,其关键步骤由MutS和MutL蛋白家族的成员执行,尽管这种修复途径十分重要,但在许多古菌和放线菌基因组中并不存在MutS或MutL的同源蛋白... 详细信息

错配修复(mismatch repair,MMR)是生物体DNA复制后的一种常见修复系统,对于维持基因组稳定性至关重要,其关键步骤由MutS和MutL蛋白家族的成员执行,尽管这种修复途径十分重要,但在许多古菌和放线菌基因组中并不存在MutS或MutL的同源蛋白。这类细菌(例如分枝杆菌等)采用另一种非典型的MMR途径,由核酸内切酶EndoMS/NucS发挥关键作用,与典型MMR蛋白(MutS/MutL)相比没有结构同源性。EndoMS/NucS介导的非典型错配修复在分枝杆菌DNA修复、突变和同源重组以及抗生素耐药等方面发挥重要作用。本文通过对比典型MMR途径和非典型MMR途径,深入阐述了分枝杆菌EndoMS/NucS介导的非典型MMR途径及其最新进展,以期为分枝杆菌错配修复分子机制带来新见解以及对分枝杆菌抗生素治疗提供研究线索。

关键词：分枝杆菌错配修复 EndoMS/NucS 抗生素耐药

错配修复基因hMSH2在阿霉素耐药白血病细胞K562中的表达

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大连医科大学学报 2009年第4期31卷 272-274页

作者：刘渤时妍妍李梅王彦李玲吕申大连医科大学组织胚胎学教研室辽宁大连116044 大连医科大学附属第二医院中心实验室辽宁大连116027

[目的]探讨错配修复蛋白hMSH2与白血病耐药发生的关系。[方法]MTT检测K562/ADM细胞耐药倍数,PT-PCR检测K562与K562/ADM的hMSH2基因表达,Western-blot检测二者的hMSH2蛋白表达,免疫细胞化学方法检测正常血有核细胞的hMSH2蛋白表达。[结果... 详细信息

[目的]探讨错配修复蛋白hMSH2与白血病耐药发生的关系。[方法]MTT检测K562/ADM细胞耐药倍数,PT-PCR检测K562与K562/ADM的hMSH2基因表达,Western-blot检测二者的hMSH2蛋白表达,免疫细胞化学方法检测正常血有核细胞的hMSH2蛋白表达。[结果]K562/ADM耐药倍数为6.7倍,正常血有核细胞未见hM-SH2蛋白表达,Western-blot显示K562/ADM的hMSH2蛋白表达强于K562。[结论]白血病细胞K562存在hM-SH2基因及其产物的表达;耐药细胞的hMSH2蛋白增多可能与持续阿霉素作用有关。

关键词：白血病错配修复耐药

错配修复蛋白（hMLH1，hMSH2）在大肠息肉和散发性大肠癌中的表达差异

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错配修复蛋白（hMLH1，hMSH2）在大肠息肉和散发性大肠癌中的表达...

作者：项芳芳安徽医科大学

学位级别：硕士

目的大肠癌（colorectal cancer，CRC）在北美、西欧等发达国家发病率最高，近年亚洲地区其发病率不断上升。我国原是大肠癌发病率相对较低的国家，但近年来随着我国人民生活饮食习惯的西化，大肠癌的发病率和死亡率也呈现升高趋势。... 详细信息

目的大肠癌（colorectal cancer，CRC）在北美、西欧等发达国家发病率最高，近年亚洲地区其发病率不断上升。我国原是大肠癌发病率相对较低的国家，但近年来随着我国人民生活饮食习惯的西化，大肠癌的发病率和死亡率也呈现升高趋势。肿瘤的发生发展是一个极其复杂的动态过程,是一个涉及多因素、多步骤、多基因改变的复杂过程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活，以及微卫星不稳定(micro-satellite instability，MSI)等等。有研究表明,错配修复基因（mismacth repair gene, MMR）的突变是结直肠癌发生发展的重要途径之一,其中，hMLH1和hMSH2基因是最重要的两个错配修复基因。有研究发现在95%的遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary non-polyp sis colorectal cancer, HNPCC）中有错配修复基因的突变，而在散发性结直肠癌（sporadic colorectalcancer,SCRC）中,错配修复基因突变也起着重要作用。随着散发性大肠癌的发病率的上升，有关这两种错配修复基因突变与大肠癌的关系的研究也逐渐被重视，但对于大肠癌公认的癌前病变大肠腺瘤的这两种相关基因突变的研究，仍然较少。作为大肠癌癌前病变的大肠腺瘤，hMLH1和hMSH2基因是否也存在一定的突变率？管状腺瘤与绒毛状腺瘤的这两种基因的突变率是否有差异？或者是哪种病理类型的大肠癌其hMLH1和hMSH2基因突变可能性更高等目前均不清楚。本研究旨在探讨错配修复蛋白（主要是hMLH1和hMSH2）在大肠腺瘤中的表达，初步探讨其在大肠腺瘤发展至大肠癌过程中所起的作用。方法本研究根据大肠息肉的病理类型将其分为大肠炎性息肉组、大肠管状腺瘤组、大肠绒毛状腺瘤组三组，采用免疫组化的方法检测这三组标本组织中hMLH1蛋白和hMSH2蛋白表达及突变情况，以期了解MMR蛋白突变在大肠炎性息肉组织、大肠腺瘤组织、大肠癌组织中表达的差异及其相关性，探讨MMR基因与大肠腺瘤的关系，进一步了解hMLH1和hMSH2基因与大肠腺瘤-大肠癌的相关性。结果大肠炎性息肉组织中hMLH1蛋白阴性表达率为4.76%，hMSH2蛋白100%阳性表达，两种蛋白的阴性表达率与炎性息肉组织的年龄、性别、息肉数量及息肉部位等因素无关。大肠腺瘤性息肉组织中hMLH1蛋白阴性表达率为21.02%，hMSH2蛋白阴性表达率为8.92%，两者共同阴性表达率为5.10%，两者合并阴性表达率为24.84%，两种蛋白的阴性表达率与腺瘤性息肉的年龄、性别、息肉数量及息肉部位等因素无关，也与息肉的绒毛比例无关。散发性大肠癌组织中，hMLH1蛋白阴性表达率为27.27%，hMSH2蛋白阴性表达率为13.64%，两者共同阴性表达率为4.55%，总阴性表达率为36.36%，两种蛋白的阴性表达率与患者年龄、性别及部位等因素无关，与肿瘤的分化程度相关（P＜0.05），肿瘤的分化程度越低，两种蛋白的阴性表达率越高，恶性度越高。结论本文的结果表明在大肠炎性组织、大肠腺瘤性息肉组织以及大肠癌组织中，hMLH1和hMSH2两种蛋白的阴性表达率呈现递增的趋势，差异有统计学意义。而且在三组标本组织中，hMLH1蛋白阴性表达率均远大于hMSH2的蛋白阴性表达率。hMLH1和hMSH2蛋白阴性表达率从炎性息肉组织、腺瘤组织到腺癌组织逐渐递增，提示早在腺瘤阶段已经有MMR的基因的突变或功能异常，并且随其恶性程度的增加，MMR基因的突变频率也逐渐升高,提示MMR基因的突变，尤其是hMLH1和hMSH2的突变可能是大肠癌发生的早期事件之一。在三组标本组织中，错配修复功能表达缺失均以hMLH1蛋白的表达缺失为主，提示错配修复基因hMLH1的突变在大肠腺瘤-大肠癌的发病过程中起着重要作用。

关键词：错配修复大肠腺瘤散发性大肠癌免疫组化

错配修复蛋白在结直肠癌中的临床意义及其与BRAFV600E突变相关性研究

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错配修复蛋白在结直肠癌中的临床意义及其与BRAFV600E突变相关性...

作者：李政河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探究结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)中DNA错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白表达状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨MMR蛋白表达与BRAF突变之间联系。方法:1搜集并选取2015年5月至2016年12月期间于河北医科大学第四医... 详细信息

目的:探究结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)中DNA错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白表达状态及其与临床病理特征之间的关系,并探讨MMR蛋白表达与BRAF突变之间联系。方法:1搜集并选取2015年5月至2016年12月期间于河北医科大学第四医院外二科行手术治疗并经病理证实的723例CRC患者的临床病理资料,全部入组者均未行术前放化疗治疗。使用免疫组织化学法检测723例入组者肿瘤组织中MMR蛋白表达缺失状况和BRAF蛋白表达状况,MLH1、PMS2、MSH2、MSH6蛋白其中一种或更多表达缺失即认定为错配修复基因缺陷(deficent Mismatch Repair,dMMR),全部表达认定为错配修复基因完整(proficient Mismatch Repair,p MMR),BRAF蛋白表达则判定为BRAF基因突变。2根据MMR蛋白表达状态及临床病理资料,将723例CRC患者分为3组:1)dMMR的散发性结直肠癌组,2)p MMR的散发性结直肠癌组,3)遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)组。3采用卡方检验、Logistic回归、Spearman等级相关分析、均数±标准差等对所得数据进行统计学分析。结果:1 723例CRC肿瘤组织中存在99例错配修复基因缺陷者,其中为SCRC者81例,为HNPCC者18例,缺失率约为13%。4种MMR蛋白表达缺失率分别为8.4%(61/723)MLH1表达缺失、7.5%(55/723)PMS2表达缺失、5.5%(40/723)MSH6表达缺失和4.1%(30/723)MSH2的表达缺失。6.9%(50/723)标本中MLH1-PMS2共同表达缺失、4%(29/723)MSH2-MSH6共同表达缺失,0.5%(4/723)MLH1-PMS2-MSH6共同表达缺失。虽然MLH1表达缺失或MLH1-PMS2共同表达缺失在dMMR的SCRC组高于HNPCC组(65.4%>50%),但是没有统计学差异(P>0.05)。MSH2表达缺失或MSH2-MSH6共同表达缺失在dMMR的SCRC组明显低于HNPCC组(25.9%0.05)。多因素分析显示:SCRC的dMMR与肿瘤部位、分化程度及组织学类型密切相关(P0.05)。4 723例CRC中BRAF突变率为3.6%(26/723),81例dMMR的SCRC组中BRAF突变率为8.6%(7/81),显著高于3%(19/624)p MMR的SCRC组突变率(P0.05)。结论:1 MMR蛋白表达缺失的结直肠癌占总体结直肠癌比例偏低,以MLH1蛋白表达缺失最为常见。相比dMMR的SCRC,HNPCC患者中MSH2表达缺失率或MSH2-MSH6共同表达缺失率更高。2 MMR蛋白表达缺失的散发性结直肠癌具有其独特的临床病理特征。肿瘤部位、分化程度及组织学类型是MMR蛋白缺陷的独立相关危险因素。3 HNPCC患者发病年龄早于总体发病年龄;MMR蛋白表达缺失与BRAF突变呈正相关性,MMR蛋白缺陷的散发性结直肠癌中BRAF突变率更高;对MMR蛋白和BRAF进行检测可以为临床个体化治疗和预后判断提供参考,同时提高林奇综合征确诊率,简化筛查流程。

关键词：散发性结直肠癌 HNPCC 错配修复 BRAF基因微卫星不稳定林奇综合征