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金属螯合亲和层析在纯化重组类人胶原蛋白中的应用

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高校化学工程学报 2005年第3期19卷 410-413页

作者：王晓军范代娣西北大学化工学院

研究了应用金属螯合亲和层析法纯化重组类人胶原蛋白的条件。分别考察了不同金属离子、平衡缓冲液pH值及两种洗脱方法对纯化结果的影响。结果表明,用锌离子螯合介质,pH7.5磷酸盐缓冲液平衡,上样后用100mmol·L-1氯化铵洗脱纯化效果最佳... 详细信息

研究了应用金属螯合亲和层析法纯化重组类人胶原蛋白的条件。分别考察了不同金属离子、平衡缓冲液pH值及两种洗脱方法对纯化结果的影响。结果表明,用锌离子螯合介质,pH7.5磷酸盐缓冲液平衡,上样后用100mmol·L-1氯化铵洗脱纯化效果最佳。纯化后重组类人胶原蛋白的纯度达98%,回收率为85.4%,纯化倍数为3.4。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与N端序列分析结果均证明所得纯品为重组类人胶原蛋白。

关键词：重组类人胶原蛋白金属螯合亲和层析纯化

Cu^2＋ - IDA金属螯合尼龙-壳聚糖复合膜的制备及其亲和分离性能研究

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高校化学工程学报 2009年第1期23卷 137-141页

作者：姜海容葛东涛石巍厦门大学化学化工学院化学实验教学中心厦门大学材料学院生物医学工程研究中心福建厦门361005

为获得既具有良好机械强度和化学稳定性又具有大量活性官能团的金属螯合亲和膜介质,以尼龙膜为基膜,采用环氧氯丙烷活化共价偶联壳聚糖,制备尼龙-壳聚糖复合膜,膜上偶联壳聚糖的含量达98.2mg·(g膜)-1,为配基的固载提供了大量活性位点... 详细信息

为获得既具有良好机械强度和化学稳定性又具有大量活性官能团的金属螯合亲和膜介质,以尼龙膜为基膜,采用环氧氯丙烷活化共价偶联壳聚糖,制备尼龙-壳聚糖复合膜,膜上偶联壳聚糖的含量达98.2mg·(g膜)-1,为配基的固载提供了大量活性位点。再次采用环氧氯丙烷活化复合膜,进而偶联亚氨二乙酸(IDA)、固定化Cu2+,获得金属螯合尼龙-壳聚糖复合型亲和膜,配基Cu2+固载量为5.4μmol·cm-2。以牛血清白蛋白为目标蛋白,考察亲和膜的分离性能。研究结果表明:牛血清白蛋白在膜上的吸附行为符合Langmuir吸附等温方程,膜对牛血清白蛋白具有较好的亲和吸附效果,吸附容量达1.09mg·cm-2。该膜具有较长的使用寿命并且容易再生。

关键词：尼龙膜壳聚糖亲和膜吸附金属螯合

基于琼脂糖微球金属螯合层析介质的制备及性能评价

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化工进展 2024年第10期43卷 5693-5703页

作者：曾泽阳徐偲金子杰王晓钟陈英奇戴立言浙江大学化学工程与生物工程学院浙江杭州310058 浙江大学衢州研究院浙江衢州324000

以琼脂糖凝胶微球为研究对象,通过对微球进行化学交联与配体连接,制备系列金属螯合亲和层析介质,并测试其在模型蛋白中的吸附性能。首先,探究不同工艺条件对微球尺寸的影响。结果表明,在最优条件下,琼脂糖微球粒径集中在45~160µm之间,... 详细信息

以琼脂糖凝胶微球为研究对象,通过对微球进行化学交联与配体连接,制备系列金属螯合亲和层析介质,并测试其在模型蛋白中的吸附性能。首先,探究不同工艺条件对微球尺寸的影响。结果表明,在最优条件下,琼脂糖微球粒径集中在45~160µm之间,收率为95%,平均粒径为91.2µm。随后,以琼脂糖微球4B和6B为原料制备交联琼脂糖微球4FF(4FastFlow)和6FF(6FastFlow),调控交联剂滴加方式,探究不同因素对4FF微球机械强度的影响,所得4FF和6FF的最大流速分别达1190cm/h和2228cm/h。此外,本工作对制备的4FF微球进行复原性能测试及形貌表征,借助凝胶色谱法测定不同标准蛋白的保留体积,并计算有效分配系数。最后,以交联琼脂糖微球6FF为基质,制备葡聚糖接枝型金属螯合亲和层析介质,以单克隆抗体IgG为模型蛋白,探究不同条件对介质动态蛋白载量的影响。结果表明,介质的最高动态蛋白载量可达44.8mg/mL gel。本工作为琼脂糖微球的可控制备、改性,以及在生物蛋白分离纯化中的应用提供了新思路,也为后续扩大化生产奠定了基础。

关键词：琼脂糖微球金属螯合层析填料优化蛋白质

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金属螯合亲和层析纯化金属硫蛋白

生物化学与生物物理进展 1994年第5期21卷 447-450页

作者：铁锋茹刚李令媛刘德富茹炳根北京大学生物系北京大学分校生物系

将二价铜离子螯合在ＣｈｅｌａｔｉｎｇＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ凝胶上制成亲和层析柱，锌诱导兔肝和镉诱导小鼠肝经匀浆、乙醇处理后上柱，用ｐＨ４．０的醋酸盐缓冲液平衡，再用ｐＨ５．２不同浓度的醋酸盐缓冲液分别洗脱... 详细信息

将二价铜离子螯合在ＣｈｅｌａｔｉｎｇＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ凝胶上制成亲和层析柱，锌诱导兔肝和镉诱导小鼠肝经匀浆、乙醇处理后上柱，用ｐＨ４．０的醋酸盐缓冲液平衡，再用ｐＨ５．２不同浓度的醋酸盐缓冲液分别洗脱，可得两个金属硫蛋白（ＭＴ）洗脱峰，经确定先后为ＭＴ－２和ＭＴ－１．分离方法比传统的凝胶过滤－离子交换法简单、省时，适于实验室规模分离纯化．

关键词：金属硫蛋白金属螯合分离提纯

金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅲ)混合酶和蛋清(壳)中的溶菌酶提取及纯化新工艺

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膜科学与技术 2001年第4期21卷 5-8页

作者：李静陈欢林柴红浙江大学材料与化工学院杭州310027

采用亚氨二乙酸 (IDA) -Cu2 + 亲和膜分离新工艺 ,分离纯化混合酶和蛋壳中的溶菌酶 ,实验结果表明 ,亲和膜对溶菌酶的选择吸附性能良好 ,对葡萄糖氧化酶基本不吸附 ;用亲和膜直接从蛋清 (壳 )中分离提纯溶菌酶 ,通过正交实验 ,找出了最... 详细信息

采用亚氨二乙酸 (IDA) -Cu2 + 亲和膜分离新工艺 ,分离纯化混合酶和蛋壳中的溶菌酶 ,实验结果表明 ,亲和膜对溶菌酶的选择吸附性能良好 ,对葡萄糖氧化酶基本不吸附 ;用亲和膜直接从蛋清 (壳 )中分离提纯溶菌酶 ,通过正交实验 ,找出了最佳操作条件 ,在此条件下提取的溶菌酶纯度大于 175 0

关键词：鸡蛋清溶菌酶葡萄糖氧化酶亲和膜纯化金属螯合吸附分离

金属螯合亲和色谱介质的合成及其色谱特性研究

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色谱 1998年第4期16卷 297-300页

作者：邸泽梅陈国亮雷建都李蓉李华儒西北大学化工系

详细研究了亚氨基二乙酸（ＩＤＡ）在硅胶基质上键合的适宜条件，利用国产小颗粒大孔径硅胶（７μｍ，３０ｎｍ）制备了固定有Ｃｕ２＋，Ｎｉ２＋，Ｃｏ２＋，Ｚｎ２＋的金属螯合吸附剂，比较了蛋白质在金属螯合柱和裸柱上的保留特性，... 详细信息

详细研究了亚氨基二乙酸（ＩＤＡ）在硅胶基质上键合的适宜条件，利用国产小颗粒大孔径硅胶（７μｍ，３０ｎｍ）制备了固定有Ｃｕ２＋，Ｎｉ２＋，Ｃｏ２＋，Ｚｎ２＋的金属螯合吸附剂，比较了蛋白质在金属螯合柱和裸柱上的保留特性，利用合成的Ｃｕ－ＩＤＡ－硅胶柱分离了来自牛血红细胞的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。

关键词：金属螯合亲和色谱介质合成 SOD 分离 MCAC

IDA型固定化镍离子金属螯合亲和膜色谱对人血清白蛋白的分离纯化

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生物工程学报 2000年第1期16卷 74-77页

作者：杨利贾凌云邹汉法张玉奎中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116011

采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳... 详细信息

采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳纯HSA相当,回收率可达85%以上。纯化蛋白液中的镍离子经过自制的N,N,N′三羧甲基乙二胺(TED)型螯合柱处理后可较好地除去。

关键词：亲和色谱膜人血清白蛋白金属螯合分离纯化

复合纤维素金属螯合膜色谱介质的制备及其分离生物大分子的研究

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中国科学（B辑） 1998年第4期28卷 353-360页

作者：杨利贾凌云邹汉法周冬梅张玉奎中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116012

以棉纤维为基质 ,通过聚合、接枝、开环反应合成了亚氨二乙酸型金属螯合复合膜色谱介质 ,考察了反应温度 ,反应时间对合成介质性能的影响 ,并对复合纤维素膜的表面物理性能及蛋白质的结合性能进行了表征 .实验结果表明 ,膜色谱介质对蛋... 详细信息

以棉纤维为基质 ,通过聚合、接枝、开环反应合成了亚氨二乙酸型金属螯合复合膜色谱介质 ,考察了反应温度 ,反应时间对合成介质性能的影响 ,并对复合纤维素膜的表面物理性能及蛋白质的结合性能进行了表征 .实验结果表明 ,膜色谱介质对蛋白质具有较大的吸附容量 ,分离效果与凝胶介质相当 ,但分离速度快 3～ 5倍 .复合膜色谱介质还具有负压低 ,成本低 ,使用寿命长等特点 ,适于生物大分子的快速大规模分离纯化 ,并用于高效液相色谱对生物大分子的快速定量分析 .

关键词：膜色谱介质金属螯合复合纤维素生物大分子

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金属螯合亲和反胶团的制备与应用初探

金属螯合亲和反胶团的制备与应用初探

作者：邱炜天津大学

学位级别：硕士

反胶团萃取技术在生物活性物质如蛋白质的分离领域被广泛的应用与研究。但传统的离子型反胶团在萃取过程中往往对蛋白质选择性低,并且与蛋白质之间作用力过强而使蛋白质失活。带有色素亲和配基(辛巴蓝,CB)的非离子型反胶团解决了蛋白质... 详细信息

反胶团萃取技术在生物活性物质如蛋白质的分离领域被广泛的应用与研究。但传统的离子型反胶团在萃取过程中往往对蛋白质选择性低,并且与蛋白质之间作用力过强而使蛋白质失活。带有色素亲和配基(辛巴蓝,CB)的非离子型反胶团解决了蛋白质与反胶团作用力过强而变性的问题,但是对离子强度和高浓度的变性剂耐受力差。因此本文研制出新型金属螯合亲和非离子反胶团系统,并对影响此反胶团系统的条件如pH,离子强度等进行了分析研究。最后,利用此反胶团对蛋白质萃取进行了初步的探索。通过双液相合成的方法将非离子型表面活性剂(Span85)分子结合螯合剂TED(三羧甲基乙二胺),通过螯合作用连接金属配基(Cu),并以正己烷为溶剂制备出Span85-TED-Cu金属螯合亲和反胶团。利用水份测定仪和粒径测定仪对亲和反胶团的性质进行了研究。结果表明,随着金属配基Cu的引入,Span85-TED-Cu反胶团的含水率(W),反胶团粒径(Z-average size)均比Span85反胶团有显著的提高。Span85-TED-Cu反胶团能够在较宽的pH范围(5～9),较大的离子强度(0.5mol/L)以及高浓度的变性剂(8mol/L Urea)条件下保持含水率不变。对Span85-TED-Cu反胶团萃取蛋白质进行初探。研究表明,反胶团萃取蛋白质受到表面活性剂浓度、金属配基浓度以及助剂(醇)的影响,但可耐受宽pH范围、较高离子强度以及高浓度的变性剂。萃取牛血红蛋白(BH)时,萃取率E达到70%。助剂的加入可以增加反胶团对蛋白质的萃取率,但会影响蛋白质在反胶团相的稳定存在,使蛋白质沉积于相界面,不利于蛋白质的复性。

关键词：金属螯合反胶团蛋白质萃取非离子表面活性剂