检索结果-南通市图书馆

利用MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素水解和酶切过程

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分析仪器 2003年第4期 15-20页

作者：方雪萍黄河清厦门大学生命科学学院分析测试中心厦门361005

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系 ,用基质辅助激光解吸电离 -飞行时间 (MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸... 详细信息

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系 ,用基质辅助激光解吸电离 -飞行时间 (MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸碱及还原特性的包装材料提供了科学依据。

关键词：基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法胰岛素水解酶切纳米粒 MALDI-TOF

PCR结合单酶切对戊型肝炎病毒进行基因分型的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第2期19卷 179-181页

作者：潘宁戴星孟继鸿刘社兰东南大学医学院病原生物学与免疫学系南京210009 东南大学医学院附属中大医院皮肤科江苏省疾病预防控制中心急性传染病科

目的　建立PCR结合单酶切对戊型肝炎病毒(HEV)进行基因分型的方法,并将其应用于HEV基因型分布的研究。方法　采用简并引物扩增1～4型HEVORF1片段,1、2型HEVPCR产物为2 75、2 6 9bp ,3、4型PCR产物为317、314bp ,分别应用NaeⅠ、NotⅠ消... 详细信息

目的　建立PCR结合单酶切对戊型肝炎病毒(HEV)进行基因分型的方法,并将其应用于HEV基因型分布的研究。方法　采用简并引物扩增1～4型HEVORF1片段,1、2型HEVPCR产物为2 75、2 6 9bp ,3、4型PCR产物为317、314bp ,分别应用NaeⅠ、NotⅠ消化两种长度的PCR产物,根据酶切结果区分4种基因型。结果　采用此方法对4种基因型的HEV标准株分型,结果与预期一致;4 3份HEVIgM阳性的临床标本中,19份PCR阳性,分型结果均为4型HEV。结论　此方法可以快速简便地区分HEV 4种基因型。南京地区散发戊型肝炎大多由4型HEV所致。

关键词：戊型肝炎病毒基因分型酶切 PCR产物散发戊型肝炎 HEV 基因型分布 IgM阳性引物扩增临床标本分型结果南京地区 4型 Nae Not 标准株区分

多枝赖草基因组Mb级DNA制备和酶切方法的优化

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华北农学报 2007年第6期22卷 24-29页

作者：徐粤宇周玉雷赵茂林王志平王克武张艳首都师范大学北京100037 甘肃农业大学甘肃兰州730070 北京市农林科学院北京100097 北京市土肥工作站北京100029

Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础。以浓度0.4%(m/m)NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核,经钢丝细胞筛过滤,多次回收滤渣和离心上清中的细胞核,相差显微镜调浓度达108... 详细信息

Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础。以浓度0.4%(m/m)NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核,经钢丝细胞筛过滤,多次回收滤渣和离心上清中的细胞核,相差显微镜调浓度达108个/mL后,经LMP包埋,蛋白酶K降解核蛋白,脉冲电泳纯化回收后,在LMP胶块中2 Mb以上DNA的浓度约为250 ng/μL。在胶中经Hind III部分酶切再用脉冲电泳回收不同大小范围的DNA,电洗脱浓缩除盐后浓度约为25 ng/μL。用此方法得到的核DNA不但无细胞器DNA等的污染,而且浓度高,可直接用于各种人工染色体文库的构建。

关键词：多枝赖草 Mb级DNA 基因组文库脉冲交变电场电泳酶切

RT-PCR和酶切方法区分猪瘟疫苗毒与野毒的研究

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微生物学通报 2006年第3期33卷 82-87页

作者：赵耘秦玉明张广川赵启祖宁宜宝中国兽医药品监察所北京100081

建立了套式RT-PCR与限制性内切酶酶切相结合的区别猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟病毒田间分离株的诊断方法。通过对猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门株E2基因主要抗原编码区序列进行限制性内切酶酶切位点分析,分别找出猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪... 详细信息

建立了套式RT-PCR与限制性内切酶酶切相结合的区别猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟病毒田间分离株的诊断方法。通过对猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门株E2基因主要抗原编码区序列进行限制性内切酶酶切位点分析,分别找出猪瘟兔化弱毒疫苗株与猪瘟石门株各自独有的限制性内切酶酶切位点,结果二者分别有10和16个独有的限制性内切酶的酶切位点;分别对17株猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区序列进行这26个限制性内切酶酶切位点分析,结果表明有3个限制性内切酶(HgaI、Hin8I及Hsp92I)的酶切位点在HCLV株序列是独有的;利用HgaI限制性内切酶分别对HCLV、HCVSM及5株不同基因群的猪瘟病毒田间分离株进行酶切鉴定,结果只有HCLV株能够被HgaI酶切成2个片段,而其它的毒株则不能被切开。同时测定了套式RT—PCR方法的敏感性及特异性,结果其敏感性可达到0．2MLD,而对BDV以及BVDV均不能特异扩增。本方法的建立无疑对猪瘟在我国的控制和消灭具有重要的意义。

关键词：猪瘟兔化弱毒猪瘟田间分离毒 RT-PCR 酶切

肝豆状核变性8号外显子778密码子基因突变的酶切检测

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中国神经精神疾病杂志 1998年第6期24卷 333-335页

作者：马少春徐评议梁秀龄张成王丽娟中山医科大学附属第一医院神经内科广东省人民医院神经内科

目的应用酶切方法对中国人肝豆状核变性患者ＡＴＰ７Ｂ基因中的高频突变点进行检测，并对家系进行基因诊断分析。方法根据高频突变点所处序列设计合适的内切酶ＭｓｐⅠ，对中国人肝豆状核变性３９个家系４５个患者以及６０例正常人的Ａ... 详细信息

目的应用酶切方法对中国人肝豆状核变性患者ＡＴＰ７Ｂ基因中的高频突变点进行检测，并对家系进行基因诊断分析。方法根据高频突变点所处序列设计合适的内切酶ＭｓｐⅠ，对中国人肝豆状核变性３９个家系４５个患者以及６０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因８号外显子ＰＣＲ扩增后进行酶切分析。对有异常者进行序列分析（自动测序）。结果正常人组未见异常，患者组有２例突变纯合子，占患者总数４４％，１１例杂合子，占患者总数２４４％。酶切的异常率为２８８％。序列分析证实所有异常表现者均为Ｇ２２７３Ｔ置换，即Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变。并检测和分析了３个高频突变家系。结论ＡＴＰ７Ｂ基因的８号外显子７７８密码子为中国人肝豆状核变性患者的高频突变点。

关键词：肝豆状核变性基因突变酶切

野油菜黄单胞菌基因组DNA快速提取方法和酶切

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食品科学 2004年第11期25卷 237-240页

作者：刘以祥李柏林欧杰徐明全上海水产大学食品学院上海200090 深圳市农业科学研究中心基因工程实验室广东深圳518040

本文建立了一种野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)基因组DNA的简便快速提取方法。用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构,使胞内核酸释放,用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质,经异丙醇沉淀DNA,TE溶解DNA。采用此SDS和CTAB结合的方法提取的DNA... 详细信息

本文建立了一种野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)基因组DNA的简便快速提取方法。用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构,使胞内核酸释放,用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质,经异丙醇沉淀DNA,TE溶解DNA。采用此SDS和CTAB结合的方法提取的DNA琼脂糖电泳图谱与试剂盒UNIQ-10提取的基因组DNA及D-5010A试剂盒法提取的基因组DNA图谱相同,DNA经紫外分光光度计检测OD260/OD280在1.80～1.90之间。DNA能被EcoRI、XbalI酶切消化。本方法能快速简便地提取野油菜黄单胞菌DNA,提取的DNA含量较高、纯度较好,比试剂盒更经济,也可用于酶切分析、构建文库和PCR扩增。

关键词：基因组DNA SDS 琼脂糖电泳法能试剂盒法醇沉 DNA含量油菜黄单胞菌酶切

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钙调素-人胰岛素原融合体的酶切加工

北京师范大学学报（自然科学版） 2011年第3期47卷 285-288页

作者：王学祥井健北京师范大学生命科学学院北京100875

通过基因工程方法将人胰岛素原突变体偶联钙调素形成融合态重组蛋白质,在该重组蛋白质中设计具有PRESCI蛋白酶酶切位点.制备PRESCI蛋白酶并对钙调素-人胰岛素原突变体重组蛋白质进行酶切加工.研究表明,该重组融合蛋白质可被有效切割,通... 详细信息

通过基因工程方法将人胰岛素原突变体偶联钙调素形成融合态重组蛋白质,在该重组蛋白质中设计具有PRESCI蛋白酶酶切位点.制备PRESCI蛋白酶并对钙调素-人胰岛素原突变体重组蛋白质进行酶切加工.研究表明,该重组融合蛋白质可被有效切割,通过蛋白质纯化手段能够有效地将切割后的钙调素与人胰岛素原突变体进行纯化.

关键词：人胰岛素原突变体 PRESCI蛋白酶酶切纯化

猪POU1F1基因第3内含子MspⅠ酶切片段多态特征及其与生长性能相关性的研究

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畜牧兽医学报 2005年第2期36卷 205-208页

作者：滕勇宋成义经荣斌扬州大学江苏省动物遗传育种重点实验室扬州225009

A 2 100 bp segment of the third intron of the porcine POU1F1 gene was amplified by PCR approach. Two polymorphic fragments of 1 680 bp(C allele) and 850/830 bp(D allele) were observed. In this paper, we discussed the MspⅠ polymorphic restriction sites in F2 stirp-Changdufengjiang pigs[Landrace×(Duroc×Fengjiang)], and studied the effect on growth performance of allele gene at MspⅠ restriction site. The result showed that three genotypes at MspⅠ polymorphic restriction sites had significant characteristics of distribution in the herds of Changdufengjiang pigs and the growth performance was *** weights between DD genotype and other genotypes in different stages of days(expect birth weight) differed significantly(0.01

关键词：基因转录因子相关性 PRL 促甲状腺素催乳素垂体生长性能酶切肥育

肠黏蛋白Muc3羧基末端翻译后蛋白酶切过程的鉴定

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中华消化杂志 2006年第8期26卷 549-550页

作者：汪荣泉房殿春第三军医大学西南医院全军消化疾病专科中心重庆430080

像人类的Muc3一样，啮齿类动物黏蛋白Muc3是一种细胞膜相关性黏蛋白，它与Muc4（即它的啮齿类动物rMuc4）、Muc12、Muc13和Muc17细胞膜上的黏蛋白相似，有某些共同结构特点。膜性黏蛋白称渭也许用词不当，阂为已发现Muc1、Muc4、Muc3可... 详细信息

像人类的Muc3一样，啮齿类动物黏蛋白Muc3是一种细胞膜相关性黏蛋白，它与Muc4（即它的啮齿类动物rMuc4）、Muc12、Muc13和Muc17细胞膜上的黏蛋白相似，有某些共同结构特点。膜性黏蛋白称渭也许用词不当，阂为已发现Muc1、Muc4、Muc3可溶性分子存在，这种可溶性分子被认为是来自其羧基末端内mRNA的不同剪接体及（或）蛋白酶切。在人类，Muc1发生羧基末端的蛋白酶切，允许一种可溶形式的黏蛋白从细胞膜上释放。这样看来，黏蛋白可溶分子的产生机制既包括mRNA不同剪接机制，也包括蛋白质翻译后的酶切。从人Muc3的3’区组成和RT-PCR试验来看，Muc3经历一个mRNA的不同剪接过程，这些蛋白可以是细胞膜相关的，也可以是（潜在）分泌的。目前鲜见天于啮齿类Muc3 mRNA的不同剪接或蛋白酶切过程的报道。

关键词：肠黏蛋白 Muc3 蛋白质翻译羧基末端酶切啮齿类动物可溶性分子 mRNA