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在肿瘤研究中转基因小鼠模型的研究进展

中国药理学通报 2007年第1期23卷 4-8页

作者：林红英殷润婷奚涛徐寒梅中国药科大学生物技术中心

随着基因工程技术的飞速发展,转基因小鼠模型对研究肿瘤基因特征、肿瘤抑制基因的表达和功能有着重要的作用。近年来,肿瘤血管生成理论成为肿瘤研究的新热点。与肿瘤血管生成相关的调控基因的研究也越来越受到重视。该文对转基因小鼠模... 详细信息

随着基因工程技术的飞速发展,转基因小鼠模型对研究肿瘤基因特征、肿瘤抑制基因的表达和功能有着重要的作用。近年来,肿瘤血管生成理论成为肿瘤研究的新热点。与肿瘤血管生成相关的调控基因的研究也越来越受到重视。该文对转基因小鼠模型在肿瘤研究中的进展作了综述,并着重介绍了关于肿瘤血管生成调控基因转基因小鼠模型的研究情况。

关键词：转基因小鼠模型肿瘤血管生成

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组织特异RNAi转基因小鼠模型的构建

中国科学：生命科学 2011年第4期41卷 289-295页

作者：代蓉沈思军甘尚权毛青青万鹏程郭洪孟庆勇刘守仁石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000 南京农业大学动物科技学院南京210095 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表... 详细信息

RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表达载体启动子,成功地驱动融合表达载体EGFP-shRNA进行干扰片段前体的转录,进而生成成熟的干扰片段,靶向小鼠BMP4基因使其发生沉默.所得到的转基因小鼠及其杂交后代经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明外源基因准确无误地整合到小鼠基因组.Northern杂交结果证明,小干扰RNA在皮肤组织中有较高水平的表达,在肺和肠组织中有较低水平的表达.研究结果表明,利用PolⅡ型(K14)启动子驱动shRNA融合转录本的表达,在特定组织高表达siRNA,从而达到抑制特定组织目的基因表达的技术路线是可行的.同时为利用K14启动子进行毛囊相关基因干扰研究积累了基础数据,为制备组织特异抑制基因表达的转基因大家畜提供了一个参考方法.

关键词：组织特异 RNAi 转基因小鼠模型

Tet system的调控原理及其在转基因小鼠模型上的应用

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中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 90-94页

作者：张景锋郭欣政卫恒习李莉张守全华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642

基因表达的调控是分子生物学研究的一个重要问题,也是基因治疗和基因功能研究的重要手段。诱导性基因表达系统可以从时间上调控基因的表达,是基因治疗和基因功能研究的重要工具之一。其中,四环素诱导基因表达系统(tetracycline inducibl... 详细信息

基因表达的调控是分子生物学研究的一个重要问题,也是基因治疗和基因功能研究的重要手段。诱导性基因表达系统可以从时间上调控基因的表达,是基因治疗和基因功能研究的重要工具之一。其中,四环素诱导基因表达系统(tetracycline inducible expression system,Tet system)是应用最广泛的一种,它可以在时间和空间上对基因进行严谨和高效地诱导表达。基于该系统获得了不同用途的转基因动物,这些模型动物的建立为研究特定基因的功能及其在疾病发生中的作用打下了实验基础。现就四环素诱导表达系统的原理和在小鼠模型上的研究应用做一综述。

关键词： Tet system Tet-off系统 Tet-on系统转基因小鼠模型

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听神经病谱系障碍转基因小鼠模型的研究进展

中华耳科学杂志 2015年第2期13卷 258-261页

作者：王莉王秋菊解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所北京100853 南开大学医学院天津300071

听神经病谱系障碍（auditory neuropathy spectrumdisorder，ANSD堤一种具有特殊临床表现的听功能障碍疾病，其主要表现为时域听觉处理能力的下降，外毛细胞功能不受影响。听力学表现包括：反映内毛细胞及听觉传导通路功能的听性脑干反... 详细信息

听神经病谱系障碍（auditory neuropathy spectrumdisorder，ANSD堤一种具有特殊临床表现的听功能障碍疾病，其主要表现为时域听觉处理能力的下降，外毛细胞功能不受影响。听力学表现包括：反映内毛细胞及听觉传导通路功能的听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR）严重异常甚至缺失，主要反映外毛细胞功能的诱发性耳声发射（evoked otoacoustic emission，EOAE）正常或基本正常，言语识别率相对于纯音听阈不成比例地下降等。

关键词：谱系障碍听神经病转基因小鼠模型诱发性耳声发射特殊临床表现听性脑干反应细胞功能听功能障碍

乙型肝炎病毒基因组转基因小鼠模型的制备与鉴定

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中华肝脏病杂志 2003年第6期11卷 338-340页

作者：吴金明林菊生陈碧涛郑新民赵浩斌梁扩寰华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所武汉430030 湖北省农业科学研究所畜牧所

目的建立一种新的乙型肝炎病毒(HBV)基因组高效复制与表达转基因小鼠模型,以用于抗HBV药物筛选和乙型肝炎发病机制的研究。方法以加长的ayw亚型HBV全基因组作为目的基因,采用显微注射技术,转导于小鼠受精卵细胞雄原核,然后将受精卵细... 详细信息

目的建立一种新的乙型肝炎病毒(HBV)基因组高效复制与表达转基因小鼠模型,以用于抗HBV药物筛选和乙型肝炎发病机制的研究。方法以加长的ayw亚型HBV全基因组作为目的基因,采用显微注射技术,转导于小鼠受精卵细胞雄原核,然后将受精卵细胞移植于受体假孕母鼠输卵管内,发育产生子代小鼠。鼠尾组织聚合酶链反应(PCR)筛选、Southern印迹鉴定后,再用酶链免疫吸附法(ELISA)检测血清乙型肝炎表面抗原及e抗原,Southern印迹检测血清HBV DNA。结果实验获子代小鼠61只,鼠尾组织经PCR筛选、Southern印迹鉴定18只阳性,血清乙型肝炎表面抗原及e抗原、HBV DNA呈阳性反应7只。结论 1.3倍加长的HBV全基因组转基因小鼠具有较高的复制、表达效率。

关键词：乙型肝炎病毒基因组转基因小鼠模型制备鉴定

Alzheimer病多重转基因小鼠模型研究进展

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中华老年医学杂志 2004年第12期23卷 896-898页

作者：袁慧张苏明华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科

Alzheimer病(AD)是常见的老年人慢性退行性神经疾病之一,迄今为止,其病因、发病机制并未明确;AD的主要病理学标志包括老年斑和神经原纤维缠结(NFTs).目前AD可分为家族性AD和散发型AD;虽然家族性AD所占的比例极少,但随着分子遗传学研究... 详细信息

Alzheimer病(AD)是常见的老年人慢性退行性神经疾病之一,迄今为止,其病因、发病机制并未明确;AD的主要病理学标志包括老年斑和神经原纤维缠结(NFTs).目前AD可分为家族性AD和散发型AD;虽然家族性AD所占的比例极少,但随着分子遗传学研究的深入,已发现诸多AD相关基因,包括淀粉样前体蛋白(APP)、早老蛋白1(PS1)及早老蛋白2(PS2)基因、载脂蛋白(apo)E4等位基因等.最近,国外学者又报道了α1抗糜蛋白酶(ACT)基因、内质网相关的结合蛋白质(ERAB)基因可能与AD相关.这些基因对了解散发性、非典型性AD的病因也将起到重要作用.因此,建立AD多重转基因小鼠模型,欲求更准确、完整的再现AD的病理特征,可为人们认识AD的发病机制提供有效的佐证。

关键词：家族性老年人转基因小鼠模型常见神经原纤维缠结退行性神经疾病研究进展发现淀粉样前体蛋白 APP

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第4期28卷 373-377页

作者：杨国柱傅思莹黄冰单于肖东马芸邓新燕陈系古中山大学药学院实验动物中心广州中医药大学第一临床医学院中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广东广州510080

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究... 详细信息

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。

关键词： HCV-C 丙型肝炎病毒核心蛋白转基因小鼠模型四环素调控系统组织特异性表达

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猪SSTR2干扰质粒转基因小鼠模型的建立

畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 331-332页

作者：王京兰习欠云杨林高萍朱晓彤束刚王丽娜王松波江青艳张永亮华南农业大学动物科学学院生理生化实验室广东广州510642

SSTR2是介导SS抑制GHRH刺激GH的分泌的主要受体,降低SSTR2的表达量这种抑制作用可能减弱或消除。本研究在前期基础上,通过显微注射法,将干扰效率最优的猪SSTR2 RNA干扰质粒lv-shRNA-SSTR2注射到小鼠胚胎原核中,胚胎移植后产下个体,经PCR... 详细信息

SSTR2是介导SS抑制GHRH刺激GH的分泌的主要受体,降低SSTR2的表达量这种抑制作用可能减弱或消除。本研究在前期基础上,通过显微注射法,将干扰效率最优的猪SSTR2 RNA干扰质粒lv-shRNA-SSTR2注射到小鼠胚胎原核中,胚胎移植后产下个体,经PCR及Southern Blot检测为阳性,成功制备了转基因小鼠模型。以转基因小鼠为研究对象,拟通过扩群繁殖。

关键词：转基因小鼠模型 SSTR2 显微注射法扩群 GHRH 小鼠胚胎转基因猪胚胎移植 RNA 抑制作用

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表达Mx蛋白的转基因小鼠模型研究

表达Mx蛋白的转基因小鼠模型研究

作者：谭复善中国农业科学院

学位级别：硕士

动物转基因研究是目前生物工程研究的热点内容之一,其特点是将外源基因导入动物或改变动物的遗传组成,并能稳定传代。转基因动物模型作为动物整体的研究体系,是基因功能研究、人类疾病发病机理、药物筛选和临床医学研究的理想工具。 Mx(... 详细信息

动物转基因研究是目前生物工程研究的热点内容之一,其特点是将外源基因导入动物或改变动物的遗传组成,并能稳定传代。转基因动物模型作为动物整体的研究体系,是基因功能研究、人类疾病发病机理、药物筛选和临床医学研究的理想工具。 Mx(Myxovirus resistance)蛋白是由Ⅰ型(α/β)干扰素(IFN)诱导产生的具有GTP酶活性的发动蛋白超家族成员之一,通过对多种动物的Mx蛋白抗病毒研究发现,Mx蛋白具有广谱的抗病毒功能,已证明其具有抑制A型流感病毒、Thogoto病毒、水泡性口膜炎病毒等复制的作用。在本研究中,我们将在分子特征和细胞水平证明具有抗流感病毒活性的Mx基因导入小鼠,期望获得能持续稳定表达Mx蛋白且具有抗流感病毒作用的转基因小鼠模型,为基因功能研究提供条件。本研究首先构建了鸡Mx基因的重组质粒pProExHTa-Mx,转化大肠杆菌BL21,诱导表达,以切胶纯化方式回收Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清,SDS-PAGE和Western blot结果表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 kDa,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应。用真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性。在本研究组已获得F1代Mx转基因小鼠的基础上,将转基因小鼠与野生型小鼠交配繁育,出生的小鼠通过PCR和Southern blot检测获得29只F2代Mx转基因阳性小鼠,经表达谱分析,转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和肌肉中均有Mx mRNA表达,间接免疫荧光试验表明:转基因小鼠的肺和肝脏中有Mx蛋白表达。同样方法,我们分别获得了44只F3代和19只F4代Mx转基因小鼠。这些结果表明:成功建立了Mx转基因小鼠模型,目的基因能够在小鼠稳定遗传和表达。为了在转基因小鼠模型的动物整体水平评价Mx蛋白抗禽流感病毒的作用,本研究设立F3代Mx转基因小鼠和野生型ICR小鼠两个试验组。用200LD50剂量的H5N1禽流感病毒经鼻腔感染,以小鼠临床症状、肺组织中禽流感病毒含量、体重变化、病理变化以及小鼠存活率来评价。结果表明,攻毒后Mx转基因鼠表现症状轻,肺组织病毒比对照组低2.5倍,体重损失少,病理变化比正常野生型小鼠轻,存活率为30%,而对照组小鼠全部死亡。表明:转基因小鼠具有显著的抗禽流感病毒作用。通过该研究,我们获得了能持续稳定表达Mx蛋白的转基因小鼠模型,为Mx蛋白的抗病毒功能验证提供条件;同时通过转基因小鼠模型在动物整体水平上验证了Mx蛋白具有抗禽流感病毒的作用,为制备具有广谱抗病毒作用的Mx转基因动物奠定基础。

关键词： Mx基因转基因小鼠模型禽流感抗血清