组织特异RNAi转基因小鼠模型的构建

作     者：代蓉 沈思军 甘尚权 毛青青 万鹏程 郭洪 孟庆勇 刘守仁 

作者机构：石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000 南京农业大学动物科技学院南京210095 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193 

出 版 物：《中国科学：生命科学》 (Scientia Sinica(Vitae))

年 卷 期：2011年第41卷第4期

页      面：289-295页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:31001002) 国家转基因生物新品种培育科技重大专项(批准号:2008ZX08008-001,2009ZX08008-001B)资助项目 

主　　题：组织特异 RNAi 转基因小鼠模型 

摘      要：RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表达载体启动子,成功地驱动融合表达载体EGFP-shRNA进行干扰片段前体的转录,进而生成成熟的干扰片段,靶向小鼠BMP4基因使其发生沉默.所得到的转基因小鼠及其杂交后代经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明外源基因准确无误地整合到小鼠基因组.Northern杂交结果证明,小干扰RNA在皮肤组织中有较高水平的表达,在肺和肠组织中有较低水平的表达.研究结果表明,利用PolⅡ型(K14)启动子驱动shRNA融合转录本的表达,在特定组织高表达siRNA,从而达到抑制特定组织目的基因表达的技术路线是可行的.同时为利用K14启动子进行毛囊相关基因干扰研究积累了基础数据,为制备组织特异抑制基因表达的转基因大家畜提供了一个参考方法.