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豆豉纤溶酶载纳米脂质体的制备与表征

中国食品学报 2014年第7期14卷 32-38页

作者：张婵李小东王成涛北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心食品质量安全北京实验室北京100048

为提高豆豉纤溶酶口服生物利用度,建立了豆豉纤溶酶载纳米脂质体系统,并对其表征进行评价。采用硫酸铵梯度法制备的豆豉纤溶酶纳米脂质体的包封率为(52.74±4.24)%,粒径(72.04±31.2)nm,平均Zeta电位-44.2 mV,PdI 0.237。试验结果表明:... 详细信息

为提高豆豉纤溶酶口服生物利用度,建立了豆豉纤溶酶载纳米脂质体系统,并对其表征进行评价。采用硫酸铵梯度法制备的豆豉纤溶酶纳米脂质体的包封率为(52.74±4.24)%,粒径(72.04±31.2)nm,平均Zeta电位-44.2 mV,PdI 0.237。试验结果表明:豆豉纤溶酶纳米脂质体在体外稳定性好,在人工肠液中的释放符合一级动力学释放规律,豆豉纤溶酶在12 h后释放接近完全,无突释现象。豆豉纤溶酶及载酶纳米脂质体肠吸收液酶活性测定结果表明:豆豉纤溶酶及其载酶纳米脂质体在小肠均有吸收,吸收后仍具有纤溶活性。纳米脂质体可有效促进豆豉纤溶酶的吸收。

关键词：豆豉纤溶酶纳米脂质体包封率粒径大小

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豆豉纤溶酶的定向进化

华南理工大学学报（自然科学版） 2010年第9期38卷 138-141,146页

作者：张少平崔堂兵陈亮郭勇华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序... 详细信息

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.

关键词：枯草芽孢杆菌豆豉纤溶酶易错PCR 定向进化筛选

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豆豉纤溶酶纳米脂质体的肠吸收效率研究

中国食品学报 2014年第6期14卷 28-35页

作者：张婵李小东王成涛北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心食品质量安全北京实验室北京100048

采用外翻肠囊法和大鼠在体单向灌注法,以肠吸收速率(Ka)和表观渗透系数(Papp)为指标,考察豆豉纤溶酶纳米脂质体的小肠吸收部位及效率。结果显示,由外翻肠囊法测得豆豉纤溶酶纳米脂质体的回肠段Ka和Papp分别为3.25×10-2μg/s和2.355×10... 详细信息

采用外翻肠囊法和大鼠在体单向灌注法,以肠吸收速率(Ka)和表观渗透系数(Papp)为指标,考察豆豉纤溶酶纳米脂质体的小肠吸收部位及效率。结果显示,由外翻肠囊法测得豆豉纤溶酶纳米脂质体的回肠段Ka和Papp分别为3.25×10-2μg/s和2.355×10-6cm/s,且吸收速率随着浓度的升高而降低,最终出现饱饮现象。由大鼠在体单向灌注法测得的Ka和Papp分别为(1.49±0.22×10-3)μg/s和(7.90±1.46)×10-5cm/s。上述两种方法均表现出豆豉纤溶酶纳米脂质体在回肠的吸收效率为最高,这可能与回肠中大量存在Peyer’s淋巴结有关,而Peyer’s淋巴结中存在的M细胞可能导致饱饮现象。

关键词：豆豉纤溶酶纳米脂质体外翻肠囊法在体单向灌流法肠吸收

豆豉纤溶酶RGDS-载酶脂质体的体内溶栓效果和靶向性评价

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生物医学工程学杂志 2010年第2期27卷 332-336,378页

作者：王成涛籍保平曹雁平孙宝国刘旭东北京工商大学化学与环境工程学院北京100048 中国农业大学食品与营养工程学院北京100083 莱州出入境检验检疫局莱州261400

研究评价了豆豉纤溶酶(Subtilisin FS33)RGDS-载酶脂质纳米粒的溶栓效果和靶向性,探讨RGDS-脂质体作为载体导向于血栓灶的可能性。不同剂量荧光标记RGDS-载酶脂质体给予血栓模型动物,考察其对机体抗凝血和纤溶功能的影响,以及组织器官... 详细信息

研究评价了豆豉纤溶酶(Subtilisin FS33)RGDS-载酶脂质纳米粒的溶栓效果和靶向性,探讨RGDS-脂质体作为载体导向于血栓灶的可能性。不同剂量荧光标记RGDS-载酶脂质体给予血栓模型动物,考察其对机体抗凝血和纤溶功能的影响,以及组织器官的荧光素分布,结果发现,Subtilisin FS33高剂量组注射15 min～2 h,机体的APTT、PT和TT都明显延长(P纤溶酶活力明显增高(P酶脂质体组的大鼠组织切片中脑静脉和肾小球毛细血管中无明显血栓,只有少量红细胞聚积,并且在脑、心脏和肝组织中荧光物的含量显著高于无RGDS-载血清白蛋白脂质体组(空白对照组)。试验表明静注RGDS-载酶脂质体可明显增强机体的抗凝和纤溶能力,RGDS-载酶脂质体具有一定的血栓靶向性。

关键词：豆豉纤溶酶血栓模型 RGDS-载酶脂质体纳米粒溶栓靶向性

豆豉纤溶酶在枯草杆菌WB800中的高水平表达(英文)

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应用与环境生物学报 2007年第4期13卷 565-569页

作者：罗文华郭勇韩双艳华南理工大学生物科学与工程学院广州510640

一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3... 详细信息

一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3中,构建了pBEP43载体.将豆豉纤溶酶基因插入到载体pBEP43后转化枯草杆菌WB800.结果表明,在P43启动子驱动下,豆豉纤溶酶基因在重组菌中的对数生长期和平衡期均获得了表达且分泌到培养基中.重组菌经培养后上清液中的纤溶酶活性最高达1270U/mL,是豆豉纤溶酶基因在自身启动子驱动下表达量的1.87倍和野生菌株枯草杆菌DC12表达量的4.1倍.

关键词：豆豉纤溶酶枯草杆菌启动子P43 重叠PCR 基因表达

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豆豉纤溶酶产生菌分离和鉴定

微生物学通报 2010年第12期37卷 1779-1785页

作者：朱春节汤祝华谢秀祯海南师范大学生命科学学院海南海口571158

从全国各地收集豆豉样品,采用不同的培养基进行富集培养,并利用纤维蛋白平板法高效获得了13株形态差异较大的产纤溶酶菌株。通过传统方法、化学方法以及16S rRNA序列分析对这13株菌进行分类鉴定,它们分属于芽孢杆菌属、链霉菌属、假单... 详细信息

从全国各地收集豆豉样品,采用不同的培养基进行富集培养,并利用纤维蛋白平板法高效获得了13株形态差异较大的产纤溶酶菌株。通过传统方法、化学方法以及16S rRNA序列分析对这13株菌进行分类鉴定,它们分属于芽孢杆菌属、链霉菌属、假单胞菌属以及节杆菌属,包括9种细菌,丰富了豆豉纤溶酶产生菌菌种资源。

关键词：豆豉豆豉纤溶酶分离鉴定

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豆豉纤溶酶分离及其特性的研究

食品工业科技 2007年第7期28卷 90-93页

作者：牟光庆贾楠霍贵成东北农业大学乳品科学教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150030 大连轻工业学院生物与食品工程学院辽宁大连116034

采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研... 详细信息

采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研究表明:在pH7.0左右,温度40℃时,酶活力最高;该纤溶酶不耐热,其纤溶活性可被Mn2+、Mg2+以及Na2SO3激活,Ca2+以及乙醇、明胶对酶活力具有较强的抑制作用;NaCl浓度低于10%,酶活力能够基本保持稳定。

关键词：豆豉纤溶酶分离稳定特性

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达

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大豆科学 2012年第1期31卷 159-161页

作者：齐海萍冮洁胡文忠姜爱丽田密霞大连民族学院生命科学学院生物技术与资源利用国家民委一教育部重点实验室辽宁大连116600

以实验室筛选的UD8豆豉芽孢杆菌的总DNA为模板,应用PCR技术根据豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2)设计并合成1对引物,扩增出了豆豉纤溶酶基因,将该基因克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒EC-BS8上,构建成表达质粒EC-BS8,再... 详细信息

以实验室筛选的UD8豆豉芽孢杆菌的总DNA为模板,应用PCR技术根据豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2)设计并合成1对引物,扩增出了豆豉纤溶酶基因,将该基因克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒EC-BS8上,构建成表达质粒EC-BS8,再将其转化到枯草芽孢杆菌Bs6中。筛选表达菌株,实现了豆豉纤溶酶基因在枯草杆菌中高效表达。获得重组菌纤溶酶活力高达9 830 ***-1,是出发菌株活力的2.9倍。经纯化SDS-PAGE鉴定重组豆豉纤溶酶相对分子质量为31.0 kDa。

关键词：豆豉纤溶酶基因克隆高效表达枯草芽孢杆菌

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豆豉纤溶酶载酶纳米脂质系统的构建与评价

食品科学 2008年第9期29卷 158-161页

作者：王成涛籍保平曹雁平孙宝国胡亮北京工商大学化学与环境工程学院北京100037 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

为提高生物活性酶的生物利用度,以Subtilisin FS33为模式物,研究了硫酸铵梯度法制备载酶脂质体影响其活性和包封的关键因素,探讨了载酶脂质纳米粒的构建及其条件。通过单因素和正交设计试验,确定脂质体制备最佳工艺条件为:胆脂比1:2、... 详细信息

为提高生物活性酶的生物利用度,以Subtilisin FS33为模式物,研究了硫酸铵梯度法制备载酶脂质体影响其活性和包封的关键因素,探讨了载酶脂质纳米粒的构建及其条件。通过单因素和正交设计试验,确定脂质体制备最佳工艺条件为:胆脂比1:2、硫酸铵浓度为0.15mol/L、孵化温度为45℃、酶脂比1:1。按此条件制备载酶脂质体,其酶活保持率和活性包封率分别为86.6%和30.3%,粒径在50～150nm,属于纳米级单室脂质体。在模拟人工肠液中,载酶脂质体的活力保持较未包被酶有明显提高(p<0.01)。

关键词：豆豉纤溶酶硫酸铵梯度法纳米脂质体制备活性包封率