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毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum诱抗蛋白对烟草抗病性的诱导

植物保护学报 2017年第1期44卷 67-74页

作者：田华朱艳梅董瑜刘伟孔凡玉王静中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所烟草行业病虫害监测与综合治理重点实验室山东青岛266101 云南省昆明市烟草公司石林分公司石林652200 云南省曲靖市烟草公司会泽分公司会泽654200

为明确毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum诱抗蛋白诱导烟草的抗病性及其作用,采用喷雾、摩擦接种方法及RT-PCR技术研究了诱抗蛋白的预防保护作用,以及烟草悬浮细胞经诱导后过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)... 详细信息

为明确毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum诱抗蛋白诱导烟草的抗病性及其作用,采用喷雾、摩擦接种方法及RT-PCR技术研究了诱抗蛋白的预防保护作用,以及烟草悬浮细胞经诱导后过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性及脯氨酸(Pro)含量和病程相关基因表达的变化。结果表明,接种3、5和7 d后,该诱抗蛋白对烟草炭疽病的诱抗效果分别为58.00%、48.99%和49.65%,对烟草白粉病的诱抗效果分别为83.26%、80.76%和78.60%,并可以抑制烟草普通花叶病毒的复制及在寄主体内的扩增;经诱抗蛋白处理后,烟草悬浮细胞POD、PPO、PAL活性及Pro含量明显提高;诱抗蛋白能够诱导烟草病程相关蛋白基因PR-1a、PR-1b以及抗病信号传导途径关键基因NPR1的表达。表明毁灭炭疽菌诱抗蛋白可诱导烟草产生抗病性,可能与烟草悬浮细胞中POD、PAL、PPO的活性及Pro的含量提高以及相关病程基因表达有关。

关键词：毁灭炭疽菌诱抗蛋白诱导抗病性防御酶抗性相关基因

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毁灭炭疽菌诱抗蛋白的分离纯化及对烟草抗病促生作用

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中国烟草科学 2016年第4期37卷 68-73页

作者：田华陈光勇董瑜王静王贻鸿孔凡玉中国农业科学院烟草研究所青岛266101 中国农业科学院研究生院北京100081 云南省曲靖市烟草公司会泽分公司云南会泽654200

为明确诱抗蛋白能够对烟草产生抗病促生作用,采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀、透析和凝胶色谱柱等方法,从毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)中分离纯化出一种诱抗蛋白,并采用喷雾接种和摩擦接种的方法研究其预防保护作用。结果... 详细信息

为明确诱抗蛋白能够对烟草产生抗病促生作用,采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀、透析和凝胶色谱柱等方法,从毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)中分离纯化出一种诱抗蛋白,并采用喷雾接种和摩擦接种的方法研究其预防保护作用。结果表明,经SDS-PAGE显示该诱抗蛋白分子量约为38 k D,且目的蛋白存在于Pro-P2-TX组份中;对烟株进行烟草普通花叶病毒病的接种试验,接种3 d后,诱抗蛋白处理组烟草叶片枯斑数明显少于清水对照组,对TMV的诱抗效果为73.79%;该诱抗蛋白能够明显促进烟草的生长,诱导处理40 d后,烟草的株高、叶宽和茎围与清水对照相比明显增加,其中株高增长72.43%,叶宽和茎围分别增加61.06%和29.05%。因此,试验结果说明毁灭炭疽菌诱抗蛋白具有诱导烟草产生抗病性和促进烟草生长的作用。

关键词：诱抗蛋白毁灭炭疽菌分离纯化诱导抗病性烟草生长

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烟草炭疽菌Colletotrichum destructivum诱抗蛋白及其作用分析

烟草炭疽菌Colletotrichum destructivum诱抗蛋白及其作用分析

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作者：田华中国农业科学院

学位级别：硕士

本研究采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀、透析和凝胶色谱柱等方法,首次从毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum中分离纯化出一种诱抗蛋白。为进一步确定该诱抗蛋白的生物活性,研究诱导烟株产生抗病性及对烟草悬浮细胞的作用,本试验以... 详细信息

本研究采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀、透析和凝胶色谱柱等方法,首次从毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum中分离纯化出一种诱抗蛋白。为进一步确定该诱抗蛋白的生物活性,研究诱导烟株产生抗病性及对烟草悬浮细胞的作用,本试验以毁灭炭疽菌诱抗蛋白、烟草植株以及烟草悬浮细胞为研究体系,采用喷雾接种和摩擦接种方法研究该诱抗蛋白的预防保护作用,采用半定量RT-PCR技术测定诱导过氧化物酶(Hydrogen peroxidase,POD)、多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)、苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanin ammonialyase,PAL)活性及脯氨酸(Proline,PRO)含量和病程相关蛋白基因表达的变化。本研究最终从烟草炭疽菌Colletotrichum destructivum中纯化出一种新型的真菌源蛋白质激发子,并进一步研究了其诱导烟株产生抗病性及对烟草悬浮细胞的作用,为防治烟草病害提供了新的途径,同时为阐明该诱抗蛋白诱导烟草作用机制以及与植物互作奠定了基础。1.本试验采用加热、离心、硫酸铵分级沉淀和透析的方法,从毁灭炭疽菌Colletotrichum destructivum中粗提出一种诱抗蛋白,属于蛋白质类激发子,通过SDS-PAGE蛋白电泳检测,得到该粗蛋白的分子量约为38kD。通过烟草种子萌发的试验表明,该诱抗蛋白处理的烟草种子与清水对照相比,出芽率高,整体长势整齐,茎明显长于对照组,处理的发芽情况明显好于对照,证明该诱抗蛋白有一定的诱导生物活性,可以进行下一步的试验。2.根据诱抗粗蛋白中分子量分布情况,选用Sephacryl S200(分离范围5-250 kD)凝胶色谱柱对其进行分离纯化,按照一定的色谱条件纯化后得到四个峰,按峰收集了4个组分,分别命名为Pro-P1 TX、Pro-P2 TX、Pro-P3 TX和Pro-P4 TX。将四个组分进行浓缩,浓缩后每个组分洗出大量的盐,上清部分通过Sephadex G10进行脱盐,盐析部分透析除盐。最后本实验室采用SDS-PAGE对分离纯化得到的蛋白组分进行检测,在Pro-P2 TX中发现了目的蛋白条带,其他组分中未发现,所以目的蛋白存在于Pro-P2-TX组分中。3.诱抗粗蛋白和诱抗纯蛋白能够诱导烟株产生抗病性。接种3、5和7 d后,毁灭炭疽菌诱抗粗蛋白对烟草炭疽病的诱抗效果分别为58.00%、48.99%和49.65%,对烟草白粉病的诱抗效果分别为83.26%、80.76%和78.60%,并可以抑制烟草普通花叶病毒的复制及在寄主体内的扩增。纯化后的诱抗蛋白对烟草普通花叶病毒病(Tobacco mosaic virus,TMV)的诱抗效果为73.79%,处理组枯斑数明显少于对照组,并能够促进烟草的生长,诱导处理40 d后,烟草的株高、叶宽和茎围与对照相比明显增加。所以毁灭炭疽菌诱抗蛋白具有诱导烟草产生抗病性和促进烟草生长的作用。4.诱抗粗蛋白处理烟草悬浮细胞后,诱导过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性及脯氨酸(PRO)含量产生变化。烟草悬浮细胞经诱抗蛋白处理后,POD、PPO、PAL活性及PRO含量明显提高,分别在8、12、6和12 h达到峰值;采用半定量RT-PCR技术验证了诱抗蛋白诱导烟草病程相关蛋白基因PR1a、PR1b以及抗病信号传导途径关键基因NPR1的表达。

关键词：毁灭炭疽菌诱抗蛋白分离纯化烟草悬浮细胞诱导抗病性

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玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63诱抗粗蛋白对黄瓜的诱抗作用

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中国生物防治学报 2020年第2期36卷 272-279页

作者：郭景红韩兴甄丹妹孟庆芳康占海王冰李亚宁刘大群河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心/国家北方山区农业工程技术研究中心保定071001 中国农业科学院研究生院北京100081

玫瑰黄链霉菌Strempomyces roseoflavus Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗链霉菌,该菌株及其代谢产物对多种重要的植物病原菌都具有较强的抑制作用,为了探明该生防菌产生的诱抗粗蛋白对黄瓜抗病性的诱导作用... 详细信息

玫瑰黄链霉菌Strempomyces roseoflavus Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗链霉菌,该菌株及其代谢产物对多种重要的植物病原菌都具有较强的抑制作用,为了探明该生防菌产生的诱抗粗蛋白对黄瓜抗病性的诱导作用,采用离体叶片接种的方法,发现诱抗粗蛋白诱导黄瓜叶片灰霉病发病直径显著小于对照;经组织染色法和紫外分光光度计法测定,发现诱抗粗蛋白可以诱导黄瓜叶片中活性氧(ROS)的积累和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)等抗病相关酶活性的显著提高;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定,发现诱抗粗蛋白还可以诱导黄瓜叶片中PR-1a、PR-3、PR-9和NPR1等抗病相关基因表达的上调,试验结果表明Men-myco-93-63产生的诱抗粗蛋白能够诱导黄瓜抗病性的提升。

关键词：玫瑰黄链霉菌诱抗蛋白诱导抗病性防御酶活性抗病相关基因

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