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三七总皂苷抑制剪切诱导血小板聚集及血栓形成的生物力药理学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王贻琳李佳刘陆宫平许静廖福龙游云中国中医科学院中药研究所

目的：从剪切诱导Piezo1介导的钙离子信号通路探讨三七总皂苷（PNS）干预血小板聚集和血栓形成的作用机制。方法：采用Bioflux1000z微流控装置，对血小板施加生理(500 s-1)及病理高剪切率(12 000 s-1)，或在生理剪切率(500 s-1)下使用Pi... 详细信息

目的：从剪切诱导Piezo1介导的钙离子信号通路探讨三七总皂苷（PNS）干预血小板聚集和血栓形成的作用机制。方法：采用Bioflux1000z微流控装置，对血小板施加生理(500 s-1)及病理高剪切率(12 000 s-1)，或在生理剪切率(500 s-1)下使用Piezo1激动剂Yoda1刺激血小板活化。流式细胞术检测剪切诱导血小板钙离子内流，血小板与血管性血友病因子（vWF）结合；酶联免疫吸附法检测剪切诱导血小板vWF释放；微流通道法检测高剪切下vWF介导的血小板聚集及整合素αIIbβ3活化。建立了高剪应力联合内皮损伤致小鼠动脉血栓模型，采用超声多普勒血流仪监测血栓反复形成及脱落而导致的周期性血流降低（CFR），流式细胞术检测血小板与血浆vWF结合，评价三七总皂苷对高剪切诱导的体内动脉血栓形成的影响。结果：在体外微流控实验中，三七总皂苷以浓度依赖方式降低病理高剪切率(12 000 s-1)或Yoda1诱导的血小板钙离子内流、血小板与vWF结合、vWF介导的血小板与纤维蛋白原结合以及血小板α颗粒vWF的释放。在高剪切诱导的小鼠动脉血栓模型中，三七总皂苷能够显著降低颈总动脉的周期性血流降低及血管闭塞时间，抑制血小板与vWF的结合。结论：三七总皂苷可抑制高剪切诱导的Piezo1介导的钙离子内流，进而影响血小板与vWF结合及整合素αIIbβ3激活，改善病理高剪切诱导的血小板聚集和动脉血栓形成。

关键词：动脉血栓剪应力血小板 Piezo1 血管性血友病因子(vWF)

人工膝关节置换术后不同血小板水平应用利伐沙班抗凝治疗对患者下肢深静脉血栓形成的影响

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解放军医学杂志 2024年

作者：陈玉萍文映红祁云南方医科大学珠江医院药学部

目的　探讨人工膝关节置换术后不同血小板水平应用利伐沙班抗凝治疗对患者下肢深静脉血栓形成(DVT)的影响。方法　选取2020年6月－2022年6月于南方医科大学珠江医院接受人工膝关节置换术的144例患者，患者术后均服用利伐沙班进行抗凝治... 详细信息

目的　探讨人工膝关节置换术后不同血小板水平应用利伐沙班抗凝治疗对患者下肢深静脉血栓形成(DVT)的影响。方法　选取2020年6月－2022年6月于南方医科大学珠江医院接受人工膝关节置换术的144例患者，患者术后均服用利伐沙班进行抗凝治疗，其中血小板>100×109/L开始抗凝的患者纳入观察组(n=76)，血小板>300×109/L开始抗凝的患者纳入对照组(n=68)，采用倾向性评分匹配调整均衡性。比较两组手术前后凝血指标[D-二聚体、血浆黏度(Pv)]的变化；Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析两组术后30 d内发生DVT的情况；依据人工膝关节置换术后下肢DVT发生情况分为DVT组(n=36)与无DVT组(n=76)。采用logistic回归模型分析抗凝治疗前血小板水平与术后DVT的相关性；多因素logistic回归分析人工膝关节置换术后患者发生DVT的危险因素；R软件建立列线图，Bootstrap法重复抽样1000次进行验证，以ROC曲线下面积(AUC)和校准曲线评价区分度与准确度。结果　匹配后观察组(n=56)与对照组(n=56)基线特征均衡(P>0.05)。单因素分析结果显示，与无DVT组比较，DVT组BMI以及双侧膝关节置换、术中失血量≥400 mL、全身麻醉、使用骨水泥、三酰甘油≥1.7 mmol/L比例明显增加，D-二聚体、血小板水平明显增高，PT明显缩短，APTT明显延长，差异均有统计学意义(P血小板水平仍是术后DVT的独立危险因素(OR=3.858，95%CI 1.849～6.054)，且血小板从低到高水平五分位数组趋势性检验差异有统计学意义(P趋势血小板≥300×109/L是人工膝关节置换术后患者发生DVT的危险因素(OR>1，P血小板水平应用利伐沙班抗凝治疗能够快速改善患者的凝血功能指标，降低DVT发生率。

关键词：人工膝关节置换利伐沙班下肢深静脉血栓血小板

莪术二酮对凝血酶诱导的人血小板整合素αⅡbβ3活化的抑制作用

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中成药 2024年第6期46卷 2038-2041页

作者：程紫薇史寒冰刘沁华夏泉吴鸿飞安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽医科大学药学院安徽合肥230032 安徽医科大学第一附属医院血液科安徽合肥230022 安徽医科大学第一附属医院药剂科安徽合肥230022

目的研究莪术二酮对凝血酶诱导的人血小板整合素αⅡbβ3活化的抑制作用。方法健康志愿者全血制备成洗涤血小板,分别以终浓度100、150、200μmol/L莪术二酮与洗涤血小板共孵育,凝血酶作为诱导剂,以不加莪术二酮的血小板同步处理为对照组... 详细信息

目的研究莪术二酮对凝血酶诱导的人血小板整合素αⅡbβ3活化的抑制作用。方法健康志愿者全血制备成洗涤血小板,分别以终浓度100、150、200μmol/L莪术二酮与洗涤血小板共孵育,凝血酶作为诱导剂,以不加莪术二酮的血小板同步处理为对照组,采用血小板聚集实验检测凝血酶的最佳浓度和血小板的聚集功能,流式细胞术检测血小板的活化(P-选择素)和整合素αⅡbβ3活化(PAC-1)情况,Western blot法检测Integrinβ3相关蛋白表达。结果与对照组比较,莪术二酮可抑制凝血酶诱导的血小板聚集、P-选择素的表达、PAC-1的结合能力以及Talin 1、p-Src、p-Integrinβ3蛋白表达(P血小板活化发挥抗血小板的作用。

关键词：莪术二酮血小板活化和聚集整合素αⅡbβ3

痛风患者血小板来源NLRP3和高迁移率族蛋白1的表达水平及临床意义

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中国临床研究 2024年第7期37卷 1085-1089,1096页

作者：张春泽刘慧慧李学梅苏娟青海大学研究生院青海西宁810016 青海大学高原医学研究中心青海省高原医学应用基础重点实验室青海西宁810016 青海大学附属医院风湿免疫科青海西宁810001 青海大学附属医院检验科青海西宁810001

目的探讨痛风患者血小板来源含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)与高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平,以及两者在痛风中的临床意义。方法收集2022年1月至2023年1月青海大学附属医院风湿免疫科痛风性关节炎(GA)男性患者25例,高尿酸血症(... 详细信息

目的探讨痛风患者血小板来源含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)与高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平,以及两者在痛风中的临床意义。方法收集2022年1月至2023年1月青海大学附属医院风湿免疫科痛风性关节炎(GA)男性患者25例,高尿酸血症(HUA)男性患者23例,同时于医院体检中心选取年龄相匹配的男性健康对照(HC)者15例。提取所有研究对象血小板,采用流式细胞术(FCM)检测血小板来源NLRP3、HMGB1的表达水平。同时收集所有研究对象的一般资料及实验室指标,并对NLRP3、HMGB1与其实验室指标进行Pearson线性相关和Spearman秩相关分析。结果GA组NLRP3、HMGB1阳性细胞率高于HUA组、HC组,HUA组高于HC组,差异有统计学意义(P血小板计数(PLT)、血尿酸(UA)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)水平高于HUA组、HC组,HUA组BMI、PLT、UA水平高于HC组(P血小板平均体积(MPV)水平低于HC组(P血小板来源的NLRP3、HMGB1可间接反映痛风患者体内炎症及疾病的活动程度,可能参与了痛风的发生及发展,或有望成为评估痛风的生物学指标。

关键词：痛风高尿酸血症血小板含pyrin结构域NOD样受体家族3 高迁移率族蛋白1

基于血小板代谢组学探究补阳还五汤对气虚血瘀证的影响

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中华中医药学刊 2024年

作者：张国瑗李瑛王紫艳孙明谦刘建勋中国中医科学院博士后科研流动站中国中医科学院西苑医院临床药理研究所中国中医科学院西苑医院基础医学研究所

目的：利用代谢组学方法研究气虚血瘀证大鼠模型血小板中的代谢物变化情况，并进一步阐释补阳还五汤对气虚血瘀证的干预作用。方法：将30只SD大鼠（Sprague dawley Rats）随机分为正常组、模型组、补阳还五汤组。模型组通过水环境多平... 详细信息

目的：利用代谢组学方法研究气虚血瘀证大鼠模型血小板中的代谢物变化情况，并进一步阐释补阳还五汤对气虚血瘀证的干预作用。方法：将30只SD大鼠（Sprague dawley Rats）随机分为正常组、模型组、补阳还五汤组。模型组通过水环境多平台睡眠剥夺系统建立睡眠剥夺模型，补阳还五汤组为在造模成功之后给药2周，给药的同时加睡眠剥夺。补阳还五汤组按照临床剂量13 g·kg- 1灌胃补阳还五汤，正常和模型组灌服等量的蒸馏水，每日同时间灌胃1次，连续14 d。从抓力、凝血功能、血小板形态及聚集率、P-选择素（P-Selectin，CD62P）表达率综合评价模型的构建和血小板功能；利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（Ultra-high Performance Liquid Chromatography with Quadrupole Time-of-flight Mass Spectrometry，UPLC-Q-TOF-MS）进行大鼠血小板中内源性代谢物的代谢组学分析，检测条件为反相色谱（Reverse Phase Liquid Chromatography，RPLC）柱(Waters公司，X-bridge C183 μm，2.1 mm×100 mm)和亲水作用色谱（Hydrophilic Interaction Chromatography，HILIC）柱（Waters公司，ACQUITY UPLC，BEH amide 1.7 μm，2.1 mm×100 mm），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）梯度洗脱，流速0.3 mL·min-1，电喷雾离子源（Electrospray Ionization，ESI），正、负离子模式检测，扫描范围m/z 50～1 000。利用多元统计分析筛选组间差异离子，将碎片离子信息与人类代谢组数据库（Human Metabolome Database，HMDB）等数据库匹配以鉴定生物标志物。通过京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）数据库获得代谢物的生物信息，采用MetaboAnalyst 5.0软件分析其相关代谢通路。结果：本研究显示，与正常组比较，模型组大鼠抓力显著降低（P血小板最大聚集率（Maximum Aggregation Rate ，MAR）、平均聚集率（Average Aggregation Rate，AAR）显著上升（P血小板MAR、AAR明显降低，具有不同程度的差异（P血小板CD62P表达明显升高（P血小板CD62P的表达率（P血小板过度活化，伪足伸出明显，血小板之间聚集现象增多；与模型组比较，补阳还五汤组少见血小板活化和聚集现象。代谢组学结果显示，气虚血瘀证大鼠模型血小板代谢紊乱，最终得到95种差异显著代谢物，主要的差异代谢物集中在脂肪酸、氨基酸、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、核苷酸等。补阳还五汤对气虚血瘀证的干预作用主要反映在对脂质代谢、氨基酸代谢、核酸代谢、能量代谢等代谢途径的调节。结论：本研究初步揭示了气虚血瘀证模型大鼠血小板的代谢组学特征，并为补阳还五汤干预气虚血瘀证的关于血小板的作用机制提供依据。

关键词：代谢组学血小板气虚血瘀证补阳还五汤脂质代谢血小板活化

基于单细胞测序分析脓毒症早期血小板数量和功能变化

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实用医学杂志 2024年第9期40卷 1218-1224页

作者：王仙琦张斌张琪代铮张锦鑫梁晓丽李琳吴林刘善收空军军医大学第一附属医院急诊科西安710032 西安市秦皇医院急诊科西安710699

目的基于临床研究和单细胞测序技术分析脓毒症早期血小板数量和功能的变化。方法前瞻性病例对照研究,收集并比较不同预后组脓毒症患者疾病早期临床数据的差异;采用多因素logistic回归分析死亡的独立危险因素并通过ROC曲线评估临床指标... 详细信息

目的基于临床研究和单细胞测序技术分析脓毒症早期血小板数量和功能的变化。方法前瞻性病例对照研究,收集并比较不同预后组脓毒症患者疾病早期临床数据的差异;采用多因素logistic回归分析死亡的独立危险因素并通过ROC曲线评估临床指标的预测效能;招募健康志愿者和脓毒症患者采集外周静脉血样,分选细胞样本进行单细胞测序(sc-RNA seq);借助生物信息学技术分析脓毒症早期血小板数量变化、显著差异的基因及其功能分析。结果(1)共224例患者入组,90 d存活率70.5%;与存活组相比,死亡患者疾病早期血小板计数和平均动脉压显著降低,血乳酸值和SOFA评分显著升高。(2)基于单细胞测序技术外周血细胞可注释分为6群,脓毒症早期固有免疫细胞(中性粒细胞,单核细胞和树突状细胞)数量占比较健康组显著升高(2.15∶1);血小板则显著下降(0.31∶1)。(3)生物信息学技术鉴定出CD41/CD42a/CD61为血小板特异性分子,脓毒症时表达量显著升高,联合注释血小板能够独立成群。(4)脓毒症时血小板内771种基因表达显著上调,1101种基因表达显著下调,包括参与细胞黏附、趋化作用和免疫应答等病理机制的核心分子;功能分析提示差异基因富集于凝血级联、免疫应答和细胞死亡,参与免疫细胞趋化、铁死亡以及焦亡相关的NOD样受体信号通路。结论脓毒症早期患者外周血小板数量减少且与不良预后相关;疾病早期血小板内CD41/CD42a/CD61显著升高可作为特异性标志分子,血小板不仅介导细胞黏附和凝血级联,还参与免疫细胞趋化、炎性应答和细胞病理性死亡等功能变化。

关键词：单细胞测序脓毒症血小板标志分子信号通路免疫功能

经导管主动脉瓣置换术后血小板变化特点及影响因素分析

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中国胸心血管外科临床杂志 2024年第6期31卷 832-837页

作者：李翔宇张海波杨芳宇郑帅孟斐王胜洵焦玉清李岳环吴凯胜沈经纶首都医科大学护理学院北京100069 首都医科大学附属北京安贞医院瓣膜外科中心北京100029

目的分析行经导管主动脉瓣置换术(transcatheter aortic valve implantation,TAVI)患者术后在院期间血小板变化特点及其影响因素。方法回顾性纳入2017年3月—2021年10月在北京安贞医院瓣膜外科中心行TAVI患者,根据患者术后血小板下降特... 详细信息

目的分析行经导管主动脉瓣置换术(transcatheter aortic valve implantation,TAVI)患者术后在院期间血小板变化特点及其影响因素。方法回顾性纳入2017年3月—2021年10月在北京安贞医院瓣膜外科中心行TAVI患者,根据患者术后血小板下降特点分为血小板变化自限性组和非自限性组。比较两组患者的术前一般资料、术前及术后超声资料、术中操作资料和术后在院期间抗血栓药物使用情况。结果最终纳入患者249例,自限性组175例(70.3%),其中男100例、女75例;非自限性组74例(29.7%),其中男43例、女31例,两组患者性别差异无统计学意义(P=0.863)。自限性组患者平均年龄为(73.11±8.88)岁,非自限性组为(71.54±10.39)岁,差异无统计学意义(P=0.231)。自限性组一般于术后第2 d发生血小板下降,并于术后第4 d达计数最低点,于术后第5~7 d恢复至基线水平;非自限性组血小板变化为单纯上升、下降或无规律波动。自限性组患者术前主动脉瓣狭窄程度更严重(P血小板变化多呈自限性下降趋势,可能与患者术前主动脉瓣狭窄严重程度、术中使用体外循环装置、术后瓣周漏有关。

关键词：经导管主动脉瓣置换术主动脉瓣狭窄血小板影响因素

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血细胞处理仪制备洗涤混合血小板及对生物活性的影响

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实用医学杂志 2024年第10期40卷 1445-1449页

作者：陈小光陈茵谭爱玲梁明月黄小敏杨子曜何博广州血液中心广州市血液安全重点实验室广州510095

目的建立血细胞处理仪(NGL-BBS)新程序制备洗涤混合血小板,与传统手工法比较对血小板生物活性的影响。方法用白膜法从无偿献血者捐献的全血中分离并制备混合浓缩血小板,分别采用血细胞处理仪(NGL-BBS)设定的新程序(观察组)和手工法(对照... 详细信息

目的建立血细胞处理仪(NGL-BBS)新程序制备洗涤混合血小板,与传统手工法比较对血小板生物活性的影响。方法用白膜法从无偿献血者捐献的全血中分离并制备混合浓缩血小板,分别采用血细胞处理仪(NGL-BBS)设定的新程序(观察组)和手工法(对照组)进行制备洗涤混合血小板,修改血细胞处理仪原洗涤红细胞程序参数建立新的洗涤血小板程序,具体参数如下:稀释量150 mL,洗涤量150 mL,稀释速度100 r/min,洗涤速度120 r/min。流式细胞术比较两组洗涤混合血小板的生物活化标志物CD62P和CD63的表达率,并使用血栓弹力图仪(TEG)测量和比较两组洗涤混合血小板的MA值。结果观察组洗涤混合血小板CD62P和CD63表达率均低于对照组(t=4.11,P血小板的血栓弹力图MA值显著大于对照组(t=6.67,P血小板的方法对生物活性的影响明显小于手工制备法。

关键词：血小板生物活性血栓弹力图 MA值

血小板/淋巴细胞比值与腹膜透析相关性腹膜炎预后的关系:一项回顾性研究

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临床肾脏病杂志 2024年第4期24卷 303-308页

作者：关庆宇甘文渊徐力陈文莉江汉大学武汉430056 华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院肾内科武汉430014

目的探讨血小板/淋巴细胞比值(platelet to lymphocyte ratio,PLR)与腹膜透析相关腹膜炎(peritoneal dialysis-associated peritonitis,PDAP)患者治疗失败的相关性。方法选取2018年1月至2022年10月在华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院肾内科住院,符合临床PDAP诊断标准的136例患者作为研究对象,收集患者的人口学、临床及实验室检查等资料,根据PDAP的临床结局,将研究对象分为治疗成功组与治疗失败组,比较两组患者的一般资料和相关临床实验室指标,采用多因素Logistic回归分析法研究PLR值与PDAP治疗失败的关系,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析PLR对PDAP患者治疗失败的预测价值。结果共136例腹膜透析患者发生221例次PDAP。与治疗成功组相比,治疗失败组的PLR[(472±296)比(232±10~6)]、中性粒细胞/淋巴细胞比值[(15.40±11.20)比(7.49±5.92)]、血小板[(256±92)×10^(9)/L比(216±84)×10^(9)/L]水平均显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05),而血清白蛋白[(25.08±4.79)g/L比(28.21±5.31)g/L]、淋巴细胞计数水平[(0.59±0.28)×10^(9)/L比(1.06±0.47)×10^(9)/L]均显著性下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析表明PLR(每100)(OR=2.419,95%CI:1.748~3.346,P<0.001)、血钠(OR=0.856,95%CI:0.768~0.952,P=0.004)是PDAP治疗失败的独立危险因素。ROC曲线显示PLR是PDAP患者治疗失败的预测因子(截断值为341,曲线下面积为0.803,95%CI:0.720~0.886,P<0.001)。结论PLR、血钠是PDAP治疗失败的独立危险因素,PLR作为一种经济、易获得的指标,是PDAP发生不良结局的新标志。

关键词：腹膜炎血小板淋巴细胞