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棉籽浓缩蛋白饲料添加枯草芽孢杆菌和β-葡聚糖对虹鳟幼鱼生长性能、血清生化指标和机体健康的影响

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动物营养学报 2024年第6期36卷 3857-3875页

作者：史弘赫刘洋王荻陆绍霞韩世成邱广文王常安张辉刘红柏东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070

本试验旨在探究在棉籽浓缩蛋白饲料中添加枯草芽孢杆菌和β-葡聚糖对虹鳟幼鱼生长性能、血清生化指标和机体健康的影响。试验选择体质量[(21.66±0.08)g]基本一致的健康虹鳟幼鱼420尾,随机分为7组,每组3个重复,每个重复20尾。对照组(CON... 详细信息

本试验旨在探究在棉籽浓缩蛋白饲料中添加枯草芽孢杆菌和β-葡聚糖对虹鳟幼鱼生长性能、血清生化指标和机体健康的影响。试验选择体质量[(21.66±0.08)g]基本一致的健康虹鳟幼鱼420尾,随机分为7组,每组3个重复,每个重复20尾。对照组(CON组)饲喂基础饲料,棉籽浓缩蛋白组(CPC组)饲喂用30%棉籽浓缩蛋白等量替代基础饲料中鱼粉的饲料,试验组分别在CPC组饲料的基础上添加1×10^(6)CFU/g枯草芽孢杆菌(Ⅰ组)、1×10^(8)CFU/g枯草芽孢杆菌(Ⅱ组)、1×10^(8)CFU/g枯草芽孢杆菌冻干粉(Ⅲ组)以及在CPC组饲料中添加0.1%(Ⅳ组)和1.0%β-葡聚糖(Ⅴ组)。试验期8周。结果表明:1)与CON组相比,CPC组和各试验组虹鳟幼鱼终末体质量、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)均显著降低(P0.05)。2)与CON组相比,CPC组血清谷丙转氨酶(ALT)活性显著提高(P虹鳟幼鱼肠道脂肪酶和α-淀粉酶活性显著降低(P虹鳟幼鱼肠道总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P虹鳟幼鱼肠道白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量显著提高(P虹鳟幼鱼肠道封闭蛋白-1(CLD1)、闭合蛋白(OCLN)、三细胞紧密连接蛋白(TRIC)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)以及补体3(C3)和补体4(C4)mRNA相对表达量均显著降低(P虹鳟幼鱼肠道绒毛高度显著降低(P虹鳟幼鱼肝脏和脾脏杀鲑气单胞菌数量显著提高(P虹鳟幼鱼生长性能无显著影响,但改善了其血清生化指标、肠道健康和抗杀鲑气单胞菌能力,且以喷涂工艺添加1×10^(8)CFU/g枯草芽孢杆菌和添加1.0%β-葡聚糖对虹鳟幼鱼的效果较佳。

关键词：虹鳟棉籽浓缩蛋白枯草芽孢杆菌 β-葡聚糖生长性能肠道健康

虹鳟Scarb1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

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西北农业学报 2024年第6期33卷 1008-1018页

作者：张东强黄进强李永娟吴深基赵璐宋玉芳甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 甘肃农业大学理学院兰州730070

清道夫受体B类成员1(scavenger receptor class B member 1,Scarb1)作为细胞表面的膜受体蛋白,在动物体色形成过程中发挥重要作用。为了解Scarb1基因在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)体色形成中的作用,通过RACE技术克隆虹鳟Scarb1基因的cDN... 详细信息

清道夫受体B类成员1(scavenger receptor class B member 1,Scarb1)作为细胞表面的膜受体蛋白,在动物体色形成过程中发挥重要作用。为了解Scarb1基因在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)体色形成中的作用,通过RACE技术克隆虹鳟Scarb1基因的cDNA全长,并运用生物信息学方法分析该基因及其序列结构特征,同时使用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Scarb1基因在虹鳟、金鳟及其杂交F_(1)代不同发育阶段和不同组织中的表达情况。结果显示,Scarb1基因cDNA序列全长为2032 bp,开放阅读框1479 bp,编码492个氨基酸,预测分子质量为55.59 ku,且存在保守的CD36结构域和2个跨膜区。序列同源性分析显示,虹鳟与其他硬骨鱼类的氨基酸序列相似度为71.69%~98.58%;进化分析发现虹鳟与大马哈鱼亲缘关系最近,与哺乳动物和两栖动物亲缘关系最远。qRT-PCR检测结果表明,在虹鳟与金鳟胚胎期及出膜后各发育阶段中Scarb1基因均有不同程度表达,且表现为受精期至桑葚期的表达显著高于其他时期(P虹鳟与金鳟同一时期的差异分析发现该基因在胚胎期及7 dph(days post hatch)、1 M(month post hatch)、2 M和3 M时期中表达存在显著差异(P虹鳟与金鳟背部皮肤和背部肌肉等色素沉着性组织中表达量较高,其中在金鳟背部皮肤的表达量显著高于虹鳟(P虹鳟体色形成有着密切关系,且可能在金鳟黄色体色形成过程中发挥重要作用。

关键词：虹鳟体色清道夫受体B类成员1(Scarb1) 基因克隆表达分析

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鲑降钙素对虹鳟鳞组织miRNA表达的影响

水产学报 2024年第3期48卷 46-57页

作者：周启苓马骞王刘永毛非凡杨二军陈刚广东海洋大学水产学院广东海洋大学南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)

miRNA作为一类非编码小RNA分子，在脊椎动物骨代谢的分子调控网络中占有重要地位。本研究旨在探究钙调节因子对硬骨鱼类骨组织miRNA表达水平的影响。采用鲑降钙素(salmon calcitonin, sCT)对虹鳟幼鱼进行腹腔注射，并在注射24 h后采集... 详细信息

miRNA作为一类非编码小RNA分子，在脊椎动物骨代谢的分子调控网络中占有重要地位。本研究旨在探究钙调节因子对硬骨鱼类骨组织miRNA表达水平的影响。采用鲑降钙素(salmon calcitonin, sCT)对虹鳟幼鱼进行腹腔注射，并在注射24 h后采集鳞片，利用高通量测序技术和生物信息学方法对其中的miRNA表达谱进行分析。注射组及对照组样品miRNA测序分别获得14 051 631和15 816 147条高质量miRNA序列(18～26 nt)，并分别从中鉴定出568和592种成熟miRNA。注射sCT后的虹鳟鳞片中共筛选出24个差异表达miRNA (DEMs，其中9个表达上调，15个表达下调)。随后，从中随机选取8个miRNA进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测，其检测结果与高通量测序结果一致。GO注释和富集分析结果显示，DEMs的预测靶基因主要被注释在金属离子结合、钙离子结合、G蛋白偶联受体信号通路、Wnt信号通路和经典Wnt信号通路等功能上，靶基因主要在NF-kappaB输入细胞核的负调节、IL-1β分泌的负调节和TGF-β结合等功能上显著富集。KEGG富集分析结果显示，DEMs的靶基因显著富集在Toll样受体和雌激素等信号通路中。基于上述分析结果，本研究筛选出omy-miR-29a-5p、omy-miR-30d-5p、omy-mir-125b-2-p3、omy-miR-138、omy-miR-199b-5p和omy-miR-200b等多个可能参与虹鳟骨代谢调控过程的miRNA。本实验筛选出的差异miRNA可为硬骨鱼类骨代谢调控机制研究提供素材。

关键词：虹鳟 miRNA 鲑降钙素鳞钙代谢骨代谢

虹鳟传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病重组腺病毒载体的构建

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海洋渔业 2024年第1期46卷 86-95页

作者：李守湖张雪青石建高中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090 上海市质量监督检验技术研究院上海200031

传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,... 详细信息

传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,通过多基因片段同源重组技术将IHNVG基因和IPNVVP2基因克隆到pAdTrack-CMV载体上,经过线性化后与pAdEasy-1载体在BJ5183菌体内同源重组,构建出重组腺病毒质粒,经PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,再经PacⅠ线性化后用于转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒。通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达来监控重组腺病毒的复制情况,用western blot法分别检测糖蛋白(G蛋白)和VP2蛋白的表达,并测定重组病毒的滴度。结果显示,克隆出的IHNVG基因和IPNVVP2基因总长度为3036 bp。该病毒在HEK-293细胞中分别表达出蛋白分子质量约为58 kD和54 kD的产物,其滴度为1.0×10^(9.5)mL^(-1)TCID_(50)。结果表明,研究成功获得IHNVG基因和IPNVVP2基因重组腺病毒,该病毒在HEK-293细胞中滴度较高,能够稳定表达。研究结果为下一步研发传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病二联疫苗奠定了基础,并为进一步防控传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病提供了参考。

关键词：虹鳟传染性造血器官坏死病传染性胰腺坏死病 G基因 VP2基因腺病毒载体

下潜养殖系统中不同规格气泡对虹鳟补气效果的影响

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水生生物学报 2024年第5期48卷 787-798,I0001,I0002页

作者：李哲坤周演根余剑非董暄李丽姚波高勤峰董云伟中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室青岛266003 国家海洋局北海环境监测中心自然资源部渤海生态预警与保护修复重点实验室山东省海洋生态环境与防灾减灾重点实验室青岛266000 崖州湾创新研究院海南热带海洋学院三亚572000 重庆科技大学化学化工学院工业发酵微生物重庆市重点实验室重庆401331

为探究不同规格气泡对下潜养殖虹鳟生长、行为、能量收支、抗氧化能力和体形态的影响,试验设置5个不同处理组:对照组(不增加网罩和补气设备)、无气泡组(水中增加网罩隔离)和3种气泡组(水中增加网罩隔离,并在网罩下方添加3种规格的气石,... 详细信息

为探究不同规格气泡对下潜养殖虹鳟生长、行为、能量收支、抗氧化能力和体形态的影响,试验设置5个不同处理组:对照组(不增加网罩和补气设备)、无气泡组(水中增加网罩隔离)和3种气泡组(水中增加网罩隔离,并在网罩下方添加3种规格的气石,气泡直径分别为1.02、0.33和0.11 cm)。经过28d的养殖实验,结果显示大、中气泡组虹鳟的末体重和特定生长率显著高于小、无气泡组,鱼鳔体积和鱼鳔产生的浮力均显著大于小、无气泡组,这表明大、中气泡有效地补充了虹鳟鱼鳔内的气体,恢复了其生长性能。气泡组虹鳟的SOD和CAT活力显著低于对照组,且MDA和LPO显著降低,表明下潜胁迫对其机体抗氧化系统造成一定的损伤;但大、中气泡组虹鳟抗氧化指标的IBR_(v2)较小、无气泡组更接近对照组,表明其在一定程度能缓解下潜养殖的负面效应。气泡组虹鳟身体的“流线型”高于对照组,且鳍和尾部的相对面积增大,这可能是虹鳟应对浮力缺失的改善措施。综上,由于较大气泡更容易被虹鳟吞食,且更易于在食道中聚集,经鳔管压缩进入鱼鳔,因此,大、中气泡具有更强的补气效果来缓解下潜养殖鲑鱼负浮力的胁迫。

关键词：气泡鱼鳔补气生长抗氧化能力形态学虹鳟

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虹鳟倍性鉴定SSR标记筛选与应用研究

渔业科学进展 2024年第4期 43-52页

作者：马海兵黄天晴徐革锋刘恩慧谷伟王高超郭福元董福霖郑龙华张黎黎姜再胜王炳谦中国水产科学研究院黑龙江水产研究所冷水鱼类产业技术创新战略联盟烟台经海海洋渔业有限公司安徽省桐城市水产服务中心

虹鳟(Oncorhynchusmykiss)是我国冷水性鱼类的主要养殖品种。与二倍体相比，虹鳟三倍体具有生长速度快、肉质好和不育等优点。目前，鉴定虹鳟倍性主要是通过流式细胞术进行DNA含量分析，但这种方法需要采集鱼类血液或组织样本，会对其... 详细信息

虹鳟(Oncorhynchusmykiss)是我国冷水性鱼类的主要养殖品种。与二倍体相比，虹鳟三倍体具有生长速度快、肉质好和不育等优点。目前，鉴定虹鳟倍性主要是通过流式细胞术进行DNA含量分析，但这种方法需要采集鱼类血液或组织样本，会对其造成伤害。为了实现利用微创方法收集样本鉴定虹鳟倍性，本研究利用PCR扩增以及电泳分离技术对153个微卫星标记(SSR标记)进行分析，其中139个SSR标记能够在二倍体和三倍体中成功扩增，筛选出132个SSR标记具有多态性，最终鉴定出7个标记在三倍体中表现出较高的变异性。通过在52个已知倍性水平的参考样本和48个未知倍性的样本上进行验证，进一步从中筛选出3个SSR标记(SSR1054、SSR1056和SSR1468)足以区分倍性水平，并且根据3个标记序列重新设计了3对具有良好稳定性的引物序列进行倍性分析应用。本研究所筛选的SSR标记解决了现有虹鳟倍性鉴定中存在的技术流程复杂、耗材昂贵的问题，并有助于不同倍性虹鳟的遗传多样性研究。

关键词：虹鳟鲑科鱼类微卫星三倍体倍性检测

养殖水域Cu胁迫对虹鳟MT2基因表达模式的影响

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环境科学与技术 2024年

作者：周静卢军浩赵映灿徐永辉李湘茹巫佳俊权金强甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃省生态环境科学设计研究院

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响，开发MTs(Metallothioneins， MTs)基因作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志，本研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列，检测了MT2基因在虹鳟... 详细信息

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响，开发MTs(Metallothioneins， MTs)基因作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志，本研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列，检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模式，以及Cu2+胁迫(Cu2+浓度75 μg/L、150 μg/L和300 μg/L)后1 d、2 d、3 d、4 d和胁迫恢复1 d、2 d时间点的MT2基因表达动态。结果表明，虹鳟MT2基因CDS区长186 bp，编码62个氨基酸，具有典型的半胱氨酸(Cys)-X(1～3个)-半胱氨酸(Cys)结构，属不稳定亲水性蛋白。虹鳟MT2基因序列与大西洋鲑的同源性最高且在肝脏中表达量最高，其次是脑和肠道。胁迫试验结果显示，MT2基因在肝脏和鳃中呈现先升高后降低的趋势，在头肾、脾脏和脑中呈现逐渐升高的趋势，且呈现一定的剂量依赖性，肠道MT2基因在胁迫2 d、3 d、4 d被显著抑制。胁迫恢复后，处理组肝脏、头肾、鳃、脑MT2基因表达量仍显著升高。综上，虹鳟MT2基因能在不同组织中被Cu2+诱导表达，推测MT2基因在虹鳟抗重金属毒性中可能发挥着重要作用；且MT2基因表达量与铜离子的浓度相关，可以作为分子生物标志检测水域生态中的重金属铜污染。

关键词：虹鳟 MT2基因铜离子胁迫基因克隆表达模式

养殖水域Cu^(2+)胁迫对虹鳟MT2基因表达模式的影响

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环境科学与技术 2024年第2期47卷 96-103页

作者：周静卢军浩赵映灿徐永辉李湘茹巫佳俊权金强甘肃省生态环境科学设计研究院甘肃兰州730020 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模... 详细信息

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模式,以及Cu^(2+)胁迫(Cu^(2+)浓度75、150和300μg/L)后1、2、3和4 d和胁迫恢复1、2 d时间点的MT2基因表达动态。结果表明,虹鳟MT2基因CDS区长186 bp,编码62个氨基酸,具有典型的半胱氨酸(Cys)-X(1~3个)-半胱氨酸结构,属不稳定亲水性蛋白。虹鳟MT2基因序列与大西洋鲑的同源性最高且在肝脏中表达量最高,其次是脑和肠道。胁迫试验结果显示,MT2基因在肝脏和鳃中呈现先升高后降低的趋势,在头肾、脾脏和脑中呈现逐渐升高的趋势,且呈现一定的剂量依赖性,肠道MT2基因在胁迫2、3和4 d被显著抑制。胁迫恢复后,处理组肝脏、头肾、鳃、脑MT2基因表达量仍显著升高。综上,虹鳟MT2基因能在不同组织中被Cu^(2+)诱导表达,推测MT2基因在虹鳟抗重金属毒性中可能发挥着重要作用,且MT2基因表达量与铜离子的浓度相关,可以作为分子生物标志检测水域生态中的重金属铜污染。

关键词：虹鳟 MT2基因铜离子胁迫基因克隆表达模式

饲料精氨酸含量对海水驯化虹鳟的渗透调节、抗氧化和免疫力的影响

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水生生物学报 2024年

作者：孙云霞周演根周思岐董暄李丽高勤峰董云伟中国海洋大学海水养殖教育部重点实验崖州湾创新研究院海南热带海洋学院

实验旨在探究饲料添加精氨酸(Arg)对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)海水驯化前后渗透调节、抗氧化和免疫力的影响。实验选择初始体质量为(67.04±6.93) g的虹鳟480尾,随机分为4组,分别投喂Arg含量为1.46%(A-1.46)、2.50%(A-2.50)、3.45%(A-3... 详细信息

实验旨在探究饲料添加精氨酸(Arg)对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)海水驯化前后渗透调节、抗氧化和免疫力的影响。实验选择初始体质量为(67.04±6.93) g的虹鳟480尾,随机分为4组,分别投喂Arg含量为1.46%(A-1.46)、2.50%(A-2.50)、3.45%(A-3.45)、4.62%(A-4.62)的4种实验饲料。在淡水养殖5周后,对上述每组虹鳟分别进行为期2d (SA-2)和4d (SA-4)的海水驯化, SA-2为首日从盐度0升至15,次日升至本地海水盐度27;SA-4首日升盐同SA-2,随后每天以4/d的升盐速度至盐度27。在淡水养殖结束和入海后的1d、7d和21d采样并测定虹鳟渗透调节、抗氧化和免疫等指标。结果显示,在淡水养殖结束后, A-4.62组虹鳟末体重、增重率显著低于其他组,表明饲料Arg含量过高会使虹鳟生长受到抑制。在两种驯化方式下,随着入海时间推移, A-3.45和A-4.62组虹鳟血清K+含量先升高后恢复,表明两组虹鳟离子转运能力较好;在入海后21d时,各组虹鳟肝脏总抗氧化能力(T-AOC)显著高于其相应淡水值,而A-3.45组虹鳟的综合生物标志物响应(IBR)最小,表明A-3.45组可能所受盐度胁迫较小。相比于SA-2方式, SA-4方式下各组虹鳟渗透压较平稳,表明SA-4方式更有利于虹鳟维持其渗透平衡。此外,在SA-2方式入海1d时, A-3.45组虹鳟将体内多余Na+排出体外,使其更好适应海水环境;随着入海时间推移, A-3.45组虹鳟血清溶菌酶(LZM)含量显著升高,表明入海后A-3.45组的体液免疫力显著提高。在SA-4方式入海21d时, A-3.45组虹鳟降低鳃NKA活力来减少Cl–流入,从而更好维持离子平衡。综上,在两种驯化方式下,饲料Arg含量为3.45%时,虹鳟的生长好,适应能力更强。

关键词：精氨酸海水驯化渗透调节抗氧化能力免疫力虹鳟