虹鳟传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病重组腺病毒载体的构建

作     者：李守湖 张雪青 石建高 LI Shouhu;ZHANG Xueqing;SHI Jiangao

作者机构：中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090 上海市质量监督检验技术研究院上海200031 

出 版 物：《海洋渔业》 (Marine Fisheries)

年 卷 期：2024年第46卷第1期

页      面：86-95页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：上海市启明星项目——扬帆专项(22YF1459800) 

主　　题：虹鳟 传染性造血器官坏死病 传染性胰腺坏死病 G基因 VP2基因 腺病毒载体 

摘      要：传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,通过多基因片段同源重组技术将IHNVG基因和IPNVVP2基因克隆到pAdTrack-CMV载体上,经过线性化后与pAdEasy-1载体在BJ5183菌体内同源重组,构建出重组腺病毒质粒,经PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,再经PacⅠ线性化后用于转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒。通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达来监控重组腺病毒的复制情况,用western blot法分别检测糖蛋白(G蛋白)和VP2蛋白的表达,并测定重组病毒的滴度。结果显示,克隆出的IHNVG基因和IPNVVP2基因总长度为3036 bp。该病毒在HEK-293细胞中分别表达出蛋白分子质量约为58 kD和54 kD的产物,其滴度为1.0×10^(9.5)mL^(-1)TCID_(50)。结果表明,研究成功获得IHNVG基因和IPNVVP2基因重组腺病毒,该病毒在HEK-293细胞中滴度较高,能够稳定表达。研究结果为下一步研发传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病二联疫苗奠定了基础,并为进一步防控传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病提供了参考。