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实用预防医学 2007年第5期14卷 1552-1554页

作者：阎祖炜朱欣李闻文中南大学湘雅医学院检验系临床微生物学免疫学教研室湖南长沙410013

目的比较和分析应用于检测药物细胞毒性的MTT法和CPE观察法。方法用MTT法和目测法分别检测麻黄、黄芩、病毒唑对Hela细胞的毒性,通过SPSS软件计算药物的TC50,用统计方法分析两种方法的差异。结果MTT法和CPE观察法得到的结果差异无统计... 详细信息

目的比较和分析应用于检测药物细胞毒性的MTT法和CPE观察法。方法用MTT法和目测法分别检测麻黄、黄芩、病毒唑对Hela细胞的毒性,通过SPSS软件计算药物的TC50,用统计方法分析两种方法的差异。结果MTT法和CPE观察法得到的结果差异无统计学意义。结论药物毒性实验中MTT法较目测法更为简单直观。

关键词： MTT法 CPE观察法药物毒性实验

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实验用食蟹猴的购买引进、实验操作与疾病案例

实验用食蟹猴的购买引进、实验操作与疾病案例

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作者：姜翼寅南京农业大学

学位级别：硕士

背景与目的:随着中国医疗行业飞速发展,国家对于临床前药物毒理研究与药物安全性评价实验越来越重视,对于实验动物要求越来越高。药物实验中使用的实验动物包括啮齿类实验动物、兔、比格犬、巴马小型猪与非人灵长类动物等。单个药物实... 详细信息

背景与目的:随着中国医疗行业飞速发展,国家对于临床前药物毒理研究与药物安全性评价实验越来越重视,对于实验动物要求越来越高。药物实验中使用的实验动物包括啮齿类实验动物、兔、比格犬、巴马小型猪与非人灵长类动物等。单个药物实验对于实验动物的利用呈现全面化趋势,需要利用的实验动物呈现体型大型化、物种高等化趋势。近年来,国内使用食蟹猴等非人灵长类动物作为实验动物已经具有一定规模且成熟的供给环境与科研背景数据。区别于其他实验动物,食蟹猴作为有智慧和个性的灵长动物,饲养管理难度较大,实验操作具有较高的危险性,且可能具有危害性较大的人畜共患病。食蟹猴作为国家二级保护动物,实验过程受到政府严格的监督与约束。本文以实验用食蟹猴为研究对象,介绍与探讨在药物实验中食蟹猴的饲养管理与疾病防治。研究内容与方法:本文以作者工作所在的江苏鼎泰药物研究股份有限公司一次利用食蟹猴进行药物实验全过程为背景,结合多次食蟹猴相关病症防治实例,分为购买引进、实验操作与疾病案例三个章节介绍与探讨如何合理合法的在药物实验中利用食蟹猴。购买引进部分由:①猴购买与引进入实验机构前准备工作与②接收与检疫构成,实验操作部分由:①动物清醒状态下抓取、②适应与训练、③保定与实验操作、④处死与解剖、⑤实验收尾共5个小节构成。其中猴购买与引进实验机构前准备工作包含:机构内动物使用审批、实验动物供应商调查、动物购买合同签订与国家二级保护动物利用申请的行政审批流程共4个部分,介绍在实验机构购买引进猴前需要在机构内准备的工具与笼具,实验机构外对于动物供应商实地考察,签订动物合同的注意事项与向行政主管部门提交保护动物利用申请流程。接收与检疫包含:猴血生化与血生理数据筛选,接收与运输到试验机构过程,检疫期工作内容3个部分,介绍猴的猴血生化与血生理数据筛选方法与经验,动物运输包装与运输方式,猴检疫期工作内容与检疫结束交接工作。动物清醒状态下抓取,适应与训练,保定与实验操作,这三部分主要介绍实验中食蟹猴的相关操作与注意事项。处死与解剖部分分为实验计划处死解剖与人道重点安乐死,介绍食蟹猴解剖过程与兽医对猴安乐死标准与具体操作。实验收尾工作包含:动物尸体无害化处理,药物清洗期与重复利用,动物捐赠与回访实例,向行政机关管理部门反馈猴的处置工作。疾病案例部分由:①心理疾病与动物福利、②药物毒性实验常见疾病例③意外情况处置3个小节构成。通过实例来介绍实验用猴疾病防治的思想与方法。结论及意义:本文利用实例、照片与图表对于利用食蟹猴完整的过程给予介绍与探讨。结合疾病防治实例为科学研究使用食蟹猴作为实验动物的提供了合理合法的方式与方法。

关键词：食蟹猴药物毒性实验实验动物兽医

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CpG-c41对胞内型TLRs介导的免疫抑制效应及其对银屑病治疗作用的研究

CpG-c41对胞内型TLRs介导的免疫抑制效应及其对银屑病治疗作用的...

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作者：刘万成第三军医大学

学位级别：硕士

自身免疫性疾病(Autoimmune disease,AID)是一类由多种因素导致的慢性炎症性疾病,发病机制复杂,至今尚未完全阐明。目前临床治疗这类疾病的药物疗效不佳,副作用大,导致疾病反复发作。越来越多的研究显示,AID与固有免疫和适应性免疫紊乱... 详细信息

自身免疫性疾病(Autoimmune disease,AID)是一类由多种因素导致的慢性炎症性疾病,发病机制复杂,至今尚未完全阐明。目前临床治疗这类疾病的药物疗效不佳,副作用大,导致疾病反复发作。越来越多的研究显示,AID与固有免疫和适应性免疫紊乱密切相关。其中,在固有免疫系统激活过程中,模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)扮演着重要角色,它们能特异性识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs),从而活化相关信号通路导致一系列免疫炎症反应。然而正是这些受体的过度活化,导致一系列AID的发生,如类风湿性关节炎(RA),系统性红斑狼疮(SLE)和银屑病(Psoriasis)。那么,探索并围绕AID发病机制寻找药物靶标,已成为当今治疗免疫性疾病的突破口。重要的PRRs有Toll样受体(TLRs)和NOD样受体(NLRs),它们能够特异性地识别病毒、细菌、真菌和寄生虫特定的组分,构成了固有免疫的第一防线。在TLRs家族中,根据其亚细胞定位可分为两大类,即:细胞膜表面TLRs(TLR4/MD-2,TLR1,TLR2和TLR6)和位于内质网和内体上的细胞内型TLRs(TLR3,TLR7/8和TLR9)。然而,值得注意的是,第一、TLRs受体的识别具有特异性,比如:TLR3和TLR7/8识别病毒dsRNA和ssRNA,而TLR9识别微生物DNA产生的未甲基化Cp G基序;第二、不同的TLRs对应的下游信号通路不同,如:TLR3通过TRIF信号通路,TLR7通过MyD88,导致大量炎症因子(TNF-ɑ、IL-6和干扰素等)的释放。NLRs作为另一类重要的细胞内型PRRs,参与识别宿主来源和微生物的损伤相关分子(damage associated molecular patterns,DAMPs)。其中NLRP3作为NLRs蛋白家族成员之一,广泛表达于DCs和巨噬细胞。由NLRP3、ASC和无活性的caspase-1前体组成的复合体称为NLRP3炎症小体,具有调控机体慢性炎症反应的功能,是内源性或外源性危险信号的胞质内感受器。它能够活化caspase-1,调控IL-1β和IL-18等促炎因子的成熟和分泌。近年来,越来越多的研究显示AID与固有免疫中的多种PRRs的过度活化密切相关。然而,不同PRRs具有各自对应的信号通路,这种多对多的方式,使得在信号通路上寻找治疗靶位,变得尤为复杂。为了对抗这种多因子诱发的炎症反应,目前的药物开发侧重于效应阶段的遏制,譬如,在治疗银屑病时,采用TNF-?、IL-17或IL-23的抗体。尽管这种后端靶标的治疗策略,能够改善炎症因子发生后续的免疫损伤,但是对免疫的干预面太大,而伴随着免疫系统损耗,严重感染等不良反应。因此,如果在致病前端过程,寻找有效的靶标,阻断免疫系统激活,降低副作用,这将是一个更好的策略。但前端受体较多,目前仍然没有发现合适的靶标与药物。我们前期报道了一段包含未甲基化Cp G结构的20bp寡聚核苷酸(CpG-ODN)序列,命名为CpG-c41(5’-TGGCGCGCACCCACGGCCTG-3’),可高效抑制TLR9介导的炎症反应。后来研究发现,CpG-c41亦可显著抑制TLR7的活化,改善由酵母多糖(Zymosan)诱导的RA炎症,说明其具有了成药可能。然而,CpG-c41安全性如何,对其它TLRs是否也有影响,是否对于AID起到很好的治疗作用。为了探究CpG-c41在一定范围内的安全性和免疫学作用特点,在本课题我们进行了以下研究:目的对通过生物信息学技术,高通量筛选出的无免疫刺激性CpG-c41分子,进行初步安全性评价;探究其对不同TLRs介导的免疫学效应的影响及其机制;构建咪喹莫特乳膏(Imiquimod,IMQ)诱导的银屑病样小鼠模型,观察CpG-c41对该模型的治疗作用。方法1、CpG-c41初步安全性评价动物急性毒性试验,Balb/c小鼠12只,雌雄各半,分为实验组和对照组,每组6只。实验组一次性尾静脉注射治疗剂量10倍(80mg/kg)的CpG-c41,对照组尾静脉注射等体积生理盐水(norman saline,NS),初步观察CpG-c41对动物的急性危害性质和危害强度。体外细胞毒性实验,通过CCK-8实验观察高浓度下CpG-c41(2-64μM)对于L929细胞活性的影响。2、CpG-c41对不同TLRs介导的免疫学效应研究(1)CpG-c41对不同TLRs介导的炎症因子释放的影响体外实验,使用TLR2,3,4,7/8,9激动剂分别刺激BMDMs,BMDCs和Thp-1细胞,另外联合使用TLR3,7/8,9激动剂中的两种刺激RAW264.7,同时给予Cp G-c41

关键词： Cp G-c41 TLRs 药物毒性实验咪喹莫特银屑病

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成年比格犬24h心电图参数变化分析

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中国比较医学杂志 2013年第5期23卷 78-78页

作者：郝智慧梁建坤崔明昊孔丽娟沈阳药科大学实验动物中心沈阳110016 沈阳药科大学计算机中心沈阳110016 辽宁省中医药研究院沈阳110034

比格犬作为较理想的实验用犬,已被广泛用于毒理学、病理学、肿瘤学及药物安全性评价等研究领域.笔者在多年从事比格犬药物毒性实验、药代动力学及血流动力学实验研究的基础上,采用标准肢体Ⅱ导联法测定了12条非麻醉状态的成年比格犬24 ... 详细信息

比格犬作为较理想的实验用犬,已被广泛用于毒理学、病理学、肿瘤学及药物安全性评价等研究领域.笔者在多年从事比格犬药物毒性实验、药代动力学及血流动力学实验研究的基础上,采用标准肢体Ⅱ导联法测定了12条非麻醉状态的成年比格犬24 h内的心电图,分析心率和心电图参数在24 h内的变化规律.

关键词：心电图参数比格犬参数变化成年药物安全性评价药物毒性实验血流动力学药代动力学

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