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荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

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第一军医大学学报 2004年第4期24卷 450-452页

作者：王水云晏芳彭贺新郑昌东柏承文深圳市人民医院急诊科广东深圳518020 第一军医大学组织胚胎学教研室广东广州510515 深圳市福田人民医院广东深圳518020

目的研究平滑肌细胞内Ca2+浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca2+浓度的方法。方法分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca2+浓度的动力学变化;首先在37 ℃环... 详细信息

目的研究平滑肌细胞内Ca2+浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca2+浓度的方法。方法分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca2+浓度的动力学变化;首先在37 ℃环境下标定Ca2+ 探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca2+ 浓度值。结果激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca2+]i 在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca2+]i 。结论荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。

关键词：荧光定量法测量平滑肌细胞钙离子浓度

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用荧光定量法检测Caspase-3的活性

细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 188-190页

作者：张勇沈佰华余奇文马安伦李宁丽张冬青上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmo... 详细信息

目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmol/L的放线菌素D诱导后,Caspase3的活性显著增高,倍增值分别为10.091和10.818,相应的Caspase3活性单位为0.641和0.659;而未经诱导的Jurkat细胞仅为0.061。加入Cas-pase3抑制剂后,倍增值分别为0.101和0.119,Caspase3的活性单位为0.006和0.007。而用Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。

关键词： Caspase-3 荧光定量法细胞凋亡检测 Jurkat细胞

人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体的荧光定量法研究

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南方医科大学学报 1988年第3期 186-191页

作者：郭明秋丁生大张文炳王金锐骆抗先第一军医大学第一附属医院指导教师第一军医大学第一附属医院肝炎免疫研究室

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞介素-2受体（IL;R）的方法及其条件.以PHA与ConA诱导单个核细胞IL;R表达的最适细胞浓度为3×10;/ml:PHA和ConA最适浓度分别为100μm/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优.PHA诱... 详细信息

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞介素-2受体（IL;R）的方法及其条件.以PHA与ConA诱导单个核细胞IL;R表达的最适细胞浓度为3×10;/ml:PHA和ConA最适浓度分别为100μm/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优.PHA诱导细胞IL;R的表达24h达到高峰,尔后逐渐下降.第一抗体（抗—Tao）和第二抗体（荧光抗体）与单个核细胞孵育时间分别以20min和10min为好.检测同一标本不同复管的细胞（1×10;）IL;R结合荧光抗体mol（简称M）为5.22±0.45×10;,变异系数（CV）为8.6％,表明该法稳定性较好.测定5例正常人细胞（1×10;）IL;R结合荧光抗体M为4.8±0.97×10;.CV为20.2％,结果表明该法能较客观检测出不同个体IL;R表达.

关键词：白细胞介素-2受体外周血单个核细胞荧光定量法抗体

用荧光定量法对28例血清标本HBsAg与抗—HBc阳性者的结果分析及荧光定量的认识

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实用医技杂志 2001年第11期8卷 838-839页

作者：庞丽君闫震太原市传染病院 030012

对门诊病人进行筛选,保存28份HBsAg阳性、抗-HBc阳性、肝功能正常的血清标本进行荧光定量检测,现将结果报告如下.

关键词：荧光定量法血清标本 HBsAg 抗HBc阳性者

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荧光定量法测定DNA熔解温度

中国医药生物技术 2017年第4期12卷 369-371页

作者：陈翔张佳琦汪泽许旭朱滨上海应用技术大学化学与环境工程学院 201418 上海百傲科技股份有限公司 200233

DNA熔解温度（Tm）指DNA双链变性过程中一半双链解离为单链的温度[1],是DNA片段的一个重要特性。准确测定DNA片段Tm值,是分子生物学实验方法（如PCR检测技术、核酸杂交检测技术等）建立的基础,在疾病的分子诊断领域具有重要现实意义。影... 详细信息

DNA熔解温度（Tm）指DNA双链变性过程中一半双链解离为单链的温度[1],是DNA片段的一个重要特性。准确测定DNA片段Tm值,是分子生物学实验方法（如PCR检测技术、核酸杂交检测技术等）建立的基础,在疾病的分子诊断领域具有重要现实意义。影响DNA片段Tm值的因素有很多,如DNA片段的长度、

关键词： DNA 熔解温度荧光定量法变性过程核酸杂交分子诊断熔解曲线人基因组磷酸盐溶液实验方法

昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分析

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中华检验医学杂志 2024年第3期47卷 293-300页

作者：陈国祺朱宝生贺静赵苑村镡颖林军岳周笑颜陈红章印红昆明理工大学附属医院昆明650500 昆明理工大学附属医院云南省第一人民医院医学遗传科国家卫生健康委西部优生与出生缺陷防控重点实验室云南省出生缺陷与遗传病研究重点实验室云南省出生缺陷与罕见病临床研究中心昆明650032

目的分析昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的基因突变特点。方法选取2018年1月1日至2020年12月31日在昆明市出生的15533例(男7994例,女7539例)婴幼儿,年龄5(4,9)d,采用荧光定量法、多色熔解曲线分析法(MMCA)和Sanger测序... 详细信息

目的分析昆明地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的基因突变特点。方法选取2018年1月1日至2020年12月31日在昆明市出生的15533例(男7994例,女7539例)婴幼儿,年龄5(4,9)d,采用荧光定量法、多色熔解曲线分析法(MMCA)和Sanger测序对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性和基因突变类型进行检测。采用微滴式数字PCR技术(ddPCR)对一例新发变异家系进行定量分析,确定家系成员体细胞突变嵌合比例,同时对新发变异进行蛋白结构模型分析和致病性预测。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析,不同性别间G6PD酶活性和基因突变阳性检出率采用χ^(2)检验,G6PD基因突变组间酶活性的比较采用单因素方差分析。结果15533例婴幼儿中G6PD酶活性检出阳性143例(男129例,女14例),检出率为0.92%(143/15533),男女检出率差异具有统计学意义(χ^(2)=96.76,P法检出77例(男72例,女5例),12份阴性样本进一步行Sanger测序,检出突变6份,均为男性。83例基因突变者中半合子突变78例,纯合突变1例,杂合突变4例。共检出12种突变类型,以G6PD c.487G>A、c.1024C>T、c.1388G>A和c.1376G>T 4种突变类型最为常见,占全部突变类型的74.70%(62/83)。c.1376G>T的平均酶活性最低,与另外3种突变的平均酶活性相比,差异均有统计学意义(P均C新发变异男性患儿,预测为致病性变异。ddPCR证明患儿母亲为c.242G>C变异嵌合体,嵌合比例为6.66%。结论昆明地区G6PD缺乏症基因突变以c.487G>A为主,检出一例G6PD c.242G>C新发变异。ddPCR技术可辅助用于突变嵌合体比例检测。

关键词：葡糖磷酸脱氢酶缺乏葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 G6PD活性荧光定量法多色熔解曲线分析微滴式数字PCR 基因突变

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痕量DNA荧光检测方法建立

中国公共卫生 2010年第3期26卷 340-341页

作者：邵强皮川真于翔原国强河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 华兰生物工程股份有限公司

灵敏、准确的DNA定量方法在生物学研究及应用领域中发挥着重要的作用,尤其对痕量DNA定量时.根据2005版检测外源DNA含量采用的是Southern blotting杂交法~([1]),此法可以检出pg水平的DNA~([2]),但其是半定量的方法.荧光定量法是一种灵敏... 详细信息

灵敏、准确的DNA定量方法在生物学研究及应用领域中发挥着重要的作用,尤其对痕量DNA定量时.根据2005版检测外源DNA含量采用的是Southern blotting杂交法~([1]),此法可以检出pg水平的DNA~([2]),但其是半定量的方法.荧光定量法是一种灵敏的DNA定量方法,将荧光染料与DNA结合,利用荧光分光光度计采集结合后增强的荧光信号,通过DNA标准样品计算得出样品DNA的浓度.本研究基于SYBR Green I荧光发光原理,通过对DNA抽提方法的改进来提高抽提制品时痕量DNA回收率,以建立一种痕量DNA检测方法.

关键词：荧光定量法 DNA 检测

荧光功能化的杂臂星形聚合物的合成和性能研究

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荧光功能化的杂臂星形聚合物的合成和性能研究

作者：吴博宇北京化工大学

学位级别：硕士

可逆加成断裂链转移(RAFT)聚合具备适用单体范围广、反应条件易实现等优点,被广泛应用于制备分子量可控、分子量分布窄、具有复杂拓扑结构的功能性聚合物,如嵌段共聚物及星形聚合物等。荧光染料在生物成像、荧光探针等领域有极大应用价... 详细信息

可逆加成断裂链转移(RAFT)聚合具备适用单体范围广、反应条件易实现等优点,被广泛应用于制备分子量可控、分子量分布窄、具有复杂拓扑结构的功能性聚合物,如嵌段共聚物及星形聚合物等。荧光染料在生物成像、荧光探针等领域有极大应用价值。本课题中围绕这两点,通过不同方法先后制备了丹磺酰氯、罗丹明B、蒽、香豆素、硼氟荧和双吲哚马来酰亚胺等共计七种荧光功能化RAFT试剂,以及香豆素和双吲哚马来酰亚胺两种荧光功能化单体,所有中间产物及最终产物的结构和纯度通过核磁共振氢谱、质谱等表征手段确定。我们用上述荧光功能性RAFT试剂制备了一系列荧光功能化线形聚合物,证明了荧光基团修饰的RAFT试剂对单体聚合及扩链依然有良好的控制能力,同时实验结果表明聚合后荧光基团在聚合物中仍有可观的保留程度。在荧光性质的探究中,我们发现荧光标记聚合物可以像小分子染料一样,在一定的浓度范围内荧光强度随浓度线形增长,得到线形拟合常数极高的聚合物荧光校正曲线。这一发现可以用于推算未知分子量荧光标记聚合物的分子量,或未知浓度荧光标记聚合物的浓度等信息。最后我们采用“先臂后核”法,通过改变臂的投料比制备了一系列带有不同荧光基团的杂臂星形聚合物,并通过荧光定量法对其平均臂含量进行了分析,这为表征“先臂后核”法制备的杂臂星形聚合物中不同臂的平均含量提供了新思路。

关键词：可逆加成断裂链转移(RAFT)聚合荧光标记RAFT试剂荧光标记单体杂臂星形聚合物荧光定量法

乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV(DNA)的检测结果分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第12期 316-317页

作者：任佳三六三医院四川成都610000

本文主要对乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV DNA的检测结果进行了探讨。方法:样本数据选取了在我院门诊与住院部接受诊治的患者,从中抽取了17140例,然后抽取这些患者的血清进行本次研究实验检测;之后对相关测定的结果进行了调查评估... 详细信息

本文主要对乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV DNA的检测结果进行了探讨。方法:样本数据选取了在我院门诊与住院部接受诊治的患者,从中抽取了17140例,然后抽取这些患者的血清进行本次研究实验检测;之后对相关测定的结果进行了调查评估。结果:HBsAg+、HBeAg+、抗-HBc+阳性组的HBV Pre-S1 检测阳性概率为200(85.11%),HBV DNA检测阳性概率为220(93.62%),而HBsAg+、抗-HBe+、抗-HBc+组的HBV Pre-S1 检测阳性概率为60(6.40%),HBV DNA检测阳性概率为380(40.55%);HBsAg+、抗-HBe+组的HBV Pre-S1 检测阳性率为15(32.61%),HBV DNA检测阳性率为20(43.48%);HBsAg+、抗-HBc+组的HBV Pre-S1 检测阳性率为90(30.51%),HBV DNA检测阳性率为150(50.85%);HBsAg+、HBeAg-的HBV Pre-S1 检测阳性率为450(35.24%),HBV DNA检测阳性率为560(43.85%),证实HBsAg阳性者 Pre-S1与HBV DNA的阳性率高于HBsAg阴性者。结论:通过研究得出,乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV DNA在不同组别中的阳性检出概率比较一致,数据无明显差异,同时HBsAg阳性的患者体内乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV DNA的阳性率显著比HBsAg阴性患者要高得多。所以,乙型肝炎病毒标志物前S1抗原与HBV DNA的检测值得临床借鉴与推行。

关键词：乙型肝炎病毒标志物前S1抗原 HBV DNA 荧光定量法检测结果分析