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茶树花衍生纳米囊泡在乳腺癌治疗中的研究

茶树花衍生纳米囊泡在乳腺癌治疗中的研究

作者：陈秋冰西南大学

学位级别：硕士

据流行病学统计结果显示,女性癌症人群中乳腺癌患病率高居首位且逐年上升,已严重威胁到女性的健康。目前,化疗是乳腺癌临床治疗的主要手段,但是临床上常用的化疗药物（例如紫杉醇）无法彻底清除乳腺肿瘤细胞,同时伴随着严重的毒副作用... 详细信息

据流行病学统计结果显示,女性癌症人群中乳腺癌患病率高居首位且逐年上升,已严重威胁到女性的健康。目前,化疗是乳腺癌临床治疗的主要手段,但是临床上常用的化疗药物（例如紫杉醇）无法彻底清除乳腺肿瘤细胞,同时伴随着严重的毒副作用。近年来,随着纳米技术在生物医药领域的发展,许多纳米药物已被用于乳腺癌的临床治疗中。其中脂质体作为一种具有良好生物安全性、高载药量等优势的药物载体,成为最早被用于临床的纳米药物载体之一。然而,脂质体纳米药物仍面临着合成规模有限、无法避免有毒溶剂使用等问题,难以大批量生产。近年来,人们发现植物中含有大量的天然脂质纳米囊泡,不仅生物安全性好,同时其内部含有的天然有机小分子可有效治疗炎症、肿瘤等疾病。由于该纳米囊泡来源广泛、成本低廉且疗效显著,因此具有非常好的临床应用前景。鉴于此,本论文以茶树花为原料,通过差速离心法从中分离、纯化获得大量的脂质纳米囊泡（TFNPs）,通过检测发现该囊泡中富含多种儿茶素和黄酮类活性物质,随后通过一系列体内外实验证明其具有良好的抗肿瘤活性和生物安全性。本论文的主要研究内容和研究结论分为以下四部分:第一部分,TFNPs的体外形态学表征。通过使用动态光散射技术分析TFNPs的粒径和表面电位。使用透射电镜观察TFNPs的形貌。结果:TFNPs形状为球形,粒径约为131.6 nm,表面电位为-7.94 mV,且在胃肠道模拟液和体液模拟液中均有着较好的稳定性。第二部分,TFNPs体外抗肿瘤效果评价。使用MTT检测法检测TFNPs对多种肿瘤细胞（MCF-7、4T1、A549和Hela）增殖的抑制作用。使用Annexin V-FITC/PI染色法检测TFNPs诱导细胞凋亡能力。通过PI染色法检测肿瘤细胞的细胞周期状况。通过使用细胞划痕和transwell实验检测TFNPs抑制肿瘤细胞浸润和迁移的能力。使用流式细胞仪和共聚焦显微镜分别定量和定性分析TFNPs处理后肿瘤细胞内活性氧簇和活性氮簇的含量变化。最后,使用DiO荧光标记TFNPs,检测TFNPs被肿瘤细胞吞噬的能力。研究发现TFNPs表现出对MCF-7细胞最大的增殖抑制能力,72 h时IC50值达0.1μg/mL。TFNPs可显著诱导两种乳腺癌细胞发生凋亡,线粒体膜电位降低,且细胞内cleaved-caspase 3表达量显著增加,而Bcl-2表达量显著降低。TFNPs可将MCF-7细胞阻滞在G2/M期,而将4T1细胞阻滞在S期,进而抑制细胞的增殖。TFNPs可显著抑制MCF-7和4T1的浸润和迁移。此外,TFNPs可有效地提高两种结肠肿瘤细胞胞内活性氧簇和活性氮簇的表达。细胞吞噬实验显示,TFNPs可显著地被细胞吞噬,且广泛分布在细胞质中。第三部分,TFNPs体内抗肿瘤效果评价。采用MCF-7细胞和4T1细胞分别构建皮下乳腺癌模型和乳腺癌肺转移模型,并选用静脉注射和口服两种给药方式。皮下乳腺癌肿瘤实验中,通过分析小鼠体重、肿瘤体积变化、肿瘤重量、组织染色等方法综合分析TFNPs抑制皮下乳腺癌增殖的能力。乳腺癌肺转移瘤实验中,通过分析小鼠体重、肺转移瘤节数及组织染色等方法综合分析TFNPs抑制乳腺癌肺转移能力。结果显示,皮下乳腺癌肿瘤实验中,静脉注射和口服高剂量的TFNPs均可以有效抑制肿瘤的增长,抑制率分别达75.8%和65.1%,表现出较好的治疗效果。在乳腺癌肺转移实验中,同样地静脉注射和口服高剂量的TFNPs均可以有效抑制乳腺癌细胞在肺部组织的转移,进而可以有效地延长患病小鼠的生存时间,且两组治疗效果无显著性差异。第四部分,TFNPs体内外安全性评价。首先通过体外溶血实验证明TFNPs不会导致严重的溶血现象。然后将TFNPs通过静脉注射和口服分别多次给予健康小鼠,通过从免疫因子、补体、肝肾毒性、组织染色等方面综合评价TFNPs的体内安全性。结果:静脉注射TFNPs可引起血浆中补体C3、谷丙转氨酶表达量异常增大,通过分析五脏切片,推测静脉注射TFNPs会对肝脏造成较大毒副作用。而口服TFNPs组小鼠各项指标均正常,与正常组小鼠无显著性差异。综上所述,本项目不仅为茶树花的实际应用开辟了一条新道路,还为乳腺癌的临床治疗开启了一个新的研究思路。总之,该项目的开展有着很大的实用价值和临床转化意义。

关键词：茶树花脂质纳米囊泡乳腺癌口服静脉注射

茶树花皂苷对人卵巢癌细胞及其干细胞的抑制与机理

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茶树花皂苷对人卵巢癌细胞及其干细胞的抑制与机理

作者：陈莲芙浙江大学

学位级别：硕士

我国茶树花资源丰富,但利用率低。皂苷是茶树花中的重要功能成分,近年来,茶树花皂苷的多种生物活性逐渐受到关注,但关于抗肿瘤效果的研究较少。卵巢癌是全球范围内致死率最高的妇科恶性肿瘤,也是女性癌症致死的第五大原因。已有研究报... 详细信息

我国茶树花资源丰富,但利用率低。皂苷是茶树花中的重要功能成分,近年来,茶树花皂苷的多种生物活性逐渐受到关注,但关于抗肿瘤效果的研究较少。卵巢癌是全球范围内致死率最高的妇科恶性肿瘤,也是女性癌症致死的第五大原因。已有研究报道了不同植物来源的多种皂苷物质对于卵巢癌具有较好的抑制作用。本文研究了茶树花皂苷对卵巢癌及其干细胞的作用与机理,主要研究结果如下:1、采用热水浸提、大孔树脂纯化和半制备型高效液相色谱分离的方法,结合UPLC-Q-TOF/MS/MS检测分析,从白叶1号茶树花中提取得到以Floratheasaponin A和Floratheasaponin D为主成分的茶树花皂苷复合物BTFS 3。研究发现BTFS 3对人卵巢癌细胞A2780/CP70体外增殖具有显著的抑制作用。细胞活力检测、细胞克隆形成实验与Western blot分析结果表明,BTFS 3能选择性地抑制A2780/CP70细胞活力,减少细胞克隆形成,并降低增殖细胞核抗原PNCA的蛋白表达量。2、BTFS 3可诱导A2780/CP70细胞发生S期阻滞。通过流式细胞术、活性氧ROS检测与Western blot分析,发现BTFS 3可上调p21和Cyclin E1蛋白,下调CyclinA2、CDK2、Cdc25A蛋白,抑制Cyclin E1/CDK2和Cyclin A2/CDK2复合体形成,从而诱导细胞发生S期阻滞。此外,BTFS 3还可促进ROS生成,诱导DNA损伤,通过ATM-Chk2-Cdc25A-CDK2信号通路参与S期阻滞。3、BTFS 3可通过激活死亡受体途径和线粒体途径诱导A2780/CP70细胞凋亡。Hoechst 33342染色法、线粒体膜电位测定、流式细胞术、Caspase酶活力检测与Western blot分析结果表明,BTFS 3能够上调死亡受体相关蛋白Fas、DR5和FADD表达水平,提高Caspase-8酶活力,激活细胞凋亡的死亡受体途径;也可以增加Bcl-2家族促凋亡/抗凋亡蛋白比值,提高Caspase-9酶活力,激活细胞凋亡的线粒体途径。同时,BTFS 3诱导细胞凋亡的作用与AKT-MDM2-p53信号通路相关。4、BTFS 3对卵巢癌细胞A2780/CP70的干性细胞(Ovarian cancer stem like cells,OCSLCs)具有抑制增殖生长与减弱干性特征的作用,该作用同G0/G1期阻滞和Wnt/β-catenin信号通路抑制相关。采用无血清悬浮培养法富集获得到OCSLCs,通过MTS实验、细胞克隆和肿瘤球形成实验、流式细胞术检测干细胞标记物ALDH活性及Western blot分析,结果发现BTFS 3能降低OCSLCs的细胞活力、抑制细胞克隆与肿瘤球形成能力、减少ALDH细胞比例,下调干性相关蛋白Oct-4和Nanog表达量,并诱导细胞发生G0/G1期阻滞。此外,BTFS 3可上调p-β-catenin蛋白表达,下调p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin和c-Myc蛋白表达,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活从而影响OCSLCs。

关键词：茶树花 BTFS 3皂苷人卵巢癌细胞细胞凋亡细胞周期阻滞肿瘤干细胞 Wnt/β-catenin信号通路

干燥方式对不同品种茶树花主要生化成分的影响

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食品工业科技 2017年第7期38卷 356-360,364页

作者：邓宇杰罗理勇田小军王杰曾亮西南大学食品科学学院重庆400715 西南大学茶叶研究所重庆400715

以重庆地区常见的六个品种的茶树鲜花为样品,采用热风干燥和真空冷冻干燥两种干燥方式处理,比较干燥后各个品种茶树花生化成分含量的差异。结果显示:四川群体品种的茶树花经热风干燥和真空冷冻干燥处理后,在总酚、总儿茶素等关键活性物... 详细信息

以重庆地区常见的六个品种的茶树鲜花为样品,采用热风干燥和真空冷冻干燥两种干燥方式处理,比较干燥后各个品种茶树花生化成分含量的差异。结果显示:四川群体品种的茶树花经热风干燥和真空冷冻干燥处理后,在总酚、总儿茶素等关键活性物质的含量上均显著高于其他品种;且其经热风干燥后的含量显著高于冷冻干燥,分别为(108.33±5.97)mg/g和(39.84±2.79)mg/g,具有较高的抗氧化、抗增殖等保健潜力。热风干燥的福鼎大白的咖啡碱含量较低,为(2.43±0.17)mg/g,同时酚类物质含量较高,适合用来开发低咖啡碱产品。干燥方式对茶树花生化成分含量影响显著,经热风干燥的茶树花的总酚和总儿茶素含量更高,经真空冷冻干燥的茶树花则可以保留更多的黄酮和咖啡碱。综上所述,四川群体品种与福鼎大白的开发潜力更大,而最佳的干燥方式则要根据对目标生化成分含量的具体要求来确定。

关键词：茶树花生化成分热风干燥真空冷冻干燥

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茶树花饮料制备工艺的初步研究

茶树花饮料制备工艺的初步研究

作者：晏秀梅四川农业大学

学位级别：硕士

茶树花富含茶多糖、茶多酚、茶皂素、超氧化物歧化酶等生物活性成分,具有降血糖、抑菌、抗氧化等多种保健功效,此外,茶树花中农残含量较低,与茶叶相比,茶树花更加卫生、安全。以茶树花为原料开发研制的茶树花饮料既具有茶树花的芬芳,又... 详细信息

茶树花富含茶多糖、茶多酚、茶皂素、超氧化物歧化酶等生物活性成分,具有降血糖、抑菌、抗氧化等多种保健功效,此外,茶树花中农残含量较低,与茶叶相比,茶树花更加卫生、安全。以茶树花为原料开发研制的茶树花饮料既具有茶树花的芬芳,又具有茶叶的风味和保健功效,还能丰富我国饮料市场。本文以茶树花为原料,将茶多酚、氨基酸、咖啡碱和水浸出物等茶树花主要品质成分的浸出量及感官审评作为评价指标,对其关键加工工艺浸提技术进行了探讨,并对茶树花饮料的最佳调配方案及贮藏稳定性进行研究,主要得到以下研究结果：（1）茶树花浸提的最佳工艺是微波辅助浸提。通过单因素试验和正交优化试验发现,茶树花超声波浸提的最优方案为：超声频率为80kHz,料液比为1：60,温度为70℃,浸提时间为15min;微波辅助浸提的最优方案为：微波功率为480W,微波处理3min,料液比为1：70,温度为70℃,浸提10min。茶树花超声波浸提、微波辅助浸提与常规水浴浸提的对比试验结果表明,前两种浸提方法中茶树花各组分浸出量均极显著高于常规水浴浸提,表明超声波和微波处理茶树花时,茶树花中主要品质成分的浸出量大,感官品质好。此外,微波辅助浸提的茶多酚和水浸出物浸出量可达78.87±1.03mg/g, 448.28±1.52mg/g,均极显著高于超声波浸提,表明微波辅助浸提茶树花优于超声波浸提。以上结果表明,茶树花饮料的最佳浸提方法为微波辅助浸提法,其相关参数为：微波功率为480W,微波处理时间3mm,再以1：70料液比.70℃水温条件下浸提1 0min。（2）根据单因素试验结果,采用Box-Benhnken设计方案进行茶树花饮料调配方案的响应面试验,试验数据进行多元回归拟合后,得到感官综合评分（Y）与茶树花汁添加量（A）、三氯蔗糖添加量（B）、维生素C添加量（C）的二次多项回归方程：Y=82.56667+4.0875A+1.1125B-0.65C+1.625AB-0.3AC+5.15BC-3.42083A-1.5208B-9.19583C通过对回归方程式解析,计算出茶树花饮料的最优调配方案为：茶树花汁添加量为241mL/L,三氯蔗糖添加量为40mg/L,维生素C添加量为223mg/L,此条件下,茶树花饮料的感官评分值最高为84分。（3）采用本实验筛选出的最佳浸提工艺及最优调配方案制备的茶树花饮料,成品风味柔和、无异味、酸甜可口,具茶花香且香气柔和协调,汤色嫩黄,鲜亮透明,饮料均匀一致,无分层现象;pH值为6.25,透光率≥96.5%,茶多酚≥140mg/100mL,氨基酸≥2.08mg/100mL,咖啡碱≥34.5mg/100mL,高于液体饮料国家标准（GB/T21733-2008）规定的含量要求。（4）对所制成品茶树花饮料在贮藏过程中的稳定性进行了研究,结果表明,分别贮藏在冷藏5℃、室温25℃、高温37℃条件下的茶树花饮料,随着储藏时间的延长,茶树花饮料的色泽由最初的嫩黄色逐渐转变为深黄色,香气变淡,并出现少量沉淀,且饮料中的品质成分茶多酚、氨基酸、咖啡碱的含量及透光率、pH值均有不同程度的变化,其中在5℃冷藏条件下贮藏的茶树花饮料的各项品质指标变化最小,表明在5℃冷藏条件下贮藏的茶树花饮料性质较为稳定,因此建议采用低温贮藏茶树花饮料,利于保持茶树花饮料原有的品质。

关键词：茶树花饮料浸提调配贮藏

茶树花提取物的抗氧化活性及其对HepG2细胞的抗增殖活性

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茶树花提取物的抗氧化活性及其对HepG2细胞的抗增殖活性

作者：邓宇杰西南大学

学位级别：硕士

科技的进步促进了人类生活品质的提高和社会的发展,但同时也造成了空气污染、农药残留、重金属、辐射等副作用,给人们带来了额外的机体过氧化负担,激发活性氧自由基的生成,而活性氧自由基是一种因辐射或者机体自然代谢的副产物的影响而... 详细信息

科技的进步促进了人类生活品质的提高和社会的发展,但同时也造成了空气污染、农药残留、重金属、辐射等副作用,给人们带来了额外的机体过氧化负担,激发活性氧自由基的生成,而活性氧自由基是一种因辐射或者机体自然代谢的副产物的影响而产生的诱变剂,包括O2、H2O2、·OH等,一旦在体内长期积累,就会对DNA、蛋白质和脂质造成氧化性损伤,这些损伤是机体衰老和老年退行性疾病,如心脑血管疾病、免疫系统衰退、脑功能障碍等的主要原因。尤其是DNA的氧化损伤会导致DNA畸变和原癌基因、肿瘤抑制基因突变,诱变出细胞的无限增殖能力,导致癌症和肿瘤。近年来,在“药食同源”这一新概念的倡导下,通过摄入天然植物功能食品来清除体内多余的自由基,防治慢性疾病,延缓衰老已成为重要的保健手段。关于各种功能食品的研究不断深入,不少天然植物,如茶叶,已经被证实具有抗氧化、抗增殖、抗辐射等保健效果和对疾病的防治能力。茶树花与茶叶成分类似,蕴含有大量的活性物质,且产量巨大,理论上也有强力的抗氧化和抗增殖等效果,但长期被视为茶叶外无用的副产品,其相关的功能研究也很少,造成了资源的浪费。因此,本研究着力于探明不同茶树花品种、不同部位(全花、花瓣和花粉)的抗氧化、抗增殖能力以及他们之间的相关性。主要研究内容和成果如下:1.采用ORAC法、PSC法和CAA法对六个茶树花全花提取物进行抗氧化活性评价,结果表明:四川群体品种的ORAC、PSC、CAA值(未经PBS清洗)均是最高,分别为3504.99±281.65μmol Trolox/g、1442.73±75.01μmol VC/g和24.01±0.20μmol Quercetin/g;四川群体品种的CAA值(经PBS清洗)与最高的福选九号无显著差异,为10.53±0.42μmol Quercetin/g。因此,在所测六个品种中,四川群体品种具有最高的体外抗氧化活性和细胞抗氧化活性,是抗氧化能力最强的茶树花品种。2.采用ORAC法、PSC法和CAA法对六个茶树花花瓣和花粉提取物进行抗氧化活性评价,结果表明:四川群体品种的花瓣和花粉有最高(或与最高的值无显著差异)的ORAC值(2947.48±165.99μmol Trolox/g和4575.16±170.74μmol Trolox/g)、PSC值(632.09±73.91μmol VC/g和1060.50±82.28μmol VC/g)、经PBS清洗的CAA值(11.19±0.37μmol Quercetin/g和11.73±0.56μmol Quercetin/g)和未经PBS清洗的CAA值(24.29±1.39μmol Quercetin/g和25.71±0.26μmol/g)。因此,在所测六个品种中,四川群体品种茶树花花瓣和花粉具有综合最高的体外抗氧化活性和细胞抗氧化活性,是抗氧化能力最强的品种。3.将各全花、花瓣和花粉提取物的ORAC、PSC和CAA值与其对应的总酚、咖啡碱、儿茶素等含量进行相关性分析。结果表明:总酚含量、总儿茶素含量与ORAC、PSC和CAA值之间存在显著或极显著正相关;儿茶素单体中的EGCG与各抗氧化活性值均有极显著(p茶树花样品的抗氧化能力。4.用六个品种茶树花的全花、花瓣和花粉提取物对HepG2人肝癌细胞进行抗增殖活性的检测,并计算其增殖率和半数效应浓度(EC50)。结果显示:在所有样品中,福选九号的全花和花粉有最低的EC50值,分别为55.28±17.98和63.95±9.77 mg/L,说明福选九号的全花和花粉有最强的抗增殖活性;四川群体品种的花瓣有最低的EC50值,为72.56±26.22 mg/L,所以四川群体品种的花瓣有最强的抗增殖活性。5.将全花、花瓣和花粉提取物的各个EC50值与其对应的ORAC、PSC、CAA值进行相关性分析。结果显示:样品EC50与ORAC值(R2=—0.389,p0.05)无显著相关性;与两个CAA值也均无显著(p>0.05)相关性,因此,ORAC抗氧化活性值与抗增殖活性有显著的正相关。此外,ORAC、PSC、CAA值之间均存在极显著(p茶树花的全花、花瓣和花粉提取物的生化成分及抗氧化、抗增殖活性整体进行显著性分析,结果显示:花粉和花瓣样品的总酚含量显著高于(p花样品,花粉和花瓣样品之间无显著差异;花粉样品的总儿茶素与酯型儿茶素含量最高(p花粉和花瓣样品的ORAC值显著高于(p花样品,花粉和花瓣样品之

关键词：茶树花花瓣花粉抗氧化活性抗增殖活性

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茶树花皂苷类物质分析鉴定及动态变化研究

茶树花皂苷类物质分析鉴定及动态变化研究

作者：沈娴浙江大学

学位级别：硕士

皂苷类物质是茶资源中一类重要的功能成分,受到越来越多人的关注。茶树花皂苷单体的分离、结构鉴定及功能分析,近年来逐渐成为研究的热点,目前有关浙江省茶树花中皂苷类物质的组成以及变化规律的研究较少。本文旨在建立茶树花皂苷类物质... 详细信息

皂苷类物质是茶资源中一类重要的功能成分,受到越来越多人的关注。茶树花皂苷单体的分离、结构鉴定及功能分析,近年来逐渐成为研究的热点,目前有关浙江省茶树花中皂苷类物质的组成以及变化规律的研究较少。本文旨在建立茶树花皂苷类物质的UHPLC检测分析方法,并结合UPLC-Q-TOF/MS,对皂苷类物质进行分析鉴定;研究在不同茶树花品种、花期和部位中,主要皂苷类物质的组成及变化规律。主要研究结果如下:1.建立茶树花皂苷类物质UHPLC检测分析方法:采用色谱柱Welch Ultimate LP-C18（250 mm×4.6mm,i.d.,3 μm）;流动相:A相（0.1%磷酸/水）-B相（乙腈）;采用梯度洗脱:0min:15%B;15 min:38%B;60 min:43%B;63 min:70%B;64 min:15%B;72 min:15%B;柱温:25℃;流速:1mL/min;进样量:10μL;检测波长:210nm。该检测分析方法有效分离了茶树花中21种皂苷类物质,并结合UPLC-Q-TOF/MS,根据分子碎片信息以及文献资料,对这21种皂苷类物质进行分析鉴定,推测化合物1为TheasaponinA6,化合物2为 FloraassamsaponinⅢ,化合物 3 为 Chakasaponin Ⅲ,化合物 4 为 Theasaponin A5,化合物 5为 Teaseedsaponin F,化合物 6 为 Theasaponin A2,化合物 7 为 Chakasaponin ⅣV,化合物 8 为新物质,化合物9为FloratheasaponinD,化合物10为ChakasaponinⅠ,化合物11为Floratheasaponin A,化合物 12 为 Floratheasaponin H,化合物 13 为 Foliatheasaponin Ⅰ 或 Ⅲ,化合物 14 为 Teaseedsaponin D,化合物 16 为 Chakasaponin Ⅱ,化合物 18 为 Floratheasaponin J,化合物 19 为 Floratheasaponin C,化合物 21 为 Floratheasaponin B,化合物 15、17 和 20 为Chakasaponin V 或 Floratheasaponin E 或其同分异构体。2.选用嘉茗1号、迎霜、白叶1号、龙井43和福鼎大白5个茶树花品种,研究7种主要皂苷类物质在不同品种、花期中的变化规律。嘉茗1号、龙井43和白叶1号茶树花,Floratheasaponins类皂苷含量高于Chakasaponins类皂苷的含量,迎霜和福鼎大白则相反。茶树花7种主要皂苷类物质随着茶树花的开放进程,呈现出前期积累、后期下降的趋势。3.茶树花的三个不同部位（P1:花瓣;P2:雄蕊、雌蕊及子房;P3:花托和花萼）,随花期的变化,7种主要皂苷类物质的组成和变化规律与整朵花的组成和变化规律基本一致。但在茶树花不同部位中,7种主要皂苷类物质的组成及相对含量存在差异,茶树花中各部位的皂苷类物质的含量从高到低依次为:P1＞P2＞P3,且各部位的重量百分比依次为:P2＞P1＞P3,结果显示,茶花树中皂苷类物质的组成主要存在于P1和P2这两个部位中。

关键词：皂苷质谱技术茶树花品种花期部位

茶树花多酚氧化酶的酶学特性及在茶和茶制品中应用研究

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茶树花多酚氧化酶的酶学特性及在茶和茶制品中应用研究

作者：黄潇安徽农业大学

学位级别：硕士

茶树花富含蛋白质、茶多酚、氨基酸、茶多糖、茶皂素、黄酮类、维生素、微量元素、超氧化物歧化酶（SOD）、咖啡碱等多种有益成分和活性物质,具有很大的利用价值,然而作为茶叶的副产品,人们常常将它们当作废物丢弃,造成资源浪费。近年来... 详细信息

茶树花富含蛋白质、茶多酚、氨基酸、茶多糖、茶皂素、黄酮类、维生素、微量元素、超氧化物歧化酶（SOD）、咖啡碱等多种有益成分和活性物质,具有很大的利用价值,然而作为茶叶的副产品,人们常常将它们当作废物丢弃,造成资源浪费。近年来,多酚氧化酶（PPO）一直是人们研究的热点,关于茶叶、各类水果和微生物中的PPO研究报道很多,而关于茶树花PPO的研究却基本空白。因此,对茶树花的PPO进行研究应用,不仅合理利用茶树花资源,避免浪费,还具有一定的创新意义,也为以后茶树花的研究开辟了新的途径。本文对茶树花的PPO酶学特性进行了研究,并将其应用到茶叶及茶制品中,主要研究结果如下:（1）选取农抗早、舒茶早两个品种的茶树花作为酶源材料,并以酶源材料梨、农抗早、舒茶早茶叶作为对照,采用丙酮粉法提取粗酶液,以邻苯二酚为底物,研究不同p H、温度、底物浓度对PPO酶活性的影响,确定PPO最佳反应条件。结果表明,梨、茶树花、茶叶PPO的最适p H分别约为5.6,5.2,5.6,最适温度均为37℃,最适底物浓度均为1%。此外,在同一反应条件下,PPO酶活性大小顺序为梨＞茶树花＞茶叶。（2）在上述最佳反应条件下,利用PPO催化茶多酚制备茶黄素,酶添加量分别为2g、3g、4g（以梨、茶树花、茶叶鲜重计）。结果表明,当酶添加量为2g时,农抗早、舒茶早茶树花催化处理的样品中茶黄素含量为7.23%、6.94%,而对照样梨、农抗早、舒茶早茶叶催化处理的样品,茶黄素含量分别为2.01%、5.21%、4.98%;当酶添加量为3g时,农抗早、舒茶早茶树花催化处理的样品中茶黄素含量为8.10%、8.18%,而对照样梨、农抗早、舒茶早茶叶催化处理的样品,茶黄素含量分别为2.98%、6.15%、6.18%;当酶添加量为4g时,农抗早、舒茶早茶树花催化处理的样品中茶黄素含量为9.15%、9.35%,而对照样梨、农抗早、舒茶早茶叶催化处理的样品,茶黄素含量分别为4.11%、7.20%、7.11%,这也进一步验证了茶树花作为酶源材料制取茶黄素的可行性。（3）以低档绿茶为原料,利用PPO催化制备红碎茶,对样品进行感官审评,测定其茶黄素含量,比较三类酶源的酶促氧化效果,并考察茶树花PPO酶添加量（以茶树花鲜重计）对红碎茶茶黄素含量的影响。结果表明,当酶添加量为50g时,农抗早、舒茶早茶树花催化制备的红碎茶,茶黄素含量分别达到了1.03%、1.02%,而对照样梨、农抗早、舒茶早茶叶催化制备的红碎茶茶黄素含量分别为0.78%、0.87%、0.92%;当酶添加量为75g时,农抗早、舒茶早茶树花催化制备的红碎茶茶黄素含量最高,分别为1.22%、1.16%,此时制备的红碎茶感官评分最高,且颗粒紧结、重实、匀净、色润,香高持久,带有茶树花的特有香气,滋味浓厚,具有收敛性,汤色红亮,达到中等CTC红碎茶品质水平。（4）选取农抗早、舒茶早茶树花作为酶源材料,催化速溶绿茶制备速溶红茶,在单因素试验的基础上,以底物浓度、酶添加量、反应时间为考察因素,以茶黄素含量作为指标,采用中心组合试验优化速溶红茶的加工工艺。结果表明,经过农抗早、舒茶早茶树花催化制备的速溶红茶的最优工艺参数均为:底物浓度1%,酶添加量2g,反应时间40min,此时,其茶黄素含量分别为6.41%、5.42%,比市售速溶红茶茶黄素含量高了近5倍。

关键词：茶树花多酚氧化酶酶促氧化茶黄素

茶树花生长过程中内含成分变化及茶树花茯砖茶开发研究

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茶树花生长过程中内含成分变化及茶树花茯砖茶开发研究

作者：刘丹湖南农业大学

学位级别：硕士

本试验以湘波绿2号、槠叶齐和白毫早3个品种不同花期茶树花为材料,采用气相色谱-质谱法、分光光度法、高效液相色谱法及顶空固相微萃取法,检测了茶树花水浸出物、可溶性糖、茶多酚、氨基酸、黄酮、维生素B和香气等含量,研究了茶树花生... 详细信息

本试验以湘波绿2号、槠叶齐和白毫早3个品种不同花期茶树花为材料,采用气相色谱-质谱法、分光光度法、高效液相色谱法及顶空固相微萃取法,检测了茶树花水浸出物、可溶性糖、茶多酚、氨基酸、黄酮、维生素B和香气等含量,研究了茶树花生长过程中内含成分的变化规律,同时分析了不同花期间和不同品种间茶树花内含成分差异情况,并对茶树花茯砖茶进行了开发研究,主要结果如下:(1)不同花期间,水浸出物含量以全开期最高,破绽期最低,全开期显著高于露白期而极显著高于破绽期;可溶性糖含量以全开期最高,露白期最低,全开期显著高于初开期而极显著高于破绽期和露白期;茶多酚含量以露白期最高,全开期最低,全开期极显著低于露白期和破绽期;氨基酸含量以初开期最高,全开期最低,初开期显著高于全开期;黄酮含量以破绽期最高,全开期最低,破绽期显著高于其他花期;维生素B含量各花期间均无显著差异。不同品种间,初开期氨基酸含量、全开期黄酮含量和破绽期维生素B含量,3个品种间差异显著;破绽期和初开期黄酮含量,3个品种间差异极显著;水浸出物含量,湘波绿2号持续上升,槠叶齐和白毫早先降后升;可溶性糖含量,槠叶齐先降后升,湘波绿2号和白毫早持续上升;茶多酚含量,槠叶齐先升后降,湘波绿2号和白毫早持续下降;黄酮含量,3个品种均先上升后下降;维生素B含量,槠叶齐先降后升,湘波绿2号和白毫早先升后降。(2)茶树花主要香气化合物有清甜型和青气型两类,清甜型有苯乙酮、芳樟醇和苯乙醇等,青气型有青叶醇、2-庚醇和2-戊醇等,其中苯乙酮是主要赋香成分。随着茶树花的开放,清甜型主要香气化合物含量上升,青气型下降,而随着茶树花的衰老,清甜型下降,青气型上升。整个生长过程中,酮类先上升后下降,以全开期和初开期极显著高于其他花期;醇类下降,烯烃类先上升后下降,均以前3个花期极显著高于后3个花期;醛类先下降后上升,以初开期和全开期极显著低于花蕾期和初衰期;酯类和烷烃类上升,均以初衰期极显著高于其他花期;其他类先下降后上升,以初开期和全开期极显著低于花蕾期和初衰期。茶树花的香型随其生长过程出现阶段性变化,不同品种同一生长程度香型类似,可混合采制。(3)在不同茶树花配比研究中,以茶树花和黑毛茶的预实验为基础,茶树花应控制在一定配比内。经感官审评,茶树花配比12%的产品样品发花茂盛、汤色香气、滋味等品质最优。茶树花茯砖茶可能因茶树花中可溶性糖含量高可改善茯砖茶品质。在3个茶树花茯砖茶样品中,筛选较优配比为12%茶树花,88%的黑毛茶。

关键词：茶树花生长过程内含成分茶树花茯砖茶

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果胶酶-微波法提取茶树花多糖的工艺

江苏农业科学 2017年第2期45卷 166-168页

作者：韩艳丽凡军民李静贾君江苏农林职业技术学院江苏句容212400

以茶树花为材料,采用果胶酶-微波法提取茶树花多糖,研究提取茶树花多糖的工艺。结果表明:通过单因素和正交试验,在加酶量1.0%、酶解pH值5.5、酶解时间2.5 h、酶解温度50℃的条件下,茶树花多糖提取率最高;茶树花经酶解后,在700 W微波强度... 详细信息

以茶树花为材料,采用果胶酶-微波法提取茶树花多糖,研究提取茶树花多糖的工艺。结果表明:通过单因素和正交试验,在加酶量1.0%、酶解pH值5.5、酶解时间2.5 h、酶解温度50℃的条件下,茶树花多糖提取率最高;茶树花经酶解后,在700 W微波强度下,微波时间60 s,茶树花多糖提取率达4.82%。由结果可知,果胶酶-微波法明显提高了茶树花多糖的提取率。

关键词：茶树花果胶酶微波茶多糖