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粉防己碱对白念珠菌生物膜及芽管形成的影响

中国真菌学杂志 2015年第5期10卷 276-278页

作者：郭兰芳刘大标周梦婕华腾江镇江市第四人民医院检验科镇江212001

目的研究粉防己碱(Tet)对白念珠菌(Candida albicans)生物膜及芽管形成的影响。方法采用XTT还原比色法观察Tet对C.albicans成膜的影响;将0.01、0.1、1μmol/L的Tet分别与C.albicans悬液共同孵育,显微镜下计数芽管形成率。分别设阳性对照... 详细信息

目的研究粉防己碱(Tet)对白念珠菌(Candida albicans)生物膜及芽管形成的影响。方法采用XTT还原比色法观察Tet对C.albicans成膜的影响;将0.01、0.1、1μmol/L的Tet分别与C.albicans悬液共同孵育,显微镜下计数芽管形成率。分别设阳性对照组(两性霉素B与白念珠菌悬液共孵育)和阴性对照组(白念珠菌悬液中不加Tet),试验重复5次。结果 Tet各剂量组对C.albicans生物膜及芽管形成具有明显抑制作用(P芽管形成的抑制率最高,C.albicans生物膜及芽管形成率低于阴性对照组(P芽管形成率低于0.01及0.1μmol/L组(P0.05)。结论 Tet对体外C.albicans生物膜及芽管形成有一定的抑制作用。

关键词：粉防己碱白念珠菌芽管生物膜

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不同培养条件对白念珠菌芽管形成的影响

不同培养条件对白念珠菌芽管形成的影响

作者：刘乐兰州大学

学位级别：硕士

目的:1.在不同温度、pH值、培养基等条件影响下诱导白念珠菌芽管生成,并对出芽率进行测定,分析各种培养条件对芽管生成的影响,并试图找到一种较好的方法来诱导芽管的形成,获得较纯的芽管,为研究白念珠菌表型转换分子机制提供基础。2.通... 详细信息

目的:1.在不同温度、pH值、培养基等条件影响下诱导白念珠菌芽管生成,并对出芽率进行测定,分析各种培养条件对芽管生成的影响,并试图找到一种较好的方法来诱导芽管的形成,获得较纯的芽管,为研究白念珠菌表型转换分子机制提供基础。2.通过对不同部位来源的白念珠菌菌株在相同培养条件下芽管形成率的比较,来探讨菌株毒力的强弱是否与来源部位有关。3.通过对白念珠菌氟康唑耐药株、剂量依赖性敏感株及敏感株芽管形成率的比较,来探讨芽管形成能力不同的菌株是否对氟康唑的敏感性不同。4.通过研究氧化酶抑制剂和活性剂对白念珠菌二相性的影响,来探讨其形态学转变机制。从而为白念珠菌致病机制的研究,抗真菌药物的早期研究,临床鉴定奠定基础。5.观察地塞米松对白念珠菌生长及芽管形成的影响。方法:1.在不同温度,pH值、培养基,起始菌体浓度下对临床分离白念珠菌进行诱导培养,采用结晶紫染色法对测定出芽率。2.对临床上分离鉴定的白念菌珠菌,以标准株作参照,在相同条件下培养,采用结晶紫染色法测定出芽率,然后参照美国国家实验室标准委员会（NCCLS M-27）方案,采用微量液基法筛选出氟康唑敏感株,耐药株,剂量依赖株,最后比较观察不同类型菌株间出芽率的差异。3.将一定量的氧化酶活性剂、氧化酶抑制剂溶解于RPMI1640液体培养基中,新鲜白念珠菌菌液（1×10~5cells/ml）接种于培养基,以未添加氧化酶调节剂的培养基作为对照组分别在pH值4、7下37℃分别培养,观察菌丝相形成的情况,比较出芽率。4.在含有不同浓度地塞米松的培养基中接种白念珠菌,同一条件下培养,观察地塞米松对白念珠菌生长及芽管形成的影响。结果:1.相同培养条件下,小牛血清（FCS）比RPMI1640、DMEM培养基诱导出芽率高（P＜0.05）,而后俩者之间无显著性差异（P＞0.05）;白念珠菌起始菌体浓度为5×10~6 cfu/ml时,于FCS中振荡孵育2h,出芽率及芽管纯度最好;当菌体浓度超过5×10~6cfu/ml时,随着菌体浓度的增加,出芽率反而下降;随着孵育时间的延长,芽管形成率增高;37℃是最佳孵育温度,其它温度都会使出芽率显著降低。2.不同来源部位的白念珠菌菌株出芽率差异有统计学意义（P＜0.001）。深部感染来源菌株出芽率明显高于皮肤粘膜感染来源菌株和正常带菌者,正常带菌者与深浅部菌株比较,出芽率无明显差异（P＞0.05）。3.在同一培养时间段,氟康唑剂量依赖性敏感株和耐药株芽管形成率均高于敏感株,差异具有统计学意义。4.白念珠菌在培养基pH4的RPMI1640中培养时,以酵母相形式生长,加入一磷酸鸟苷（GMP）后,诱导菌丝生长。白念珠菌在培养基pH7的RPMI1640中培养时,以菌丝相形式生长,加入水杨基氧肟酸（SHAM）后,增强了酵母相的增值。5.地塞米松的浓度为0.05 mg/ml、0.1 mg/ml、0.2 mg/ml时,与对照组比较,白念珠菌芽管形成无明显差别,当地塞米松的浓度为0.4 mg/ml、0.8 mg/ml、1.0 mg/ml时与对照组比较,白念珠菌芽管形成率明显增高。结论:1.优化培养条件可以获得较纯的芽管,结晶紫染色法可精确定量检测芽管形成率。2.不同部位来源的菌株其毒力及致病性可能不同。3.白念珠菌菌株芽管形成率的高低与其对氟康唑的药物敏感性相关,且氟康唑剂量依赖性敏感株和耐药株芽管形成率均高于敏感株。4.氧化酶活性剂和抑制剂影响白念珠菌芽管的形成5.低浓度的地塞米松（0.05 mg/ml、0.1 mg/ml）对白念珠菌的生长及芽管的形成无明显的影响,中等浓度（0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.8 mg/ml,1.0mg/ml）促进白念珠菌芽管的生长。

关键词：白念珠菌芽管药敏实验 M27方案氧化酶调节剂地塞米松

单抗Mab03.2C1C2影响白念珠菌芽管形成及粘附作用的实验研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 901-903页

作者：唐玮王鲁唐书谦钟白玉叶庆佾第三军医大学西南医院皮肤科重庆市皮肤性病研究所重庆400038

目的　观察抗白念珠菌芽管单抗Mab0 3 .2C1C2在体外对白念珠菌感染的保护性作用。方法　将不同浓度的Mab0 3 .2C1C2分别与白念珠菌孢子悬液、白念珠菌孢子和人口腔粘膜上皮细胞混合液、白念珠菌孢子和胎儿脐静脉内皮细胞混合液共同孵育... 详细信息

目的　观察抗白念珠菌芽管单抗Mab0 3 .2C1C2在体外对白念珠菌感染的保护性作用。方法　将不同浓度的Mab0 3 .2C1C2分别与白念珠菌孢子悬液、白念珠菌孢子和人口腔粘膜上皮细胞混合液、白念珠菌孢子和胎儿脐静脉内皮细胞混合液共同孵育,观察Mab0 3 .2C1C2对白念珠菌芽管生成的抑制作用及其对白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞粘附的抑制作用。结果　Mab0 3 .2C1C2能显著降低白念珠菌芽管生成率及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与该单抗的浓度成正比。结论　Mab0 3 .2C1C2在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,通过抑制白念珠菌芽管的形成而抑制白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞的粘附,降低白念珠菌的侵袭力。

关键词：白念珠菌芽管单克隆抗体保护性

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肉苁蓉种子萌发和芽管形成的物理信号调控

肉苁蓉种子萌发和芽管形成的物理信号调控

作者：白静内蒙古农业大学

学位级别：硕士

肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）为列当科肉苁蓉属的多年生专性根寄生植物,其寄主为藜科的固沙植物梭梭。肉苁蓉种子在梭梭根系附近可萌发芽管形成吸器,通过吸器侵入寄主维管组织吸取营养来维持其自身生长。为了探讨物理信号诱... 详细信息

肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）为列当科肉苁蓉属的多年生专性根寄生植物,其寄主为藜科的固沙植物梭梭。肉苁蓉种子在梭梭根系附近可萌发芽管形成吸器,通过吸器侵入寄主维管组织吸取营养来维持其自身生长。为了探讨物理信号诱导肉苁蓉种子萌发的机制,本研究采用组织培养技术,分析了高/低变温层积处理和N+注入对肉苁蓉种子萌发的影响,调查了肉苁蓉种子萌发率、萌发时间以及芽管的形态特征。实验取得的主要结果如下: 1.肉苁蓉种子的活力指数在70%-80%。将去皮和不去皮的肉苁蓉种子接种在不同的培养基中,结果去皮的肉苁蓉种子均有萌发,而未去皮的肉苁蓉种子却不见萌发;同时,用高浓度的GA浸泡过的肉苁蓉种子也没有萌发。从而证明肉苁蓉种皮是导致休眠的原因,可能含有萌发抑制物质。 2.不同的温度和外源激素对肉苁蓉种子萌发率的提高有显著的作用。本试验对肉苁蓉种子采用50℃高温和4℃低温交替层积处理,得出:高温50℃处理1h和低温4℃层积处理1w的2次循环的变温处理对肉苁蓉种子萌发形成芽管有很好的促进作用;而且与6-BA 0.5 mg·L-1+GA 0.5 mg·L-1+IBA 2.0 mg·L-1激素搭配可以提高肉苁蓉种子的萌发率,萌发率为17.8%。 3.采用N+注入预处理肉苁蓉种子,离子束的剂量为800-1000能够诱导肉苁蓉种子萌发;在外源激素物质的诱导下萌发率最高,达到23.3%。 4.采用石蜡切片技术对肉苁蓉种子及其萌发过程芽管形态解剖结构进行观察,得出肉苁蓉种子和芽管的解剖学特征。上述结果说明温度、激素以及N+注入能够诱导肉苁蓉种子萌发,从而为阐明肉苁蓉种子休眠原因以及种子萌发机理问题提供理论依据;并对解决生产中肉苁蓉种子萌发困难和萌发率低等实际问题具有一定现实意义。

关键词：肉苁蓉萌发芽管层积处理离子注入

医用微生态制剂分离菌株对白假丝酵母菌芽管形成的抑制作用

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世界华人消化杂志 2006年第22期14卷 2237-2240页

作者：唐欢但国蓉魏泓第三军医大学基础部动物学教研室重庆市400038

目的:研究市售医用微生态制剂分离的单菌株对白假丝酵母菌芽管形成的影响．方法:分离市售益生菌产品单菌株10株,采用结晶紫芽管染色法,通过计算出芽率检测各益生菌分离菌株培养上清,活菌体和热灭活菌体对白假丝酵母菌的出芽抑制．结果:... 详细信息

目的:研究市售医用微生态制剂分离的单菌株对白假丝酵母菌芽管形成的影响．方法:分离市售益生菌产品单菌株10株,采用结晶紫芽管染色法,通过计算出芽率检测各益生菌分离菌株培养上清,活菌体和热灭活菌体对白假丝酵母菌的出芽抑制．结果:五种微生态制剂单菌的中性培养上清对白假丝酵母菌的芽管生成均具有显著的抑制作用(P芽孢杆菌的活菌可以抑制出芽:热灭活菌体无法抑制白假丝酵母菌的出芽．结论:市售医用微生态制剂具备抑制白假丝酵母菌出芽的抑菌效果．

关键词：微生态制剂白假丝酵母菌芽管

抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及靶抗原性质的初步研究

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抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及靶抗原性质的初步研究

作者：孙仁美第三军医大学

学位级别：硕士

目的:观察抗白念珠菌芽管胞壁外膜单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性,并初步应用于实验室口腔念珠菌病真菌涂片菌丝阳性标本中白念珠菌的检测,以探讨其用于临床真菌检测可行性及其意义,并用于白念珠菌与都柏林念珠菌的实验室鉴别。分析该... 详细信息

目的:观察抗白念珠菌芽管胞壁外膜单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性,并初步应用于实验室口腔念珠菌病真菌涂片菌丝阳性标本中白念珠菌的检测,以探讨其用于临床真菌检测可行性及其意义,并用于白念珠菌与都柏林念珠菌的实验室鉴别。分析该单抗靶抗原表位的性质,对其抗原性质进行分析。方法:复苏冻存的杂交瘤细胞株03.2C1-C2,传代培养20代,检测培养液中单抗滴度,观察杂交瘤细胞持续分泌抗体的稳定性;用杂交瘤技术获得小鼠腹水单抗MAb03.2C1-C2。用不同念珠菌的孢子和菌丝、其他常见酵母菌、细菌做抗原,用间接免疫荧光法(IIF)检测抗体特异性。收集临床口腔念珠菌病患者口腔真菌涂片中菌丝阳性标本,用MAb03.2C1-C2通过IIF方法检测白念珠菌。用不同的液体培养基在不同的温度条件下诱导白念珠菌和都柏林念珠菌的菌丝形成,用该单抗通过IIF试验鉴别两者。用生化试剂处理白念珠菌芽管后,观察其与单抗结合情况,通过IIF试验分析抗原表位性质。结果: 1. 125株临床分离白念珠菌芽管或菌丝100%可与MAb03.2C1-C2结合,孢子均不与单抗结合。都柏林念珠菌、类星形念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌、季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、高里念珠菌、葡萄牙念珠菌、光滑念珠菌、产膜念珠菌、软念珠菌、副秃发念珠菌、产阮念珠菌、木蓝念珠菌的孢子、菌丝表面没有可以与MAb03.2C1-C2相结合的靶抗原。新型隐球菌、无名酵母、粘红酵母、光滑球拟酵母、皮状丝孢酵母、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌表面均不存在可与该单抗相结合的靶抗原。MAb03.2C1-C2特异性好。 2.临床口腔念珠菌病患者真菌涂片中镜检菌丝阳性标本,IIF试验检测白念珠菌结果与实验室常规培养鉴定结果一致。 3.用不完全1640液37℃诱导静止态的白念珠菌和都柏林念珠菌孢子,6h后两者菌丝形成率最高。 4.复苏冻存1年、2年的杂交瘤细胞,传代培养20代后,培养液中抗体效价通

关键词： MAb03.2C1-C2 白念珠菌芽管靶抗原

抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其对血清芽管诱导率的影响

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中国皮肤性病学杂志 2005年第11期19卷 650-653页

作者：宋秋荷王鲁李忠元孙仁美钟白玉唐书谦叶庆佾第三军医大学西南医院皮肤科重庆400038 现在江西九江学院医学院江西九江332000

目的制备并鉴定抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株,观察该单抗对白念珠菌菌相转换的影响。方法白念珠菌ATCC-90028标准株带芽管孢子做抗原,运用细胞融合技术,制备抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,并鉴定。将该单... 详细信息

目的制备并鉴定抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株,观察该单抗对白念珠菌菌相转换的影响。方法白念珠菌ATCC-90028标准株带芽管孢子做抗原,运用细胞融合技术,制备抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,并鉴定。将该单抗参与白念珠菌芽管血清诱导,对比其芽管诱导率与血清芽管诱导率。结果建立1株持续分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株M cAb03.2C1-C2。其小鼠腹水单克隆抗体效价达1∶25 600;抗体重链属IgG1亚类,轻链属λ型;证实M cAb03.2C1-C2的靶位是位于白念珠菌芽管胞壁外膜上分子量为156kD的抗原成分。间接免疫荧光(IIF)可见单抗能与白念珠菌芽管特异性地结合,与白念珠菌的孢子相不发生反应。单抗能明显降低芽管诱导诱导率。结论本研究建立的M cAb03.2C1-C2对白念珠菌致病相-芽管有高度的特异性,为早期、快速地诊断系统性白念珠菌感染提供了新的前景。M cAb03.2C1-C2对菌相转换有明显的抑制作用,可能在抗白念珠菌系统性感染中起保护性作用。

关键词：白念珠菌芽管杂交瘤单克隆抗体

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吐温-80对白色念珠菌芽管形成作用的观察

国际检验医学杂志 2013年第14期34卷 1901-1903页

作者：陶永平湖北省襄阳职业技术学院医学院湖北襄阳441021

目的观察吐温-80在3种不同的白色念珠菌芽管诱导液(RPMI1640培养基、新生牛血清、含10%新生牛血清的RPMI1640培养基)中对芽管形成率的影响,为临床进行体外芽管形成试验提供一定的参考资料。方法采用诱导液振荡恒温培养法。结果 3种不同... 详细信息

目的观察吐温-80在3种不同的白色念珠菌芽管诱导液(RPMI1640培养基、新生牛血清、含10%新生牛血清的RPMI1640培养基)中对芽管形成率的影响,为临床进行体外芽管形成试验提供一定的参考资料。方法采用诱导液振荡恒温培养法。结果 3种不同的芽管诱导液分别加入10μL、100μL吐温-80中,RPMI1640培养基中芽管形成率分别为41%、71%,差异有统计学意义(χ2=18.26,P0.05),含10%新生牛血清的RPMI1640培养基中形成率分别为56%、82%,差异有统计学意义(χ2=15.80,P芽管形成率差异有统计学意义(P芽管形成率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在RPMI1640培养基、含10%新生牛血清的RPMI1640培养基中加入1%和10%的吐温-80均可提高白色念珠菌的芽管形成率,吐温-80浓度为10%时效果最为显著。

关键词：念珠菌,白色芽管吐温

抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及临床初步应用研究

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中国皮肤性病学杂志 2006年第11期20卷 658-661页

作者：孙仁美王鲁唐书谦李芹阶叶庆佾第三军医大学西南医院皮肤科重庆400038 重庆市第一人民医院重庆400011

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性及其应用于实验室检测的可行性。方法用临床分离白念珠菌、致病非白念的念珠菌的孢子、菌丝及常见的酵母菌、细菌做抗原包被,用间接免疫荧光(IIF)方法,对单抗特异性... 详细信息

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性及其应用于实验室检测的可行性。方法用临床分离白念珠菌、致病非白念的念珠菌的孢子、菌丝及常见的酵母菌、细菌做抗原包被,用间接免疫荧光(IIF)方法,对单抗特异性进行分析。取临床口腔念珠菌病患者的真菌涂片菌丝阳性的标本,用IIF方法检测。结果MAb03.2C1-C2仅与白念珠菌芽管或菌丝特异性地结合,与白念珠菌的孢子不发生结合。13种非白念的念珠菌孢子和菌丝、新型隐球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均不能与该单抗相结合。59例口腔念珠菌病真菌涂片IIF试验阳性的标本最终鉴定为白念珠菌(100%)。结论MAb03.2C1-C2对白念珠菌芽管有高度的特异性,并可用于口腔念珠菌病真菌涂片中白念珠菌的早期诊断。

关键词：白念珠菌芽管特异性单克隆抗体