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艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响

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北京中医药大学学报 2012年第6期35卷 426-429,I0004页

作者：胡海赵百孝邬继红杨陟华韩丽蔡虹朱茂祥北京中医药大学针灸推拿学院北京100029 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响... 详细信息

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响。结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性;0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12 h后可显著提高细胞存活率(P=0.005艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性。结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用;一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一;能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一。

关键词：艾烟冷凝物肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞活性细胞凋亡

艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性研究

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艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性研究

作者：蔡虹北京中医药大学

学位级别：硕士

目的：本实验将运用国内外较为公认的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383来研究外界刺激物对机体呼吸系统的影响,通过观察艾烟冷凝物（艾烟烟气生成物）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖、细胞吞噬功能以及细胞活性氧的影响,进而探讨艾烟冷凝物对体... 详细信息

目的：本实验将运用国内外较为公认的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383来研究外界刺激物对机体呼吸系统的影响,通过观察艾烟冷凝物（艾烟烟气生成物）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖、细胞吞噬功能以及细胞活性氧的影响,进而探讨艾烟冷凝物对体外培养细胞NR8383的活性,其对NR8383细胞是否具有一定的毒性作用,从而为评价艾灸的安全性提供一定的实验依据。方法：在细胞增殖实验中,将艾烟冷凝物染毒浓度分别设计为0mg/ml、0.004mg/ml0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml、0.020mg/ml,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间分别为12h、24h、36h、48h,然后采用CCK-8方法对细胞增殖情况进行检测;吞噬功能实验中,艾烟冷凝物染毒浓度设计同上,对NR8383进行细胞染毒24h后,采用流式细胞仪检测吞噬率;活性氧实验中,艾烟冷凝物浓度分别为0mg/ml、0.008mg/ml、0.016mg/ml、0.024mg/ml、0.032mg/ml、0.040mg/ml,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间为24h,采用流式细胞仪检测细胞活性氧。结果：艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞进行染毒12h后,各实验组的细胞存活率虽都高于空白对照组,但各实验组与空白对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。染毒24h、36h后,实验组浓度为0.004mg/ml、0.008mg/ml、0.012mg/ml、0.016mg/ml时,各组细胞存活率不仅高于空白对照组,且各实验组与空白对照组差异有统计学意义（P＜0.05）,实验组浓度为0.020mg/ml时,其存活率虽低于空白对照组,但与空白对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。染毒48h后,除浓度为0.008mg/ml的实验组外,其余各组细胞存活率与空白对照组差异有统计学意义（P＜0.05）。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒12h、24h、36h、48h后,NR8383细胞存活率随着艾烟冷凝物浓度的升高均呈现先增加后降低的趋势,艾烟冷凝物对NR8383细胞的作用存在着一定的浓度效应。且随着作用时间的延长,细胞存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低,其对NR8383细胞的作用存在着一定的时间效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而增强。除浓度为0.004mg/ml的实验组外,其他各组与空白对照组差异均有统计学意义（P＜0.005,校正卡方值）。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的活性氧随着艾烟冷凝物浓度的升高而降低。各实验组与空白对照组差异均有统计学意义（P＜0.001）。结论：1、艾烟冷凝物对NR8383细胞的增殖存在着一定的浓度效应和时间效应。在实验所设计的染毒时间上,NR8383细胞均随着艾烟冷凝物浓度的升高呈现出了先增加后降低的趋势,且随着染毒时间的不断延长,NR8383细胞的存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低。 2、艾烟冷凝物可以提高大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能,并呈现出一定的浓度效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而呈现出增强的趋势。 3、艾烟冷凝物可以降低大鼠肺泡巨噬细胞NR8384的ROS,并呈现出一定的浓度效应。艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24h后,NR8383细胞的ROS随着艾烟冷凝物浓度的升高而呈现出降低的趋势。

关键词：艾烟冷凝物肺泡巨噬细胞细胞增殖细胞活性氧吞噬功能

艾烟冷凝物对肺泡II型上皮细胞A549的毒性研究

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艾烟冷凝物对肺泡II型上皮细胞A549的毒性研究

作者：胡海北京中医药大学

学位级别：硕士

目的：本实验采用PM10切割头采集三年蕲艾燃烧所产生的人体可吸入的艾烟部分,制备成实验研究需要的艾烟冷凝物,观察不同浓度艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)形态、活性、凋亡以及周期的影响,从而得出艾烟冷凝物对体外培养细胞的毒... 详细信息

目的：本实验采用PM10切割头采集三年蕲艾燃烧所产生的人体可吸入的艾烟部分,制备成实验研究需要的艾烟冷凝物,观察不同浓度艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)形态、活性、凋亡以及周期的影响,从而得出艾烟冷凝物对体外培养细胞的毒性作用规律。方法：通过预实验进行了艾烟冷凝物作用于A549细胞24h、48h半数致死浓度的摸索,结果为24h：IC50：0.235mg/ml;95%置信区间：0.208-0.257;48h：IC50：0.139mg/ml;95%置信区间：0.087-0.176,为本实验的研究内容提供浓度依据;基于24h半数致死浓度为最高染毒浓度设计24h细胞形态的观察的不同浓度(0.05mg/mL0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL),应用普通显微镜、荧光显微镜分别观察细胞形态变化;以不同高浓度艾烟冷凝物(0.06mg/mL、0.09mg/mL、0.12mg/mL、0.15mg/mL、0.18mg/mL、0.21mg/mL、0.24mg/mL、0.27mg/mL、0.3mg/mL)进行细胞染毒,染毒时间分别为12h、24h、36h、48h,采用MTT方法观察艾烟冷凝物对A549细胞活力的时间浓度效应,基于前期实验,设计不同低浓度艾烟冷凝物(0.01mg/mL、0.015mg/mL、0.02mg/mL、0.025mg/mL、0.03mg/mL、0.035mg/mL、0.04mg/mL、0.045mg/mL、0.05mg/mL)染毒48h,采用MTT方法观察细胞活力变化,从而得出艾烟冷凝物对细胞是否具有增殖作用;以不同浓度艾烟冷凝物(0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL)进行细胞染毒24h,分别采用hoechest33258染色进行形态学定性观察和Annexin V-FITC/PI染色进行流式细胞仪定量检测;以不同浓度艾烟冷凝物(0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL)进行细胞染毒24h,RNase A和PI染色后通过流式细胞仪测定A549细胞周期变化。结果：两种显微镜下观察发现艾烟冷凝物在0.05mg/ml时细胞形态基本无变化,在高于0.05mg/ml时细胞形态逐渐由梭形、多角形变为圆形、细胞数量逐渐下降,具有明显的浓度依赖性。MTT法结果显示：艾烟冷凝物作用于细胞12h,结果0.06mg/ml、0.09mg/ml、0.15mg/ml、0.18mg/ml、0.24mg/ml浓度的艾烟冷凝物对细胞存活率无明显影响(p>0.05),0.12mg/ml浓度的艾烟冷凝物能够显著提高细胞存活率(p=0.005艾烟冷凝物对细胞存活率也无明显影响(p=0.985>0.05),作用于36h、48h以及其他12h、24h浓度的细胞存活率显著降低(p艾烟冷凝物作用于A549细胞48h,结果显示0.02mg/ml、0.025mg/ml浓度的艾烟冷凝物能够显著提高细胞存活率(p艾烟冷凝物可以诱导细胞发生早起凋亡,且呈现浓度依赖性,当浓度达到0.25mg/ml时细胞更多的呈现出晚期凋亡、坏死的状态;流式细胞仪进行定量检测结果显示正常细胞、凋亡细胞、死亡细胞呈现聚集性,且随着艾烟冷凝物浓度的增加聚集性增强,未能检测出细胞凋亡率。流式细胞仪测定不同浓度浓度艾烟冷凝物对细胞周期的影响,结果显示：低浓度0.05mg/ml艾烟冷凝物能够使G2/M期细胞比率显著减少(p=0.023艾烟冷凝物能够使G2/M期细胞比率显著增加(p=0.002艾烟冷凝物0.2mg/ml、0.25mg/ml能使G0/G1期细胞比率显著减少(p艾烟冷凝物对A549细胞具有一定的毒性作用;2.一定浓度的艾烟冷凝物对A549细胞具有一定的增殖作用。

关键词：艾烟冷凝物细胞形态细胞活性细胞凋亡细胞周期增殖作用毒性作用

艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响

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北京中医药大学学报（中医临床版） 2012年第6期19卷 13-15页

作者：胡海赵百孝邬继红杨陟华韩丽蔡虹朱茂祥北京中医药大学附属护国寺中医医院北京100035 北京中医药大学针灸推拿学院中国军事医学科学院

目的观察艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,刺激24h后,应用荧光显微镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来观察其对A549的细胞形态以及细胞活性的影响。结果显微镜下观察发现... 详细信息

目的观察艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,刺激24h后,应用荧光显微镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来观察其对A549的细胞形态以及细胞活性的影响。结果显微镜下观察发现艾烟冷凝物在0.05g/L时细胞形态基本无变化,在高于0.05g/L时细胞形态逐渐改变、细胞数量逐渐下降,具有明显的浓度依赖性。MTT法结果显示与对照组相比,A549的细胞活性在0.09g/L浓度时P=0.985,无统计学差异;在0.06,0.12g/L浓度时统计结果分别为P=0.036和0.013,有明显差异,但差异不大;在高于0.12g/L时,P值均小于0.01,具有极显著性差异,细胞活性呈逐渐下降趋势,具有浓度依赖性。结论在24h刺激时间内,低浓度的艾烟冷凝物有可能对A549细胞无影响,高浓度的艾烟冷凝物对细胞有一定毒性作用,这种毒性作用具有明显的浓度依赖性。

关键词：艾烟冷凝物肺泡Ⅱ型细胞细胞形态细胞活性

艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383吞噬功能和ROS的影响

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四川中医 2016年第12期34卷 42-44页

作者：蔡虹邬继红赵百孝胡海韩丽重庆市渝北区人民医院重庆401120 北京中医药大学北京100029

目的:通过艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能以及细胞活性氧的影响以探讨其对修复机体损伤和防卫免疫等方面是否具有一定调节的作用。方法:体外培养NR8383细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,染毒24h后,应用流式细胞仪和DCFH-D... 详细信息

目的:通过艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能以及细胞活性氧的影响以探讨其对修复机体损伤和防卫免疫等方面是否具有一定调节的作用。方法:体外培养NR8383细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,染毒24h后,应用流式细胞仪和DCFH-DA试剂盒来分别检测NR8383的细胞吞噬率及ROS。结果:在一定浓度范围内,艾烟冷凝物可以增强NR8383细胞的吞噬功能,各实验组(除浓度为0.004mg/ml的实验组外)与空白对照组的差异均具有统计学意义(P艾烟冷凝物染毒24h,该细胞的活性氧随着艾烟冷凝物的浓度升高而呈降低趋势,各实验组与空白对照组均具有统计学差异(P艾烟冷凝物可以增强大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能,亦可降低该细胞的活性氧,这可能成为艾烟能够修复机体损伤和提高自身免疫力的重要机制之一。

关键词：艾烟冷凝物肺泡巨噬细胞吞噬功能细胞活性氧