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脂多糖对小鼠肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的影响

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上海医学 2018年第8期41卷 477-482页

作者：顾楠楠邢顺鹏陈思涵周雨曦蒋涛焦英甫皋源俞卫峰何征宇杭燕南闻大翔上海交通大学医学院附属仁济医院麻醉科上海200127 上海交通大学医学院附属仁济医院重症医学科上海200127

目的观察原代培养的小鼠肺成纤维细胞在不同质量浓度的脂多糖(LPS)刺激下的增殖情况并检测P27蛋白的表达情况,以明确LPS对肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的调控作用。方法将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞分为对照组、100μg/L LPS组(L... 详细信息

目的观察原代培养的小鼠肺成纤维细胞在不同质量浓度的脂多糖(LPS)刺激下的增殖情况并检测P27蛋白的表达情况,以明确LPS对肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的调控作用。方法将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞分为对照组、100μg/L LPS组(LPS_(100)组)、500μg/L LPS组(LPS_(500)组)和1 000μg/L LPS组(LPS_(1000)组)。对照组加入PBS,各质量浓度LPS组加入相应终质量浓度的LPS。在LPS刺激后0、24、48、72h采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组小鼠肺成纤维细胞的增殖情况。在LPS刺激后24h采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠肺成纤维细胞P27的mRNA表达水平,并通过Western印迹法和免疫荧光技术比较小鼠肺成纤维细胞经不同质量浓度LPS刺激48h后P27的蛋白质表达情况。结果不同质量浓度的LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后能引起细胞增殖,LPS刺激后24h,LPS1000组细胞增殖速率显著高于对照组(P肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均肺成纤维细胞的增殖可能是LPS诱导的脓毒症相关性肺纤维化发生的机制之一,该过程可能与P27蛋白表达下调有关。

关键词：脂多糖类肺纤维化脓毒症肺成纤维细胞增殖

肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响

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武汉大学学报（医学版） 2013年第1期34卷 38-41页

作者：程真顺王佐兵杨炯叶燕青武汉大学中南医院呼吸内科湖北武汉430071 湖北省黄石市第一医院内科湖北黄石435001

目的:通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养观察,了解肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞,实验分为三组:对照组,正常大鼠肺成纤维细胞培养;接触共育组,肥大细胞与肺... 详细信息

目的:通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养观察,了解肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞,实验分为三组:对照组,正常大鼠肺成纤维细胞培养;接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞接触共体培养;非接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞非接触共体培养。每组设3复孔,并作细胞爬片,共培养5 d,每日镜下计数肺成纤维细胞数量,建立生长曲线,5 d后用MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率,通过ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:①细胞计数显示:接触共育组各时段成纤维细胞的数目均较非接触共育组和对照组明显增多。接触共育组中成纤维细胞增殖数与非接触共育组和对照组比较,有明显差异(P0.05)。②MTT结果:接触共育组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组和非接触共育组(P肺成纤维细胞增殖明显高于对照组和非接触共育组,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。③ELISA法检测结果提示,在肥大细胞与肺成纤维细胞接触共育培养组,培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于非接触共育组和对照组(P肺成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白明显增加,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。结论:肥大细胞影响肺成纤维细胞的增殖及胶原合成;肥大细胞可能通过紧密接触来促进肺成纤维细胞的增殖及胶原合成。

关键词：肥大细胞肺成纤维细胞胶原蛋白

CKLF1-C19多肽对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的干预作用

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中国病理生理杂志 2017年第11期33卷 2047-2052页

作者：龙航谭亚夏邱源石燕情汪延生黄洁虹周文良广州医科大学附属第一医院广州呼吸疾病研究所国家呼吸疾病重点实验室中山大学生命科学院广东广州510000

目的:探讨CKLF1-C19多肽(C19)对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞(LFB)向肌成纤维细胞(MFB)转化的干预作用。方法:培养原代人肺成纤维细胞并鉴定。用适宜的TGF-β浓度处理LFB,制备LFB向MFB转化的细胞模型。随后将实验分为对照组、TGF-β(5... 详细信息

目的:探讨CKLF1-C19多肽(C19)对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞(LFB)向肌成纤维细胞(MFB)转化的干预作用。方法:培养原代人肺成纤维细胞并鉴定。用适宜的TGF-β浓度处理LFB,制备LFB向MFB转化的细胞模型。随后将实验分为对照组、TGF-β(5μg/L)组及4个浓度(1、0.1、0.01、0.001 mg/L)C19与TGF-β合用组。以细胞生长状态、细胞增殖率、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化为观察指标。结果:经显微镜检测,证实成功培养出原代人LFB。5μg/L TGF-β明显刺激LFB增殖及α-SMA和collagen I表达(P细胞增殖率、α-SMA和collagen I的mRNA及α-SMA的蛋白表达均明显降低(P纤维化的发生。

关键词： CKLF1-C19多肽肺成纤维细胞肌成纤维细胞气道重塑

木犀草素对大鼠肺成纤维细胞增殖的作用(英文)

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中国天然药物 2009年第4期7卷 297-300页

作者：张国敏龚国清李林林杨丽娜王寅中国药科大学药理教研室南京210009

目的:研究木犀草素对乳鼠肺成纤维细胞增殖作用的影响。方法:取3d内出生的乳大鼠肺组织制备肺成纤维细胞,经纯化,接种于96孔培养板上,细胞分为正常对照组、醋酸泼尼松龙组、4×10-4、4×10-5、4×10-6、4×10-7mol·L-14个不同浓度的木... 详细信息

目的:研究木犀草素对乳鼠肺成纤维细胞增殖作用的影响。方法:取3d内出生的乳大鼠肺组织制备肺成纤维细胞,经纯化,接种于96孔培养板上,细胞分为正常对照组、醋酸泼尼松龙组、4×10-4、4×10-5、4×10-6、4×10-7mol·L-14个不同浓度的木犀草素实验组,培养一段时间后,观察肺成纤维细胞的形态变化,测定肺成纤维细胞的生长曲线、增殖情况及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:木犀草素浓度在4×10-5、4×10-6mol·L-1时,可明显抑制肺成纤维细胞的生长和增殖,且细胞密度减小,细胞间隔变大,这种作用与药物浓度呈正相关性,且使肺成纤维细胞内蛋白质的含量减少,所有木犀草素给药组均可使肺成纤维细胞内SOD活力随剂量的增加而增加,且与正常对照组比较差异均有统计学意义。结论:木犀草素对大鼠肺成纤维细胞的增殖有抑制作用。

关键词：木犀草素肺成纤维细胞增殖抑制作用

蛋白激酶抑制剂对青石棉致肺成纤维细胞周期改变的影响

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中华预防医学杂志 2000年第6期34卷 375-376页

作者：詹显全杨青王治明王绵珍成都市华西医科大学公共卫生学院劳动卫生学教研室 610041

人参不同部位皂甙对人胚肺成纤维细胞DNA修复功能的影响

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中草药 1992年第10期23卷 528-530,536页

作者：张树臣刘平张伟葛迎春王学农赫慧段秀梅吉林省中医中药研究院

应用非程序DNA合成技术(UDS),由丝裂霉素C(MMC)诱导DNA损伤,经C-TdR和~3H-TdR双标记液闪测定结果表明,人胚肺成纤维细胞(2BS)随着体外增龄DNA修复反应显著下降(P<0.01)。MMC 1～10ng/ml能显著增加低代龄细胞的UDS水平(P<0.01),而对高代... 详细信息

应用非程序DNA合成技术(UDS),由丝裂霉素C(MMC)诱导DNA损伤,经C-TdR和~3H-TdR双标记液闪测定结果表明,人胚肺成纤维细胞(2BS)随着体外增龄DNA修复反应显著下降(P细胞的UDS水平(P细胞影响不明显。人参根、果和茎叶皂甙(SRG、SFG、SSLG)均能降低低代龄细胞由MMC诱导的UDS水平,其中SRG、SFG作用显著(P细胞SRG、SSLG则使UDS水平显著升高,在没有MMC诱导的情况下,人参皂甙对低代龄和高代龄细胞的UDS水平没有显著影响。

关键词：人胚肺成纤维细胞人参皂甙

TGF-β1 shRNA真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达

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中国免疫学杂志 2009年第9期25卷 780-782页

作者：马莎吕昭萍王应莉云南省第一人民医院风湿免疫科昆明650032 昆明医学院第一附属医院昆明650032

目的:观察构建成功的三个针对人转化生长因子β1(TGF-β1)的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达。方法:将真核表达载体psiSTRIKE-RNAi1、psiSTRIKE-RNAi2、psiSTRIKE-RNAi3和对应的阴性对照载体经酶切鉴定和... 详细信息

目的:观察构建成功的三个针对人转化生长因子β1(TGF-β1)的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达。方法:将真核表达载体psiSTRIKE-RNAi1、psiSTRIKE-RNAi2、psiSTRIKE-RNAi3和对应的阴性对照载体经酶切鉴定和测序分析后,以Lipofectamine2000介导转染人肺成纤维细胞,48小时后应用实时荧光定量PCR检测人肺成纤维细胞TGF-β1mRNA的表达并用ELISA检测细胞上清液中TGF-β1蛋白质的浓度。结果:重组质粒经酶切和DNA测序证实插入片段的碱基序列与预期设计一致。转染组细胞TGF-β1表达受到明显抑制,以psiSTRIKE-RNAi2的抑制效应最为显著(P肺成纤维细胞中的表达。

关键词：转化生长因子β1 RNA干扰肺成纤维细胞肺纤维化基因治疗

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

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中华劳动卫生职业病杂志 2001年第1期19卷 30-33页

作者：毛国根叶少菁曾群力浙江大学医学院劳动卫生与环境卫生研究所杭州310031

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅 (SiO2 )刺激肺纤维化发生与肺成纤维细胞间隙连接通讯功能 (GJIC)下调的关系。方法　不同剂量的SiO2 刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)及具有肺泡巨噬细胞特性的、经 12 O 四葵酰基佛波 13 乙酸酯 (... 详细信息

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅 (SiO2 )刺激肺纤维化发生与肺成纤维细胞间隙连接通讯功能 (GJIC)下调的关系。方法　不同剂量的SiO2 刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞 (PAM)及具有肺泡巨噬细胞特性的、经 12 O 四葵酰基佛波 13 乙酸酯 (佛波酯 ,PMA或TPA)诱导分化的人血单核细胞株(pTHP 1)培养上清液 ,作用于中国仓鼠肺成纤维 (CHL)细胞。用四唑盐 (MTT)法测定CHL细胞增殖(A570nm) ;用激光扫描共聚焦显微镜 ,按荧光光漂白后再恢复 (FRAP)技术测定CHL细胞GJIC功能 [荧光传递速率K ,(× 10 -3/s) ]。结果　SiO2 刺激的PAM上清液和pTHP 1上清液均能诱导CHL细胞增殖(PAM :F =3.2 0 5 ,P 细胞增殖能力渐强 ,呈剂量-效应关系 (PAM :r=- 0 .80 3,P 细胞上清液可以增强CHL细胞的GJIC功能 (K均数分别为 2 1.2 4× 10 -3/s、18.92× 10 -3/s)和抑制细胞增殖 (A570nm均数分别为 0 .5 0 6、0 .2 18) ,和空白对照 (7.81× 10 -3/s、7.81× 10 -3/s和 0 .5 39、0 .388)相比。

关键词：二氧化硅矽肺肺纤维化 FRAP技术肺成纤维细胞间隙连接

肥大细胞通过细胞紧密接触对肺成纤维细胞的增殖、转化及功能的影响

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中华实验外科杂志 2013年第8期30卷 1598-1600页

作者：程真顺谭维军杨炯叶燕青江平武汉大学中南医院呼吸内科 430071 武汉大学中南医院普外科科 430071

目的通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养，观察肥大细胞对肺成纤维细胞增殖、转化及功能的影响。方法分离大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞，实验分为3组：接触共育组、非接触共育组、对照组。计数各组肺成纤维细胞数量，... 详细信息

目的通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养，观察肥大细胞对肺成纤维细胞增殖、转化及功能的影响。方法分离大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞，实验分为3组：接触共育组、非接触共育组、对照组。计数各组肺成纤维细胞数量，通过免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），噻唑蓝（MTT）比色法测定肺成纤维细胞增殖率，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测培养液中I型胶原蛋白含量。结果各组肺成纤维细胞数目在培养的第5天均达峰值，分别为接触共育组（3．70±0．83）×10^6个／孔；非接触共育组（1．40±0．32）×10^6个／孔；对照组（1．10±0．23）×10^6个／孔，接触共育组与非接触共育组和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；MTT检测各组肺成纤维细胞吸光度（A）值：接触共育组为0．2520±0．0318，非接触共育组为0．1250±0．0212，对照组为0．1210±0．0124，接触共育组与非接触共育组和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；各组α-SMA染色的平均吸光度（IA）值分别为0．3190±0．0436、0．1840±0．0190、0．1730±0．0226，接触共育组与非接触共育组和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；接触共育组，培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于非接触共育组和对照组[（192．56±2．37）、（143．58±2．07）、（121．43±1．98）μg／L，P〈0．05）。结论肥大细胞可能通过紧密接触来促进肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成。

关键词：肥大细胞肺成纤维细胞增殖转化