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独角莲水提取物对肝癌细胞smmc-7721基因表达的影响

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中草药 2006年第9期37卷 1384-1387页

作者：王顺启倪虹王同顺陈力南开大学生命科学学院南昌大学生命科学学院江西南昌330047

独角莲是一味传统中药，在中医临床中被广泛用于治疗多种恶性肿瘤疾病，显示出较好的临床疗效。不仅动物模型的研究显示独角莲可明显抑制肿瘤生长，研究还发现独角莲具有阻滞肝癌细胞smmc-7721生长于S期，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。为进... 详细信息

独角莲是一味传统中药，在中医临床中被广泛用于治疗多种恶性肿瘤疾病，显示出较好的临床疗效。不仅动物模型的研究显示独角莲可明显抑制肿瘤生长，研究还发现独角莲具有阻滞肝癌细胞smmc-7721生长于S期，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。为进一步研究独角莲这一作用的分子机制，本实验利用肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列，对独角莲作用于肝癌细胞smmc一7721后基因表达的变化进行了探讨。

关键词：肝癌细胞smmc-7721 基因表达独角莲水提取物抑制肿瘤生长肿瘤疾病基因微阵列传统中药

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞smmc-7721活性

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安徽农业科学 2009年第34期37卷 17264-17266页

作者：林董何爱明吴丽萍吴祖建福建师范大学福清分校生化系福建福清350300 南昌大学生命科学学院江西南昌330031 福建农林大学植物保护学院福建福州350001

[目的]建立一套适合于实验室高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]通过MTT法,对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药体外抗肝癌细胞smmc-7721的活性进行初测;描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜... 详细信息

[目的]建立一套适合于实验室高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]通过MTT法,对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药体外抗肝癌细胞smmc-7721的活性进行初测;描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但萎缩,边缘清晰化,与生长状况良好的细胞形态有明显区别;浓度为1.0～1.5mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞smmc-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%,且抑制作用随着浓度的增加而加强。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。

关键词： MTT法肝癌细胞smmc-7721 筛选抑制率

加速^(12)C^(6+)离子照射诱发人肝癌细胞smmc-7721的DNA双链断裂

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辐射研究与辐射工艺学报 2004年第3期22卷 189-192页

作者：雷苏文王菊芳苏旭赵靖李文建中国疾病预防控制中心辐射防护与核医学安全所北京100088 中国科学院近代物理研究所兰州730000

重离子为高传能线密度(LET)辐射;;在引起肿瘤细胞失活上有更大的相对生物学效应。DNA的双链断裂在细胞辐射损伤中是极其重要的;;其最终导致细胞的失活。本实验研究检测细胞DNA的双链断裂(DSB);;以探讨细胞失活的机理。用脉冲场凝胶电泳... 详细信息

重离子为高传能线密度(LET)辐射;;在引起肿瘤细胞失活上有更大的相对生物学效应。DNA的双链断裂在细胞辐射损伤中是极其重要的;;其最终导致细胞的失活。本实验研究检测细胞DNA的双链断裂(DSB);;以探讨细胞失活的机理。用脉冲场凝胶电泳方法结合溴乙锭染色的荧光扫描技术;;定量测定C诱导人肝癌126+细胞smmc?7721DNA的DSB剂量效应关系。结果发现;;DNA片段释放百分比随吸收剂量的增加而增加。

关键词：碳离子肝癌细胞smmc-7721 DNA双链断裂

芹菜素对小鼠胚肝细胞诱导肝癌细胞smmc-7721分化的促进作用

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芹菜素对小鼠胚肝细胞诱导肝癌细胞SMMC-7721分化的促进作用

作者：王博雅河北医科大学

学位级别：硕士

目的:肝癌是在肝细胞或肝内胆管上皮细胞病变引起的肝脏恶性肿瘤,其中肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占90%以上,HCC发病率位列全球第五位,我国是HCC发病率最高的国家,目前HCC的死亡率位列癌症相关死因第三位。即使在发达国... 详细信息

目的:肝癌是在肝细胞或肝内胆管上皮细胞病变引起的肝脏恶性肿瘤,其中肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占90%以上,HCC发病率位列全球第五位,我国是HCC发病率最高的国家,目前HCC的死亡率位列癌症相关死因第三位。即使在发达国家HCC的5年内相对生存率也不到5%,因此,找到可以根除HCC的方法亟待解决。由于现有治疗HCC的方法均不理想,所以我们提出了一种新的思路。异常的微环境是肿瘤发生的决定因素,异常的微环境使组织干细胞接收到的调节增殖及分化的信号失调:分化异常下调或停滞及增殖信号明显上调进而形成肿瘤细胞。研究表明,癌症干细胞(Cancer stem cells,CSCs)和正常干细胞之间存在着许多相似之处,基于CSCs与正常干细胞的相似之处,导师齐锦生教授认为CSCs是停滞于某发育阶段,而呈无限增殖的“正常干细胞”或细胞的“返祖”现象。据此,我们认为胚胎细胞具有诱导肿瘤细胞分化的能力,这种诱导分化的能力具有组织、时间和空间特异性,并且没有种属差异。我们的前期研究已经表明,用13.5d的胚肝细胞与肝癌细胞株HepG2共培养,可以诱导HepG2细胞分化,并揭露了其相关的分子机制。本研究选取12.5d的小鼠胚肝细胞对smmc-7721细胞进行诱导分化。近年来,关于祖国传统医学及中草药(The traditional Chinese medicine,TCM)的研究表明,TCM用于肿瘤的治疗具有预防肿瘤发生,减毒、提高治疗效果,减少肿瘤复发和转移三大优势。其中许多应用于肿瘤治疗的中药如密蒙花、半枝莲等中均含有芹菜素(Apigenin,API)。API作为一种黄酮类的抗癌药物,在其高剂量时可诱导肿瘤细胞凋亡,而低剂量是可诱导肿瘤细胞分化。因此,本研究选取低剂量API作为肝癌细胞株smmc-7721的一种分化的诱导剂和促进剂,旨在探讨低剂量API能否诱导smmc-7721细胞分化以及能否促进胚肝细胞诱导smmc-7721细胞分化。本实验在前期实验基础上,用梯度浓度API干预肝癌细胞株smmc-7721细胞株,筛选出诱导smmc-7721分化的API适宜浓度,然后利用该浓度的API与小鼠胚肝细胞共培养共同干预smmc-7721细胞,对比API与小鼠胚肝细胞共培养分别单独作用于smmc-7721细胞的差异。用免疫荧光技术,检测smmc-7721细胞中AFP与HNF-4α蛋白表达水平变化;用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)技术,检测afp与hnf-4α的mRNA表达水平,通过2法计算差异;利用免疫印迹试验(Western Blot,WB)检测AFP、HNF-4α蛋白水平的表达。本研究选取smmc-7721细胞株为研究对象,探索天然植物提取物API对共培养诱导分化肿瘤细胞的促进作用,为临床低毒高效的根除HCC提供新的思路。方法:1细胞培养1.1 smmc-7721细胞:smmc-7721细胞用含1%非必需氨基酸和10%新生牛血清的DMEM高糖培养基培养,0.25%的胰蛋白酶消化传代,接种于100mL培养瓶中,在37℃、5%CO培养箱中培养。1.2原代胚肝细胞分离及培养:采用Ⅳ胶原酶消化法,从孕鼠腹中取得胎鼠,分离出胚肝,将胚肝组织剪成组织块,Ⅳ胶原酶消化胚肝组织块,成功分离为单个胚肝细胞;多次重复差速贴壁法除去成纤维细胞,纯化胚肝细胞;高糖DMEM培养胚肝细胞。2实验设计与分组2.1用梯度浓度API诱导肝癌细胞smmc-7721分化72h,实验分为6组:con组,API 2.5μm/L、API 5μm/L、API 7.5μm/L、API 10μm/L、API12.5μm/L。2.2胎肝细胞与smmc-7721细胞用含API的培养基共培养,分别进行24h与48h。其中小鼠胎肝与smmc-7721细胞的共培养体系建立为:利用带有“transwell”小室的六孔板建立小鼠胚肝细胞与smmc-7721细胞的非接触式共培养体系。实验分为4组:第:1组为con组;第2组为用诱导smmc-7721分化能力最强,浓度为5μm/L的API组;第3组为小鼠胚肝细胞与smmc-7721共培养的co-culture组;第4组为5μm/L的API与小鼠胚肝细胞共同作用于smmc-7721的co-culture+API组。4组各进行24h与48h后对比差异。3 API诱导smmc-7721分化的最适浓度API诱导smmc-7721分化过程中,不同浓度API对smmc-7721的分化诱导能力是不同的。3.1利用荧光显微镜观察AFP与HNF-4α的分泌量。3.2 Trizol一步法提取smmc-7721细胞中总RNA,用β

关键词：胚肝细胞 API 肝癌细胞smmc-7721 共培养 AFP HNF-4α

siRNA沉默hIAP-2基因表达对肝癌细胞smmc-7721增殖与侵袭能力的影响

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siRNA沉默hIAP-2基因表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影...

作者：郭超中南大学

学位级别：硕士

目的：合成凋亡抑制蛋白(hIAP-2)的siRNA,观察其对smmc-7721细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：化学合成三条hIAP-2-siRNA干扰片段并用脂质体法转染smmc-7721细胞,同时设阴性体对照。实时荧光定量PCR和western blotting检测hIAP-2-siRNA... 详细信息

目的：合成凋亡抑制蛋白(hIAP-2)的siRNA,观察其对smmc-7721细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：化学合成三条hIAP-2-siRNA干扰片段并用脂质体法转染smmc-7721细胞,同时设阴性体对照。实时荧光定量PCR和western blotting检测hIAP-2-siRNA作用后smmc-7721细胞中hIAP-2mRNA和蛋白的表达,MTT检测smmc-7721细胞增殖能力变化,AV-PI流式细胞术检测各组smmc-7721细胞转染48h后的凋亡率变化,Transwell检测细胞侵袭能力的变化。结果：Q-PCR及Western blotting检测显示3条siRNA均能有效抑制hIAP-2mRNA及蛋白表达(Psmmc-7721细胞的增殖受到显著抑制(P细胞术检测结果显示hIAP-2-siRNA转染smmc-7721细胞后凋亡率增加(psmmc-7721细胞的侵袭能力显著降低(p细胞smmc-7721的增殖,促进smmc-7721肝癌细胞的凋亡,降低其侵袭能力。

关键词： HIAP-2 肝癌细胞smmc-7721 小干扰RNA 细胞增殖细胞侵袭

银杏外种皮提取物对人肝癌细胞smmc-7721效应的研究

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银杏外种皮提取物对人肝癌细胞SMMC-7721效应的研究

作者：钟雪厦门大学

学位级别：硕士

癌症是当前危害人类健康和生命最为严重的主要常见病、多发病之一。在中国,癌症已经取代了心血管疾病成为死亡率最高的疾病,是名副其实的“头号杀手”。而肝癌(由肝细胞或肝内胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤)是我国常见的恶性肿瘤之一,是... 详细信息

癌症是当前危害人类健康和生命最为严重的主要常见病、多发病之一。在中国,癌症已经取代了心血管疾病成为死亡率最高的疾病,是名副其实的“头号杀手”。而肝癌(由肝细胞或肝内胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤)是我国常见的恶性肿瘤之一,是仅次于胃癌的,第二癌症“杀手”,死亡率高。从天然植物中筛选出能与癌症发生、发展、形成等过程中各调节靶点特异结合的活性成分,已成为寻找抗癌药物的新热点,也是我国“十一五”期间的生物医药研究的重点方向之一。银杏(Ginkgo biloba L.)是世界上珍贵的药用植物,其叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值,创造了被世人所瞩目的经济效益、生态效益和社会效益。银杏外种皮是银杏种子硬壳外面的肉质部分,具有多方面药理活性,近几年的研究发现,银杏外种皮包括有大量的银杏多糖、被称作银杏酚、酸的化合物、黄酮、银杏内酯等。近期对于银杏酚、酸的研究发现,它们具有抗菌活性、抗焦虑、镇定作用,最重要的是:银杏酚、酸还有很强的抗癌活性,是一种极具开发潜力的抗癌资源。在本研究中我们采用破碎、经索氏提取法、Sephadex G-25分子筛柱层析、乙醚,***,HCl反复萃取等方法得到银杏酸类似物的粗样品。经高效液相色谱进行进一步的分离,得到6个主峰,分别命名为GA、GA、GA、GA、GA、GA。采用MTT法分别测定了银杏酚、酸粗提物以及HPLC纯化后所得GA、GA、GA、GA、GA、GA对人肝癌细胞smmc-7721的抑制作用。实验结果表明:银杏酸类似物、GA、GA、GA对smmc-7721有明显的抑制作用,而其中抑制作用最强的是GA,其IC为13μg/mL,其次是GA,其IC为58μg/mL,而GA对人体外培养的smmc-7721的抑制作用是最弱的。采用流式细胞仪比较了银杏酸类似物中的有效成分GA、GA、GA与顺铂(阳性对照)所导致的细胞周期分布变化,发现GA组分所引起的细胞凋亡率显著高于顺铂。进一步研究了GA对人肝癌细胞的抑制作用,发现GA能有效抑制肝癌细胞的生长,并能改变人肝癌smmc-7721细胞形态学特征。为进一步研究GA抑制癌细胞的分子机制,本研究还采用Annexin V-FITC/PI检测了GA对人肝癌细胞smmc-7721的凋亡作用。首先,我们用流式细胞仪对比了GA和顺铂(阳性对照)对人肝癌细胞smmc-7721的凋亡率。结果发现:在相同的时间和浓度下,顺铂作用人肝癌细胞smmc-7721多发生晚期凋亡或细胞坏死,而GA作用癌细胞则多发生早期凋亡。为了进一步证实细胞的凋亡,对作用后的癌细胞进行了荧光显微镜观察,发现当GA浓度较低的时候,细胞呈现出早期凋亡的特征,但是随着GA浓度的提高,细胞呈现出晚期凋亡和坏死的特征。因此,我们认为GA可以作为一种有效的抗肝癌药物,但是其浓度应不超过10μg/mL。

关键词：肝癌细胞smmc-7721 细胞凋亡银杏酸类似物 GA3

Nrf2-Keap 1-ARE通路对肝癌细胞smmc-7721生长的影响

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Nrf2-Keap 1-ARE通路对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响

作者：师振茗山西医科大学

学位级别：硕士

目的:Nrf2-Keap l-ARE通路是人体对付应激因素的重要通路,然而近年来发现它还有其他的作用,本实验主要探索其在肝癌细胞smmc-7721中对增殖和凋亡的影响,为寻找治疗肝癌的有效药物提供实验依据。方法:常规培养肝癌细胞smmc-7721株后,随... 详细信息

目的:Nrf2-Keap l-ARE通路是人体对付应激因素的重要通路,然而近年来发现它还有其他的作用,本实验主要探索其在肝癌细胞smmc-7721中对增殖和凋亡的影响,为寻找治疗肝癌的有效药物提供实验依据。方法:常规培养肝癌细胞smmc-7721株后,随机分为两组:一组是加入Nrf2抑制剂BML-111的实验组,另一组是空白对照组;然后在一段时间后用MTT法检测肝癌细胞增殖的抑制率和用流式细胞术检测肝癌细胞的凋亡率。结果:MTT检测显示:与对照组相比,加入Nrf2抑制剂后,SMCC-7721细胞增值的抑制率明显升高。流式细胞术显示:与对照组相比,加入Nrf2抑制剂后,SMCC-7721细胞凋亡率明显升高。结论:在SMCC-7721细胞增殖过程中,Nrf2-Keap l-ARE起促进肿瘤生长的作用。

关键词：肝癌细胞smmc-7721 Nrf2-Keap l-ARE 凋亡

根皮素诱导肝癌细胞smmc-7721凋亡的机制研究

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中国生化药物杂志 2015年第6期35卷 25-28页

作者：王会吴汉东刘政辽宁医学院食品科学与工程学院辽宁锦州121001

目的研究根皮素对肝癌细胞smmc-7721凋亡的影响,并探讨其机制。方法以30、60、120 mg/L根皮素培养对数生长期的肝癌细胞smmc-7721分别为低、中、高浓度处理组;应用相差显微镜观察凋亡细胞形态学变化,AO/EB双荧光染色法观察经根皮素处理... 详细信息

目的研究根皮素对肝癌细胞smmc-7721凋亡的影响,并探讨其机制。方法以30、60、120 mg/L根皮素培养对数生长期的肝癌细胞smmc-7721分别为低、中、高浓度处理组;应用相差显微镜观察凋亡细胞形态学变化,AO/EB双荧光染色法观察经根皮素处理的细胞形态;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期、线粒体膜电位、钙离子稳态的变化。结果细胞呈典型的凋亡形态学变化;根皮素对smmc-7721细胞有诱导凋亡作用且呈浓度和时间依赖性;细胞周期阻滞于G1期,细胞线粒体膜电位降低,细胞内钙离子浓度增大。结论根皮素可通过影响细胞周期,降低线粒体膜电位,改变细胞内钙离子平衡来诱导肝癌细胞smmc-7721凋亡。

关键词：根皮素肝癌细胞smmc-7721 凋亡

胂酸基乙酸与10-羟基喜树碱对肝癌细胞smmc-7721生长的协同抑制作用

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泸州医学院学报 2005年第2期28卷 123-125页

作者：罗波郑小莉王琼李洪泸州医学院生物化学教研室四川泸州646000

目的:了解胂酸基乙酸(ASAC)与10 -羟基喜树碱(10 -HCPT)对肝癌细胞smmc - 772 1细胞生长的协同抑制效果。方法:两药组合和单药以不同浓度分别作用于生长良好的smmc - 772 1细胞,分别在第2 4h、4 8h和72h终止作用,以MTT实验测定每组药物... 详细信息

目的:了解胂酸基乙酸(ASAC)与10 -羟基喜树碱(10 -HCPT)对肝癌细胞smmc - 772 1细胞生长的协同抑制效果。方法:两药组合和单药以不同浓度分别作用于生长良好的smmc - 772 1细胞,分别在第2 4h、4 8h和72h终止作用,以MTT实验测定每组药物对smmc - 772 1细胞的抑制率大小。结果:协同作用组比单药组的抑制效果好。在第4 8h和72h协同组有显著性差异(P 癌细胞凋亡的药物对smmc - 772 1细胞生长具有周期协同抑制作用。

关键词：肝癌细胞smmc-7721 10-羟基喜树碱协同抑制作用胂酸基乙酸 smmc-7721细胞抑制效果细胞生长 MTT实验显著性差异癌细胞凋亡不同浓度协同作用 HCPT 72h 24h 抑制率药物