银杏外种皮提取物对人肝癌细胞SMMC-7721效应的研究

作     者：钟雪 

作者单位：厦门大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王勤

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝癌细胞SMMC-7721 细胞凋亡 银杏酸类似物 GA3 

摘      要：癌症是当前危害人类健康和生命最为严重的主要常见病、多发病之一。在中国,癌症已经取代了心血管疾病成为死亡率最高的疾病,是名副其实的“头号杀手。而肝癌(由肝细胞或肝内胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤)是我国常见的恶性肿瘤之一,是仅次于胃癌的,第二癌症“杀手,死亡率高。从天然植物中筛选出能与癌症发生、发展、形成等过程中各调节靶点特异结合的活性成分,已成为寻找抗癌药物的新热点,也是我国“十一五期间的生物医药研究的重点方向之一。银杏(Ginkgo biloba L.)是世界上珍贵的药用植物,其叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值,创造了被世人所瞩目的经济效益、生态效益和社会效益。银杏外种皮是银杏种子硬壳外面的肉质部分,具有多方面药理活性,近几年的研究发现,银杏外种皮包括有大量的银杏多糖、被称作银杏酚、酸的化合物、黄酮、银杏内酯等。近期对于银杏酚、酸的研究发现,它们具有抗菌活性、抗焦虑、镇定作用,最重要的是:银杏酚、酸还有很强的抗癌活性,是一种极具开发潜力的抗癌资源。 在本研究中我们采用破碎、经索氏提取法、Sephadex G-25分子筛柱层析、乙醚,***,HCl反复萃取等方法得到银杏酸类似物的粗样品。经高效液相色谱进行进一步的分离,得到6个主峰,分别命名为GA、GA、GA、GA、GA、GA。 采用MTT法分别测定了银杏酚、酸粗提物以及HPLC纯化后所得GA、GA、GA、GA、GA、GA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。实验结果表明:银杏酸类似物、GA、GA、GA对SMMC-7721有明显的抑制作用,而其中抑制作用最强的是GA,其IC为13μg/mL,其次是GA,其IC为58μg/mL,而GA对人体外培养的SMMC-7721的抑制作用是最弱的。采用流式细胞仪比较了银杏酸类似物中的有效成分GA、GA、GA与顺铂(阳性对照)所导致的细胞周期分布变化,发现GA组分所引起的细胞凋亡率显著高于顺铂。进一步研究了GA对人肝癌细胞的抑制作用,发现GA能有效抑制肝癌细胞的生长,并能改变人肝癌SMMC-7721细胞形态学特征。 为进一步研究GA抑制癌细胞的分子机制,本研究还采用Annexin V-FITC/PI检测了GA对人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。首先,我们用流式细胞仪对比了GA和顺铂(阳性对照)对人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡率。结果发现:在相同的时间和浓度下,顺铂作用人肝癌细胞SMMC-7721多发生晚期凋亡或细胞坏死,而GA作用癌细胞则多发生早期凋亡。为了进一步证实细胞的凋亡,对作用后的癌细胞进行了荧光显微镜观察,发现当GA浓度较低的时候,细胞呈现出早期凋亡的特征,但是随着GA浓度的提高,细胞呈现出晚期凋亡和坏死的特征。因此,我们认为GA可以作为一种有效的抗肝癌药物,但是其浓度应不超过10μg/mL。