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外膜蛋白OmpA在蛙源米尔伊丽莎白菌致病性中的功能

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华中农业大学学报 2024年第1期43卷 203-209页

作者：刘芳园胡瑞雪余芳侯家昊于子润顾泽茂华中农业大学水产学院/湖北省水生动物病害防控工程技术研究中心/农业农村部水生动物疫病专业实验室(华中农业大学) 武汉430070

为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响,以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象,通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA,比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对... 详细信息

为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响,以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象,通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA,比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对细胞的黏附能力以及对蛙的致病性差异。结果显示:△ompA的生长能力和抗血清杀伤能力与野生株无显著差异;但与野生株相比,△ompA的生物膜形成能力增加了66%,△ompA对bEnd.3细胞的黏附能力降低了61%;黑斑蛙感染试验显示,△ompA在黑斑蛙血液、脾和脑组织中的载菌量分别为(3.15×10^(8)±0.09×10^(8))、(2.11×10^(8)±0.07×10^(8))和(6.61×10^(8)±0.16×10^(8))copies/g,均显著低于野生株,且△ompA对黑斑蛙的致死率为37%,显著低于野生株的致死率(75%)。上述结果表明,ompA基因缺失不改变米尔伊丽莎白菌的抗血清杀伤能力,但增加了菌株的生物膜形成能力,减弱了菌株的黏附能力,从而降低了该菌对蛙的致病性。

关键词：米尔伊丽莎白菌基因缺失外膜蛋白A 致病性

芽孢杆菌ZL397的鉴定及其对米尔伊丽莎白菌抑菌活性的研究

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饲料工业 2024年第4期45卷 121-126页

作者：竺利红尹小良施跃峰皮雄娥浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310021 浙江省绍兴市越城区东湖街道事业综合服务中心浙江绍兴312001

为解析菌株ZL397的分类地位及其对黑斑蛙源米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miri-cola)的抑菌活性,利用形态分析、生理生化检测和16S rDNA序列分析,对ZL397进行菌种鉴定;采用细菌浓度测定法和扫描电镜观察法,考察ZL397对米尔伊丽莎白菌... 详细信息

为解析菌株ZL397的分类地位及其对黑斑蛙源米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miri-cola)的抑菌活性,利用形态分析、生理生化检测和16S rDNA序列分析,对ZL397进行菌种鉴定;采用细菌浓度测定法和扫描电镜观察法,考察ZL397对米尔伊丽莎白菌的抑菌活性;采用滤纸片法测定ZL397对12种病原菌的抑菌活性。攻毒保护试验选取成年黑斑蛙360只,随机分成4个组(每个处理3个重复,每个重复30只),即预防组、治疗组、攻毒对照组和对照组。试验期14 d。菌种鉴定、抑菌活性和抗菌谱试验结果表明,ZL397为特基拉芽孢杆菌(***);ZL397发酵上清液的50倍稀释液对米尔伊丽莎白菌的抑制率为90.29%,并可致使靶标菌细胞壁和膜破裂、菌体断裂;ZL397对多种病原细菌有抑制作用,尤其对藤黄八叠球菌(Micrococcus luteus)、鸡沙门氏菌(Salmonella gullina-rum)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)、乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter caleoaceticus)的抑菌活性较强。攻毒保护试验结果表明,7 d后攻毒对照组黑斑蛙存活率仅为41.11%,而添加0.1‰ZL397粉剂饲喂的预防组黑斑蛙存活率高达92.22%,两者差异显著(P菌对黑斑蛙有抗病促生长功效,具有良好的应用前景。

关键词：特基拉芽孢杆菌黑斑蛙米尔伊丽莎白菌鉴定抗菌谱攻毒保护试验

临床药师参与重症肺炎米尔伊丽莎白菌感染1例的病例分析

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临床合理用药杂志 2024年第7期17卷 149-152页

作者：李建伟杨蕊山东省寿光市中医医院临床药学室 262700 山东第一医科大学第一附属医院/山东省千佛山医院/山东省儿童药物临床评价与研发工程技术研究中心/山东省医药卫生临床药学重点实验室济南市250014

米尔伊丽莎白菌为葡萄糖非发酵、革兰阴性杆菌,在蛙类等动物中多见,在人类中较少见,主要引起下呼吸道感染,并可致肺炎。近年来,随着医院内发现米尔伊丽莎白菌感染病例越来越多,米尔伊丽莎白菌的防治越来越受到重视。由米尔伊丽莎白菌引... 详细信息

米尔伊丽莎白菌为葡萄糖非发酵、革兰阴性杆菌,在蛙类等动物中多见,在人类中较少见,主要引起下呼吸道感染,并可致肺炎。近年来,随着医院内发现米尔伊丽莎白菌感染病例越来越多,米尔伊丽莎白菌的防治越来越受到重视。由米尔伊丽莎白菌引起的各类感染时有报道,本文通过临床药师参与的1例重症肺炎患者治疗过程中检出米尔伊丽莎白菌,探讨米尔伊丽莎白菌的耐药情况及抗菌药物选择,为临床合理用药提供参考。

关键词：重症肺炎米尔伊丽莎白菌临床药师病例分析

米尔伊丽莎白菌诱导黑斑蛙巨噬细胞免疫应答的初步研究

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米尔伊丽莎白菌诱导黑斑蛙巨噬细胞免疫应答的初步研究

作者：艾单寒华中农业大学

学位级别：硕士

米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）可感染多种养殖和野生蛙类,引起蛙类“歪头病”,该病传染性强、致死率高,对我国蛙类养殖产业造成了较大的经济损失。然而,目前关于米尔伊丽莎白菌的致病机理及其与宿主的相互作用机制尚不清... 详细信息

米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）可感染多种养殖和野生蛙类,引起蛙类“歪头病”,该病传染性强、致死率高,对我国蛙类养殖产业造成了较大的经济损失。然而,目前关于米尔伊丽莎白菌的致病机理及其与宿主的相互作用机制尚不清楚,制约了相关病害防控工作的开展。巨噬细胞是蛙类免疫系统的重要防线,可通过吞噬、分泌炎性因子等多种方式杀伤入侵机体的病原菌。为揭示米尔伊丽莎白菌与宿主蛙的互作关系,本研究以黑斑蛙巨噬细胞为对象,建立米尔伊丽莎白菌感染黑斑蛙巨噬细胞的体外模型,通过超微结构观察、活性氧含量测定、转录组数据分析等方法探究米尔伊丽莎白菌诱导巨噬细胞免疫应答的途径,解析米尔伊丽莎白菌与巨噬细胞的相互作用机制,以期为蛙类“歪头病”防控提供理论基础。主要结果和结论如下:1,建立了黑斑蛙脾脏巨噬细胞的分离培养与鉴定方法。将黑斑蛙脾脏组织经100目细胞筛过滤,Percoll分离液梯度离心纯化后,利用完全培养基,在28℃条件下原代培养,并通过细胞形态学检查和功能验证进行鉴定。形态学鉴定结果显示,原代细胞具有伪足、吞噬小泡等巨噬细胞的典型特征,在培养1 d后汇合度达95%以上;功能验证实验结果显示,脂多糖（LPS）可显著诱导巨噬细胞超氧阴离子的生成（P＜0.01）,在LPS作用巨噬细胞24 h后,细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达均显著高于对照组（P＜0.01）;此外,所分离到的巨噬细胞具有吞噬功能,且对大肠杆菌（Escherchia coil）、无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）和米尔伊丽莎白菌的吞噬率分别为29.33%、21.54%、12.67%。2,体外感染实验表明米尔伊丽莎白菌可以诱导黑斑蛙巨噬细胞产生活性氧,并激活免疫相关信号通路。用米尔伊丽莎白菌感染黑斑蛙脾脏巨噬细胞,通过对凋亡率和活性氧的测定,发现米尔伊丽莎白菌能显著诱导巨噬细胞凋亡（P＜0.01）,被感染的巨噬细胞会产生活性氧,且随着感染时间的增加,活性氧的含量先升高后降低;对米尔伊丽莎白菌感染3 h后的巨噬细胞进行转录组测序分析,共获得2839个差异基因,其中上调基因1126个,下调基因1713个,通过差异基因富集分析,筛选到24条与免疫相关的信号通路,其中差异最显著的为NOD-like受体信号通路、IL-17信号通路、C型凝集素受体信号通路、RIG-I样受体信号通路等。转录组学数据揭示了相关信号通路在黑斑蛙巨噬细胞的免疫应答中发挥了关键作用,为研究米尔伊丽莎白菌与宿主蛙的相互作用机制提供了参考。

关键词：米尔伊丽莎白菌黑斑蛙脾脏巨噬细胞原代培养免疫应答

米尔伊丽莎白菌快速分子检测方法的建立与应用

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米尔伊丽莎白菌快速分子检测方法的建立与应用

作者：张琦华中农业大学

学位级别：硕士

米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)是一种临床新兴的条件致病菌,可造成新生儿和免疫缺陷人群菌血症、尿路感染等,近年来,被报道可引起蛙类歪头、白内障及内脏出血等症状,导致蛙出现暴发性死亡。米尔伊丽莎白菌感染对我国蛙类养... 详细信息

米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)是一种临床新兴的条件致病菌,可造成新生儿和免疫缺陷人群菌血症、尿路感染等,近年来,被报道可引起蛙类歪头、白内障及内脏出血等症状,导致蛙出现暴发性死亡。米尔伊丽莎白菌感染对我国蛙类养殖业造成了巨大的经济损失。同时,该菌也可作为一种潜在的人畜共患菌,对人类健康具有潜在威胁。因此,建立一种准确、快速的米尔伊丽莎白菌检测方法对米尔伊丽莎白菌感染引发病害的诊断及防控措施的建立均具有重要意义。本研究以米尔伊丽莎白菌为研究对象,建立双重PCR和荧光定量PCR检测方法,以期为米尔伊丽莎白菌感染的早期检测及流行病学调查提供技术支持。1.米尔伊丽莎白菌双重PCR检测方法的建立:分别以伊丽莎白菌的PNGase F基因、米尔伊丽莎白菌的ure G基因为分子靶标,设计两对扩增片段长度为1192 bp与246 bp的特异性引物,优化反应条件,并对其特异性、灵敏性进行评价。结果显示:该双重PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性。PNGase F基因引物仅对伊丽莎白菌属内物种出现了特异性扩增,而ure G基因引物仅能对米尔伊丽莎白菌进行特异性扩增;能检测到的基因组DNA最低浓度为4.76×10ng/μL。2.米尔伊丽莎白菌荧光定量PCR检测方法的建立:基于已有的米尔伊丽莎白菌FL160902全基因组(Gen Bank:CP040516),随机选取100个管家基因与伊丽莎白菌属各物种及常见细菌的对应基因进行同源性比较分析,以尽量保留具有较低相似度的基因为原则,得到27个候选分子靶标,用Oligo 7软件分别设计特异性引物。经PCR验证,最终筛选出mut T基因用于米尔伊丽莎白菌荧光定量PCR检测方法的建立。对5株米尔伊丽莎白菌和13株其他菌株进行特异性检测,并对检测方法的灵敏性、重复性进行评价。结果显示:该检测方法具有良好特异性,仅米尔伊丽莎白菌出现典型的S型扩增曲线,其他菌株无扩增或出现扩增曲线但Cq值大于35。该方法的标准质粒最低检测浓度为145 copies/μL,基因组DNA最低检测浓度为3.49×10ng/μL,比传统PCR检测方法灵敏100倍。该检测方法在3.50×10–3.50×10copies/μL内,组内变异系数在0.25–1.6%。;组间变异系数在0.48%–2.54%,具有良好重复性。3.双重PCR和荧光定量PCR检测方法的应用:采用伊丽莎白菌双重PCR方法检测了66株歪头病蛙分离株,并随机挑选部分菌株进行16S r DNA测序,用来验证双重PCR的检测结果。结果显示:66株歪头病蛙分离株中,63株特异性扩增出PNGase F和ure G基因,随机挑选的5株阳性菌株16S r DNA测序结果为米尔伊丽莎白菌,而3株阴性菌株经16S r DNA测序证实为其他物种。利用建立的荧光定量PCR检测方法和传统分离鉴定方法对来自四个有发病史养殖场的27只黑斑蛙的54份组织样品进行检测,对结果进行比较。结果显示:荧光定量PCR检测方法共检测出52份米尔伊丽莎白菌阳性组织样品,传统分离鉴定方法共检测出35份米尔伊丽莎白菌阳性组织样品,所有荧光定量PCR检测方法阴性组织样品传统分离鉴定方法检测均为阴性,无荧光定量PCR检测阴性而传统分离鉴定法检测阳性的情况。

关键词：米尔伊丽莎白菌双重PCR 荧光定量PCR 特异性检测

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牛蛙源米尔伊丽莎白菌的分离鉴定与药敏试验

水产学杂志 2023年第4期36卷 83-88页

作者：向圣汉赵雨贺彭治鑫李俊慧李伟长江大学生命科学学院湖北荆州434000

从湖北荆州江陵县患歪头白内障病的牛蛙(Rana catesbeiana)组织中分离病原菌,经生理生化分析和16S rRNA、gyrB基因序列测定鉴定病原菌,并经人工感染试验,进行药敏试验分析,研究其致病性和耐药性。结果显示,从患病牛蛙脑组织中分离纯化... 详细信息

从湖北荆州江陵县患歪头白内障病的牛蛙(Rana catesbeiana)组织中分离病原菌,经生理生化分析和16S rRNA、gyrB基因序列测定鉴定病原菌,并经人工感染试验,进行药敏试验分析,研究其致病性和耐药性。结果显示,从患病牛蛙脑组织中分离纯化到一株优势菌株Mir-N11,经鉴定为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)。攻毒试验证实:该分离株对牛蛙有较强的致病能力;该菌株对新霉素、庆大霉素、氯霉素等多种药物耐药,对米诺环素、哌拉西林、多西环素等药物敏感。生长特性试验表明:该分离菌株能产生胞外蛋白酶,不产生淀粉酶;在pH3.0~9.0范围内、盐度0.5%~2.5%范围内均可生长。该研究为牛蛙歪头白内障病害的防控提供了参考。

关键词：牛蛙米尔伊丽莎白菌分离鉴定药敏试验

患白内障病黑斑蛙米尔伊丽莎白菌的分离鉴定与PNGase基因克隆

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浙江农业学报 2023年第6期35卷 1297-1306页

作者：龚保荣吴红军李本镇徐大洋邹文腾曲君艺鲍传和朱若林安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为给安徽舒城地区患白内障病黑斑蛙(Pelophylax nigromaculatus)提供治疗方案,对病蛙进行了细菌分离、鉴定和药敏检测。从典型患病黑斑蛙的肝脏、眼睛、脑和脊柱中分离出4株优势菌株,经16S rRNA和gyrB基因序列分析,结合生理生化鉴定,结... 详细信息

为给安徽舒城地区患白内障病黑斑蛙(Pelophylax nigromaculatus)提供治疗方案,对病蛙进行了细菌分离、鉴定和药敏检测。从典型患病黑斑蛙的肝脏、眼睛、脑和脊柱中分离出4株优势菌株,经16S rRNA和gyrB基因序列分析,结合生理生化鉴定,结果表明,4株菌株均为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)。对分离菌的N-糖苷酶(PNGase)基因进行了克隆和分析,结果显示,其包含PNGase F和PNGase F-Ⅱ两种类型,进化分析结果同样显示,其与米尔伊丽莎白菌聚为一支,表明PNGase基因序列可作为伊丽莎白菌属内部菌分类的参考依据。药敏试验结果显示,4株分离株仅对酰胺醇类中的氟苯尼考敏感,对香豆素类中的新生霉素、大环内酯类中的红霉素和利福霉素类中的利福平等3种抗生素中介,而对测试的其他14种抗生素耐药。实验结果为伊丽莎白菌属细菌的分类鉴定提供了参考方法,且为黑斑蛙细菌病防治提供参考依据。

关键词：黑斑蛙米尔伊丽莎白菌 16S rRNA gyrB N-糖苷酶药敏试验

蛙源米尔伊丽莎白菌capD和wzy基因在细菌荚膜多糖合成及致病性中的功能研究

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蛙源米尔伊丽莎白菌capD和wzy基因在细菌荚膜多糖合成及致病性中...

作者：余芳华中农业大学

学位级别：硕士

米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola,EMi)是一种多重耐药的条件致病菌,可感染人和蛙类,其导致的蛙脑膜炎败血症(俗称“歪头病”)是危害我国养殖蛙类最严重的病害之一。目前关于该菌的致病机制及其相关毒力因子尚不清楚,限制了我... 详细信息

米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola,EMi)是一种多重耐药的条件致病菌,可感染人和蛙类,其导致的蛙脑膜炎败血症(俗称“歪头病”)是危害我国养殖蛙类最严重的病害之一。目前关于该菌的致病机制及其相关毒力因子尚不清楚,限制了我们对病害防控措施的制定及相关药物和疫苗的研发。荚膜多糖(capsule polysaccharide,CPS)是细菌重要的毒力因子,在菌体抵抗宿主免疫过程中发挥着重要作用。实验室前期获得了EMi分离株FL160902的全基因组,本研究以其多糖合成蛋白基因capD和聚合酶基因wzy为研究对象,利用同源重组法分别构建了两个基因的单缺失株,研究了capD和wzy基因在米尔伊丽莎白菌生物学性状和致病性中的功能,解析了CPS作为重要毒力因子在EMi致病过程中的作用机制。主要研究结果和结论如下:一、解析了EMi CPS合成基因簇的结构,鉴定了capD和wzy基因,并构建了两个基因的单缺失株。EMi的CPS基因簇两端高度保守,中间区域呈现较高的多样性;基因簇保守区包括wza,wzc,capD等特征基因,可变区包括wzx,wzy等血清型特异基因。通过同源重组法,利用壮观霉素抗性基因替换目的基因,构建了capD基因缺失株(△capD)和wzy基因缺失株(△wzy),为后续研究菌株的生物学性状和致病性提供了实验材料。二、capD或wzy基因缺失影响EMi荚膜和生物膜的形成,使菌株耐受性降低。为解析capD和wzy基因的生物学功能,开展了△capD和△wzy的生长特性、荚膜/生物膜形成、自凝集/耐干燥/抗氧化能力方面的研究。结果表明,△capD和△wzy的生长能力未受到影响,而荚膜形成受阻;生物膜合成量较野生株分别显著增加82.9%和145.7%(P菌量为1.54×10～5.89×10 copies/mg,均显著高于两个缺失株在对应组织中的平均载菌量(2.80×10～1.03×10 copies/mg,P白管型,肾小囊囊腔间隙扩张,而感染缺失株△capD或△wzy的黑斑蛙相应组织病变程度较轻。综上所述,EMi capD或wzy基因缺失影响了菌株荚膜的形成,降低了菌株的耐受性,导致细菌免疫逃逸能力减弱,对宿主的致病性降低。这为进一步研究EMi的致病机理和寻找有效治疗该菌感染的策略提供了重要参考。

关键词：米尔伊丽莎白菌荚膜多糖 capD wzy 致病性

牛蛙源米尔伊丽莎白菌的分离鉴定及其对宿主免疫应答的影响

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牛蛙源米尔伊丽莎白菌的分离鉴定及其对宿主免疫应答的影响

作者：向圣汉长江大学

学位级别：硕士

“歪头白内障病”是蛙类病害中常见病症,该病死亡率高、传染性强,给蛙类养殖造成了巨大损失。分离并鉴定致病病原对于该病的预防与治疗具有重要价值。本研究从湖北荆州江陵牛蛙养殖场患歪头白内障病的病蛙脑组织中分离纯化到了其病原菌... 详细信息

“歪头白内障病”是蛙类病害中常见病症,该病死亡率高、传染性强,给蛙类养殖造成了巨大损失。分离并鉴定致病病原对于该病的预防与治疗具有重要价值。本研究从湖北荆州江陵牛蛙养殖场患歪头白内障病的病蛙脑组织中分离纯化到了其病原菌N11菌株,经分子鉴定和全基因组测序确定为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola),回归感染实验确定该病原菌具有较强致病能力。随后,根据全基因组序列特定区段设计了三对特异性引物,建立了米尔伊丽莎白菌的三重PCR检测方法。最后,分析了病原菌感染对牛蛙免疫应答的影响。该论文对深入了解蛙类抗米尔伊丽莎白菌等细菌性病害的分子机制提供了参考资料。主要内容如下:(1)从患“歪头白内障病”的牛蛙脑组织中分离纯化到一株优势菌,通过形态学观察、生理生化试验、gyr B基因和16S r RNA基因序列比对及全基因组测序确定该菌株的分类地位。用回归攻毒试验分析该分离株对牛蛙的致病能力。药敏结果显示该菌株对新霉素、庆大霉素、氯霉素等多种药物耐药,对米诺环素、哌拉西林、多西环素等药物敏感。生长特性试验表明该分离菌株能产生胞外蛋白酶,不产生淀粉酶;在p H 3.0-9.0范围内、盐度0.5%-2.5%范围内均可生长。全基因组测序结果发现,该菌株为米尔伊丽莎白菌,命名为Mir-N11。全基因组共注释到105个毒力因子相关基因,主要与黏附、分泌系统相关;经抗性基因数据库(Comprehensive Antibiotic Research Database,CRDB)对菌株Mir-N11所有基因比对注释,结果显示有38个耐药相关基因,主要为四环素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物的耐药基因。将全基因序列上传数据至Gen Bank,所得菌株注册号为CP090369.1。(2)基于菌株Mir-N11的全基因组序列在基因编码区域(Gen Bank序列号分别为UIO96951.1,UIO97127.1,UIO96598.1)设计了三对特异性引物,EM02F/R(扩增片段长度473 bp),EM03c F/R(扩增片段长度870 bp),EM04c F/R(扩增片段长度617 bp),并对其特异性、灵敏性和准确性进行评价。结果显示三对PCR引物均可以特异性鉴别米尔伊丽莎白菌,且具有较好的检测灵敏度,能检测到的基因组DNA最低浓度为10ng/μL,该引物组合具有较好的临床应用价值。(3)分析了腹腔注射活性细菌和灭活细菌对牛蛙氧化应激反应及天然免疫相关酶系统的影响。牛蛙腹腔注射0.2 m L 10CFU/m L活细菌和等体积经福尔马林灭活的细菌后,在0、3、7、11、15、20、25和30 d取血清和肝组织,测定总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)和谷草转氨酶(GOT)等免疫指标。结果显示,活性细菌和灭活细菌注射均显著影响了牛蛙氧化应激反应和天然免疫相关酶活性。活菌和灭活菌注射导致血清和肝脏中T-AOC、SOD、GSH、MDA水平在初期均被不同程度的诱导或增强;活菌组血清中的T-AOC和SOD水平以及肝脏中SOD和GSH水平在后期出现波动。血清和肝脏中ACP、AKP、LZM、GOT指标都表现出不同程度的增强。采用q RT-PCR方法检测了病原菌感染对肝脏组织中免疫相关基因表达水平的影响,结果表明肝脏中髓样分化因子88(My D88)、核转录因子-65(NF-κB-65)、铁调素(Hepcidin)等免疫相关基因水平均被上调;白介素8(IL8)基因表达水平在肝脏中呈现先升高后降低的趋势;在感染末期,活菌组肝脏IL8基因表达水平被显著下调,而灭活组肝脏IL8基因表达水平恢复到正常水平。此外,通过肝脏组织病理切片对病原菌感染对组织结构的影响进行了分析。结果表明,活菌感染比灭活菌感染对肝脏损伤程度更严重,表现在活菌感染的肝脏出现更多的细胞核凝结和固缩,空泡化结构和炎性细胞浸润。(4)肠道菌群多样性测序结果显示,对照组和活菌组牛蛙肠道菌群在门类水平上主要包含放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidota)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)和蓝藻菌门(Cyanobacteria)等菌门。与对照组比较,活菌感染组肠道的梭杆菌门、变形菌门和拟杆菌门丰度显著降低;厚壁菌门和蓝藻菌门丰度上升。在属分类水平上,活菌组的鲸杆菌属(Cetobacterium)和稳杆菌属(Empedobacter)丰度显著低于对照组,乳球菌属(Lactococcus)和Chloroplast的丰度高于对照组。(5

关键词：牛蛙米尔伊丽莎白菌三重PCR 免疫指标转录组