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量子点标记结合电化学免疫检测黄曲霉毒素B1

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中国食品学报 2015年第11期15卷 165-169页

作者：朱浩嘉潘道东顾愿愿李建龙赵紫微丁琳宁波大学海洋学院浙江宁波315211

将量子点标记技术与电化学检测技术相结合，基于竞争免疫分析，成功构建黄曲霉毒素B1（AFBl）检测新方法。以水相合成PbS量子点，通过TEM成像、XRD对其进行表征。随后以量子点标记AFB1单克隆抗体作为信号探针，基于酶标板表面AFB1人工... 详细信息

将量子点标记技术与电化学检测技术相结合，基于竞争免疫分析，成功构建黄曲霉毒素B1（AFBl）检测新方法。以水相合成PbS量子点，通过TEM成像、XRD对其进行表征。随后以量子点标记AFB1单克隆抗体作为信号探针，基于酶标板表面AFB1人工抗原和样品中AFBI与量子点标记的AFBl单克隆抗体之间的竞争免疫结合，建立AFB1新型检测方法。在优化的条件下，方法线性范围0．1～30ng／mL，检测限0．03ng／mL。花生样品中加标回收试验结果表明，方法准确性良好，可用于实际样品的检测，为其它真菌毒素的检测提供参考。

关键词：黄曲霉毒素B1 电化学技术量子点竞争免疫分析检测

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微流控芯片免疫电泳分析方法研究进展

化学研究与应用 2013年第1期25卷 1-6页

作者：王孟孟张鸿雁李清岭周建华山东师范大学生命科学学院山东济南250014

介绍了微流控芯片的制作材料、常用的检测方法,分别讨论了利用动态修饰与静态修饰来解决免疫分析中蛋白质吸附问题,以及竞争免疫分析与非竞争免疫分析在微流控芯片上的应用,并对其发展作出了展望。

关键词：微流控芯片免疫电泳芯片修饰蛋白吸附竞争免疫分析非竞争免疫分析

磁分离结合CdTe发光量子点标记黄曲霉毒素B1免疫检测新方法

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食品与生物技术学报 2013年第3期32卷 258-264页

作者：李响李向丽谭贵良吴世嘉王周平江南大学食品学院江苏无锡214122 中山火炬职业技术学院广东中山528436 中山市质量计量监督检测所广东中山523290

将发光量子点标记技术与磁分离富集技术相结合，基于竞争免疫分析，成功构建了黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫检测新方法。首先合成了巯基丙酸包覆的CdTe发光量子点，同时采用水热法合成了氨基化磁性纳米粒子．通过TEM成像、荧光光谱、XRD、... 详细信息

将发光量子点标记技术与磁分离富集技术相结合，基于竞争免疫分析，成功构建了黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫检测新方法。首先合成了巯基丙酸包覆的CdTe发光量子点，同时采用水热法合成了氨基化磁性纳米粒子．通过TEM成像、荧光光谱、XRD、红外光谱等分别对其进行了表征。随后以AFB1人工抗原功能化磁性纳米粒子作为捕获探针，以发光量子点标记免疫球蛋白C（二抗）作为信号探针，基于磁性纳米粒子表面AFB1人工抗原和样品中AFBl与AFB1单克隆抗体之间的竞争免疫结合，建立了AFB1新型检测方法。实验优化条件下，荧光强度与黄曲霉毒素B。质量浓度在0．1～100ng／mL范围内呈良好的线性关系，检测限为0．03ng／mL。实际样品中加标回收实验结果表明．新方法准确性良好。

关键词：发光量子点磁分离竞争免疫分析黄曲霉毒素B1

DNA-纳米金探针法检测蛇足石杉内生真菌发酵液中石杉碱甲的含量

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分析科学学报 2023年第2期39卷 153-158页

作者：叶淑敏孙志文王彤颖宋煜张红艳余宇燕福建中医药大学药学院福建福州350122

本研究将DNA、酶和抗体修饰于纳米金颗粒表面制备纳米金探针,建立了DNA-纳米金探针检测石杉碱甲(HupA)的方法。以磁珠作为载体,将石杉碱甲完全抗原(HupA-OVA)标记在磁珠上,采用竞争免疫分析模式,发现HupA浓度在0.008~16 ng/mL范围内,抑... 详细信息

本研究将DNA、酶和抗体修饰于纳米金颗粒表面制备纳米金探针,建立了DNA-纳米金探针检测石杉碱甲(HupA)的方法。以磁珠作为载体,将石杉碱甲完全抗原(HupA-OVA)标记在磁珠上,采用竞争免疫分析模式,发现HupA浓度在0.008~16 ng/mL范围内,抑制率(I)与HupA浓度的对数值(lg c)呈良好的线性关系,线性方程为I=0.3006 lg c+0.6142,线性相关系数为0.9952,检测限为19.41 pg/mL。应用该方法对蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA进行了检测,加标回收率为99.33%~103.73%,相对标准偏差(RSD,n=3)为1.70%~4.67%。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单,可用于蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA含量的检测。

关键词：纳米金磁珠石杉碱甲蛇足石杉竞争免疫分析

铁蛋白笼为模板合成纳米颗粒在免疫分析中的应用

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铁蛋白笼为模板合成纳米颗粒在免疫分析中的应用

作者：张欣颖武汉工程大学

学位级别：硕士

纳米颗粒作为生物标记探针,用来分析生命体系中痕量物质,可以在单细胞水平和单分子水平上获得生物化学信息,对于了解生物分子的结构、功能,阐明疾病的生理病理,疾病的早期诊断都具有十分重要的意义。电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）具... 详细信息

纳米颗粒作为生物标记探针,用来分析生命体系中痕量物质,可以在单细胞水平和单分子水平上获得生物化学信息,对于了解生物分子的结构、功能,阐明疾病的生理病理,疾病的早期诊断都具有十分重要的意义。电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）具有灵敏度高、准确度高、多元素同时分析的优势,在痕量及超痕量元素检测中发挥了巨大的作用,在生化分析方面也具有很大的应用潜力。本文利用ICP-MS对生物组织样品进行元素成像分析;合成了纳米颗粒标签,并建立了基于ICP-MS的竞争免疫分析方法,测定血清中铁蛋白的含量。为今后应用ICP-MS对生物组织定量成像分析奠定基础。这种方法的建立将在疾病的快速诊断、蛋白质组学、金属组学等邻域中有广阔的应用前景。论文的主要工作如下:***-ICP-MS具有空间分辨率好、检出限好、运行成本低、具有原位分析样品的能力等优点。本文建立了LA-ICP-MS的元素原位成像方法,利用LA-ICP-MS原位分析了小鼠鼠脑切片中的Fe、Cu、Zn分布情况进行分析;还分析对暴露金纳米颗粒后的单细胞内,得到了到细胞中的Au、Mg的元素成像,与单细胞的光学成像对比验证。LA-ICP-MS将有望作为其他生物成像技术的有力补充,在生物医学研究中得到更广泛的应用,发挥更重要的作用。2.以去铁铁蛋白为模板,合成稀土纳米颗粒,作为元素标签。这种元素标签具生物相容性好、无毒性等优点,与已有的元素标签相比,不仅提高了标记率,而且提高了信号强度,从而提高了免疫分析的灵敏度。应用这种元素标签,建立了基于LA-ICP-MS的竞争免疫分析方法,对血清中铁蛋白含量进行了测定。与常规的分析方法相比,该方法具有较宽的线性范围,较好的检出限。

关键词：激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱生物元素成像纳米颗粒竞争免疫分析

基于竞争免疫法和表面增强拉曼光谱检测沙丁胺醇的研究

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基于竞争免疫法和表面增强拉曼光谱检测沙丁胺醇的研究

作者：宗怡苏州大学

学位级别：硕士

小分子抗原或半抗原缺乏足够的结合位点，限制了传统“抗体-抗原-抗体”三明治结构的应用，因此可以采用竞争免疫法进行检测。由于表面增强拉曼光谱（SERS）是一种具有极高灵敏度的光谱分析技术，它为深入表征表面结构和过程提供了分子... 详细信息

小分子抗原或半抗原缺乏足够的结合位点，限制了传统“抗体-抗原-抗体”三明治结构的应用，因此可以采用竞争免疫法进行检测。由于表面增强拉曼光谱（SERS）是一种具有极高灵敏度的光谱分析技术，它为深入表征表面结构和过程提供了分子水平的信息，也为生物医学方面的应用开拓了新的局面。将竞争免疫分析法、SERS检测技术、磁性核壳纳米粒子、微流控芯片技术等相结合，构建基于SERS的新型磁免疫分析技术，实现了沙丁胺醇的特异性高灵敏度检测。本文主要开展了以下研究：（1）发展了基于SERS标记免疫法检测沙丁胺醇的新型手段。利用沙丁胺醇分子与固相基底上的沙丁胺醇包被抗原竞争标记免疫金纳米粒子，通过标记分子SERS信号的强弱，对沙丁胺醇的浓度进行判断，研究表明该技术具有极高特异性和灵敏度，其极限浓度约100fg/mL，为实现沙丁胺醇的痕量检测提供了有效便捷的途径。（2）建立基于SERS的竞争磁免疫分析方法，开发与微流控芯片结合的在线检测技术，实现沙丁胺醇的快速高灵敏度检测。制备功能化的免疫Fe3O4@Au磁性核壳纳米粒子，实现液相磁免疫分析，通过微流控芯片在线富集的检测灵敏度为10ng/mL，该联用技术为基于SERS和竞争磁免疫分析的超高灵敏度检测开辟了有效途径。（3）探索了激光诱导对巯基苯甲酸分子脱羧生成苯硫酚的催化反应。发挥表面等离激元催化和光学增强双重作用，将SERS技术发展为表面催化反应过程追踪的现场手段。系统研究了溶液pH值、SERS基底、激光功率和波长等因素对表面催化脱羧反应的影响，研究表明该反应在碱性溶液中，在表面等离激元作用下可快速发生脱羧反应，初步提出了激光诱导脱羧反应的机理，为开发通过脱羧反应进行有机合成的新途径提供了实验依据。

关键词：表面增强拉曼光谱竞争免疫分析磁性核壳纳米粒子微流控芯片表面催化反应

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竞争免疫表面增强拉曼光谱检测黄曲霉素B1

竞争免疫表面增强拉曼光谱检测黄曲霉素B1

作者：房聪维苏州大学

学位级别：硕士

黄曲霉毒素(AFs)是一类由粮食霉变产生的毒素,其中黄曲霉素B(AFB)是毒性最强且在受污食品中含量最高的,被列为一级致癌物。通常AFB在粮食的生产和储存过程中无法完全避免,因此亟待建立一种快速、高灵敏度和有效的监测方法。通过结合免... 详细信息

黄曲霉毒素(AFs)是一类由粮食霉变产生的毒素,其中黄曲霉素B(AFB)是毒性最强且在受污食品中含量最高的,被列为一级致癌物。通常AFB在粮食的生产和储存过程中无法完全避免,因此亟待建立一种快速、高灵敏度和有效的监测方法。通过结合免疫技术的高特异性,磁场的富集功能以及表面增强拉曼光谱(SERS)的极高灵敏度,发展了基于SERS的竞争磁免疫检测技术,实现了黄曲霉素B的高灵敏度检测。本文主要结果如下:(1)探索SERS性质以及磁富集功能集成的二元复合纳米粒子的制备技术,获得了超顺磁性球状FeO和铁磁性球状Ni纳米粒子,通过种子生长法在磁性内核表面包裹连续的Au膜,最终得到兼具良好SERS活性和磁性能的核壳FeO@Au和球状Ni@Au二元复合纳米粒子。(2)优化固相基底上基于SERS的竞争免疫检测方法。通过在固相基底表面修饰包被抗原以及Au表面修饰SERS标记和固定抗体,实现固相基底与待测AFB与免疫Au纳米粒子的竞争反应,实现AFB的识别和检测,发现其IC50为1.27 ng·mL,为黄曲霉素B的检测提供了一条有效的途径。(3)发展溶液中基于SERS竞争磁免疫方法用于黄曲霉素B的检测。优化纳米粒子的表面修饰和功能化过程,实现SERS标记分子、AFB抗体和包被抗原的高效固定。通过待测物AFB及包被抗原与抗体间的竞争免疫反应,利用磁场富集免疫复合物及SERS技术实现溶液中待测物含量的测定。结果表明检测灵敏度与复合粒子的磁性有关,发现利用FeO@Au和Ni@Au为免疫基底的IC50分别为143.85 fg·mL和27.10 fg·mL,其较固相基底方法具有更高灵敏度,且该检测结果与常规LC-MS检测方法基本一致,此技术有望用于食品等AFB污染物的实际检测中。

关键词：表面增强拉曼光谱竞争免疫分析磁性纳米粒子固相基底镍

基于噬菌体展示多肽的噻虫胺和吡虫啉免疫分析方法研究

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基于噬菌体展示多肽的噻虫胺和吡虫啉免疫分析方法研究

作者：尤天阳南京农业大学

学位级别：硕士

噻虫胺和吡虫啉均属于新烟碱类杀虫剂,通过与昆虫烟碱乙酰胆碱受体结合,干扰昆虫正常神经传导,引起其死亡。由于高效、广谱、内吸性好等特点,噻虫胺和吡虫啉被广泛应用于谷物、蔬菜、水果等作物上有害生物的防治。多项研究表明,噻虫胺... 详细信息

噻虫胺和吡虫啉均属于新烟碱类杀虫剂,通过与昆虫烟碱乙酰胆碱受体结合,干扰昆虫正常神经传导,引起其死亡。由于高效、广谱、内吸性好等特点,噻虫胺和吡虫啉被广泛应用于谷物、蔬菜、水果等作物上有害生物的防治。多项研究表明,噻虫胺、吡虫啉对哺乳动物、鸟类、水生生物均存在慢性毒性,对非靶标昆虫尤其是蜜蜂存在较强的毒性,已于2018年被欧盟各国禁止在户外使用。因此,对农产品和环境中残留的噻虫胺、吡虫啉进行检测,对保障农产品质量安全、生态环境安全和人类健康具有重要意义。仪器分析是噻虫胺、吡虫啉检测的标准方法,灵敏度高、稳定性好,但前处理复杂、无法进行现场快速检测。基于抗体-抗原特异性反应的免疫分析技术具有快速、简便、灵敏、成本低等优势,适用于高通量和现场检测,可作为仪器分析方法的补充,在农药残留检测领域有着广阔的应用前景。然而,现有噻虫胺和吡虫啉的免疫分析方法还存在以下问题:（1）噻虫胺现有免疫分析方法的灵敏度还有待提高;（2）由于新烟碱类农药的结构较为相似,导致现有噻虫胺和吡虫啉的免疫分析方法对其他新烟碱类农药普遍存在交叉反应,影响了免疫分析方法的实际应用效果。针对该问题,本论文利用噬菌体展示技术构建了pⅧ展示噬菌粒载体p Comb-pⅧ和噬菌体展示随机环状八、九、十肽库,通过固相淘选的方法筛选到了可替代人工抗原的模拟表位和抗免疫复合物多肽,并分别建立了噻虫胺、吡虫啉的竞争和非竞争噬菌体酶联免疫吸附分析方法（Phage Enzyme Linked Immunosorbent Assay,Phage-ELISA）,提高了免疫分析方法的灵敏度和特异性。主要研究成果如下:1.在p Comb3xss噬菌粒载体的基础上,构建了p Comb-pⅧ噬菌粒载体,并引入了无法切割随机多肽编码序列的限制性核酸酶切位点,避免了随机多肽库多样性的丢失。p Comb-pⅧ载体将外源蛋白展示于丝状噬菌体pⅧ蛋白N端,通过柔性连接臂GGGSS将二者连接。基于该噬菌粒载体构建了随机环状八、九、十肽库,实际库容量分别为9.17×10～8、4.38×10～8和6.97×10～8。测序结果表明多肽库中脱氧核苷酸、氨基酸实际分布频率与理论分布频率接近,具有良好的随机性和多样性,能够满足后续淘选研究的需求。2.利用噻虫胺、吡虫啉抗体及其免疫复合物对构建的随机多肽库进行了淘选,共获得28种噻虫胺模拟表位多肽,含共同特征氨基酸序列DPXG;2种抗噻虫胺免疫复合物多肽,氨基酸序列分别为CAVFTDQWWTGC（2-9-D）和CSPESHWPQVLC（2-9-G）;30种吡虫啉模拟表位多肽,含共同特征氨基酸序列TPAG;2种不同的抗吡虫啉免疫复合物多肽,氨基酸序列分别为CWCIEDCSNC（2-1-A）和CVWDGDVGIMYC（2-1-H）,为噻虫胺和吡虫啉的竞争和非竞争免疫分析方法的建立提供了核心试剂。3.噻虫胺模拟表位多肽2-5-G（CWLTPVGELVC）及抗免疫复合物多肽2-9-D（CAVFTDQWWTGC）在Phage-ELISA中灵敏度最佳,分别用于建立了噻虫胺的竞争和非竞争Phage-ELISA。噻虫胺竞争Phage-ELISA在最佳工作缓冲液下（Na浓度0.3mol/L,p H=6.0,甲醇含量5%）的抑制中浓度(IC)为3.83 ng/m L,最低检测限(IC)为1.11 ng/m L,检测范围(IC-IC)为1.11-13.20 ng/m L,灵敏度比使用相同抗体的传统间接竞争ELISA(IC=44.6 ng/m L)提高了11.6倍,与吡虫啉、氯噻啉和烯啶虫胺分别存在2.6%、18.2%、3.6%的交叉反应;噻虫胺非竞争Phage-ELISA在最佳工作缓冲液下（Na浓度1.2 mol/L,p H=7.4,甲醇含量1.25%）的饱和中浓度(SC)为0.45 ng/m L,最低检测限(SC)为0.26 ng/m L,检测范围(SC-SC)为0.26-0.76 ng/m L,与其他新烟碱类农药均不存在交叉反应,灵敏度比使用相同抗体的传统间接竞争ELISA(IC=27.7 ng/m L)提高了61.6倍,是目前已知灵敏度最高、特异性最好的噻虫胺免疫分析方法。竞争和非竞争Phage-ELISA在稻田水、土壤、糙米、马铃薯等基质中的平均添加回收率分别为73.8%-104.1%和76.6%-102.2%,相对标准偏差分别为1.5%-11.0%和2.9%-10.7%。两种方法对未知浓度梨、土壤样品的检测结果与液相色谱的结果具有良好的相关性。相关结果表明所建方法的灵敏度和准确性能够满足农产品及环境样品中噻虫胺的残留检测。4.吡虫啉模拟表位多肽1-9-H（CVPTPAGDFC）和抗免疫复合物多肽2-1-H（CVWDGDVGIMYC）在Phage-ELISA中灵敏度最佳,分别用于建立了吡

关键词：噻虫胺吡虫啉噬菌体展示竞争免疫分析非竞争免疫分析