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布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶对胚胎滋养层细胞的致炎作用

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微生物学报 2012年第8期52卷 1040-1048页

作者：王震张辉张艳郭飞张豫陈瑞花孟茹李志强张倩陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000

【目的】本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化,探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能。【方法】本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PGM蛋... 详细信息

【目的】本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化,探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能。【方法】本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PGM蛋白感染胚胎滋养层细胞,通过细胞形态学的观察和酶联免疫反应检测其对细胞的损伤作用以及细胞因子的变化。【结果】本实验获得了纯化的PGM蛋白,成功构建了pgm基因缺失株,采用该基因缺失株免疫小鼠后,采集血液分离血清,虎红平板实验和试管凝集实验结果显示为阴性;pgm缺失株和PGM蛋白感染HPT-8细胞均能诱发贴壁细胞脱落;而且pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞的能力较M5-90明显降低。pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于M5-90对照组,差异极显著(P<0.01),而细胞因子IL-10的分泌变化不明显,PGM蛋白感染HPT-8细胞时,其细胞因子LDH表达水平高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01),而IL-6、IL-10和TNF-α的表达水平明显低于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。【结论】本研究表明,PGM蛋白和pgm缺失株可致胚胎滋养层细胞损伤,且引发滋养层细胞细胞因子的表达变化,为进一步研究布鲁氏菌感染宿主细胞的分子机制奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶 HPT-8

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长治医学院学报 2020年第3期34卷 222-226页

作者：蒋淑娟郑州市第一人民医院 450000

目的:探讨β2-微球蛋白(β2M)、糖化血红蛋白(HbA1c)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)联合检测诊断冠心病(CHD)的价值。方法:选择135例CHD患者为CHD组,另选择本院同期健康体检者70例作为对照组,收集血液样本,放射... 详细信息

目的:探讨β2-微球蛋白(β2M)、糖化血红蛋白(HbA1c)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)联合检测诊断冠心病(CHD)的价值。方法:选择135例CHD患者为CHD组,另选择本院同期健康体检者70例作为对照组,收集血液样本,放射免疫法检测β2M,免疫比浊法检测HbA1c,酶联免疫吸附法检测Lp-PLA2、PGM,采用Logistics回归分析CHD发生的相关因素,采用ROC分析诊断试验的灵敏度和特异度。结果:CHD组血清β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平均显著高于对照组(P<0.05);Logistics回归分析显示,高水平β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM是发生CHD的危险因素;β2M(临界值2.65μg·mL^-1)、HbA1c(临界值5.00%)、Lp-PLA2(临界值197.20 ng·mL^-1)、PGM(临界值34.52 U·L^-1)联合检测诊断CHD的AUC为0.949,准确度为95.12%,灵敏度为95.56%,特异度为94.29%,均明显高于单项检测。结论:CHD患者β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平显著升高,联合检测诊断CHD的准确度和灵敏度更高。

关键词： β2-微球蛋白糖化血红蛋白脂蛋白相关磷脂酶A2 磷酸葡萄糖变位酶冠心病

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微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展

安徽农业科学 2013年第7期41卷 2821-2822,2825页

作者：刘连中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室湖北武汉430072 中国科学院大学北京100049

从磷酸葡萄糖变位酶对碳代谢和细菌细胞形态的影响、细菌致病性、在细菌高效产氢中的作用、细菌脂多糖生物合成中的作用和维持酵母细胞内Ca2+平衡的作用等方面,介绍了微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展。

关键词：磷酸葡萄糖变位酶葡萄糖-1-磷酸葡萄糖-6-磷酸

溶组织内阿米巴和dispar内阿米巴磷酸葡萄糖变位酶的分子和生化特性

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国际医学寄生虫病杂志 1998年第4期25卷 189-190页

作者：周慧娟

近来,溶组织内阿米巴(E.h.)和dispar内阿米巴(Entamoeba dispar,E.d.)被认定为是两个不同的种,前者可引起侵袭性肠阿米巴病和/或肝脓肿,是致病种;后者虽然与之形态相似,但是非侵袭性的,是非致病种。区别两者的金指标,是采用磷酸葡萄糖... 详细信息

近来,溶组织内阿米巴(E.h.)和dispar内阿米巴(Entamoeba dispar,E.d.)被认定为是两个不同的种,前者可引起侵袭性肠阿米巴病和/或肝脓肿,是致病种;后者虽然与之形态相似,但是非侵袭性的,是非致病种。区别两者的金指标,是采用磷酸葡萄糖变位酶、己糖羰基酸酶同工酶电泳进行区别,但有

关键词：溶组织内阿米巴 dispar 磷酸葡萄糖变位酶分子

淋巴细胞磷酸葡萄糖变位酶和肌酸激酶同功酶的联合研究可早期证实骨髓植入

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国际内科学杂志 1986年第9期 418-419页

作者：李国帅蒋复高

尽快证实供者骨髓是否植入,具有实践和理论意义。染色体标记在骨髓输注后2～3周左右可证实植入,而红细胞酶或抗原通常要延迟至90天左右。本文测定两种不同的淋巴细胞酶,即磷酸葡萄糖变位酶(phospho-glucomutase,PGM)和肌酸激酶(AK)同功... 详细信息

尽快证实供者骨髓是否植入,具有实践和理论意义。染色体标记在骨髓输注后2～3周左右可证实植入,而红细胞酶或抗原通常要延迟至90天左右。本文测定两种不同的淋巴细胞酶,即磷酸葡萄糖变位酶(phospho-glucomutase,PGM)和肌酸激酶(AK)同功酶,作为早期证实供者骨髓植入和建立嵌合体较为完整特性的方法。接受本研究的25对 HLA 相同的供受者中,17例为急性白血病,7例再生障碍性贫血,1例慢性粒

关键词：肌酸激酶 PGM 丙酮酸激酶同功酶淋巴细胞白细胞磷酸葡萄糖变位酶骨髓造血系统

用等电聚焦法来检测群体基因频率（Gc）、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）、转铁蛋白（Tf）和α1-抗胰蛋白酶（Pi）亚型的群体分布

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国际检验医学杂志 1986年第1期 19-22页

作者：陈克力

从本世纪初叶到中叶,人们对红细胞抗原的多形性作了大量研究。1949年,Pauling等用电泳技术发现了血红蛋白S,并用以对血清蛋白和红细胞酶中的许多遗传变异型作出了鉴定。Lewonton估计,人的基因位点的30%可能是多形性的。后来有人指出,三... 详细信息

从本世纪初叶到中叶,人们对红细胞抗原的多形性作了大量研究。1949年,Pauling等用电泳技术发现了血红蛋白S,并用以对血清蛋白和红细胞酶中的许多遗传变异型作出了鉴定。Lewonton估计,人的基因位点的30%可能是多形性的。后来有人指出,三个主要人种的平均杂合性是近似相同的。与此同时,人们在等电聚焦技术方面进行了大量的研究。根据等电点的微小差异(小至

关键词： PGM Pi Tf Gc 转铁蛋白磷酸葡萄糖变位酶基因频率亚型等电聚焦

小桐子磷酸葡萄糖变位酶cPGM与pPGM基因的克隆及原核表达分析

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华北农学报 2021年第4期36卷 23-30页

作者：王海波李芙蓉杨金翠高永郭俊云曲靖师范学院生物资源与食品工程学院云南曲靖655011 曲靖师范学院云南省高校云贵高原动植物遗传多样性及生态适应性进化重点实验室云南曲靖655011

为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小... 详细信息

为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小桐子不同器官与低温条件下的表达特性,同时,构建了pGEX-4T-1-JccPGM与pGEX-4T-1-JcpPGM原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达分析。结果表明:两者分别编码582,637 aa的蛋白质。聚类分析表明,小桐子pPGM在其N端包含叶绿体定位信号肽,而cPGM较pPGM多4段肽链序列-^(108)VGVDGS^(113)-、-^(183)SGPE^(186)-、-^(283)GKSNSE^(288)-、-^(470)SLGEVN^(475)-。qRT-PCR表达分析显示,小桐子cPGM与pPGM基因都在叶片中高表达,而在根与种子中表达量较低。通过BL21(DE3)诱导表达,分别得到90.7,97.0 ku的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。综上所述,本研究为开展小桐子cPGM与pPGM基因表达蛋白的功能分析以及其在蔗糖与淀粉积累、逆境应答中的机制研究奠定了基础。

关键词：小桐子磷酸葡萄糖变位酶基因克隆原核表达

杨树桑黄多糖合成代谢相关基因挖掘及高产菌株的筛选

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杨树桑黄多糖合成代谢相关基因挖掘及高产菌株的筛选

作者：徐丛涛牡丹江师范学院

学位级别：硕士

杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)含有丰富的活性物质,其多糖是杨树桑黄的主要成分,具有抗肿瘤、抗氧化等多种功效。长期以来杨树桑黄多糖的获取主要采用菌丝体发酵的形式,并辅以发酵参数优化及外源添加诱导物的方式提高多糖产量。目前... 详细信息

杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)含有丰富的活性物质,其多糖是杨树桑黄的主要成分,具有抗肿瘤、抗氧化等多种功效。长期以来杨树桑黄多糖的获取主要采用菌丝体发酵的形式,并辅以发酵参数优化及外源添加诱导物的方式提高多糖产量。目前,随着杨树桑黄基因组测序的完成为我们在分子水平上构建杨树桑黄多糖高产菌株提供了可能,并且可以通过测定多糖代谢通路中多种关键基因的表达量变化,为研究杨树桑黄多糖代谢途径提供参考。本文首次对杨树桑黄多糖生物合成途径中的磷酸葡萄糖变位酶(phosphoglucomutase pgm)与磷酸葡萄糖异构酶(Phosphoglucose isomerase pgi)两个关键酶基因的功能进行研究,并筛选获得了桑黄多糖高产菌株。主要研究结果如下:1.分子克隆获得杨树桑黄Svpgm基因序列,构建过表达和干扰载体。农杆菌介导转化菌丝筛选转化子,然后对Svpgm开展功能分析。Svpgm基因的c DNA长1 353 bp,编码451个氨基酸,是一种稳定的亲水性蛋白。Svpgm过表达菌株胞外多糖含量相对野生型菌株分别提高了7.72%和15.15%,胞内多糖含量相对野生型分别降低了22.72%和36.14%;Svpgm干扰菌株胞外多糖含量相对野生型分别减少了22.72%和36.14%,胞内多糖含量相对野生型分别提高了33.68%和38.24%。菌丝长速与生物量也发生显著变化,干扰菌株与野生型相比菌落直径分别减小了14.83%和17.86%,菌丝生物量分别减少了19.76%和33.95%;过表达菌株与野生型相比菌落直径分别增大了12.14%和13.61%,菌丝生物量分别增加了83.48%和126.65%。酶活性分析显示与野生型相比,过表达菌株酶活性分别提高了16.00%和24.31%;干扰菌株酶活性分别降低了37.72%和42.28%。此外还对催化的两种中间代谢产物含量进行了测定,发现在杨树桑黄中Svpgm主要调控方向为G-1-P向G-6-P之间的相互转化,并能够影响细胞壁组分中几丁质和β-葡聚糖含量,过表达菌株中几丁质含量分别降低了28.98%和42.72%,β-葡聚糖含量分别升高了38.89%和49.17%;干扰菌株中几丁质含量分别升高了78.74%和89.26%,β-葡聚糖含量分别降低了8.25%和18.46%。葡萄糖流向不同的代谢分支,导致单糖组成发生变化。提取菌丝体多糖,并对抗氧化活性进行比较,发现在测定浓度范围内,抗氧化活性与多糖浓度呈正比,且与野生型相比干扰菌株的抗氧化活性显著增强,而过表达菌株则受到抑制,抗氧化活性显著降低。对上下游相关基因表达量测定,pgi在过表达菌株中上调表达,UGPase、ugdh、uxs在干扰菌株中上调表达,uge在所有转化子中都表现为下调趋势,以上结果说明Svpgm基因在杨树桑黄多糖代谢途径中发挥负调控作用。2.分子克隆获得杨树桑黄Svpgi基因序列,构建过表达和干扰载体。农杆菌介导转化菌丝筛选转化子,然后对Svpgi进行功能分析。Svpgi基因c DNA长1 659 bp,共编码553个氨基酸,是一种稳定的亲水性蛋白。Svpgi过表达菌株胞外多糖含量相对野生型菌株分别提高了30.18%和31.04%,胞内多糖含量相对野生型菌株分别降低了7.95%和13.60%;Svpgi干扰菌株胞外多糖含量相对野生型菌株分别提高了43.52%和47.78%,胞内多糖含量相对野生型菌株分别提高了49.70%和63.84%。Svpgi基因干扰表达时菌丝生长受到抑制,与野生型菌株相比菌落直径分别减小了9.50%和15.12%,菌丝生物量分别减少了50.92%和59.98%;当Svpgi基因过表达时,与野生型相比菌落直径分别增大了4.94%和8.19%,菌丝生物量分别增加了41.37%和47.62%。此外还对催化的两种中间代谢产物含量进行了测定,发现在杨树桑黄中Svpgi主要调控方向为G-6-P向F-6-P之间的相互转化。过表达菌株与干扰菌株的细胞壁构成具有相似的变化,其中几丁质含量在过表达菌株中分别升高了28.64%和34.94%,在干扰菌株中分别升高了10.17%和13.03%;β-葡聚糖含量在过表达菌株中分别降低了1.13%和2.30%,在干扰菌株中分别降低了27.25%和29.90%。葡萄糖在不同代谢分支的流向也受到影响,导致单糖组成和比例发生变化,其中半乳糖含量在胞内多糖中升高。对胞内多糖的抗氧化活性进行比较,结果显示不同处理组分间菌株抗氧化活性存在显著差异,转化子抗氧化活性强于野生型菌株。对上下游相关基因表达量测定,pfk、pmi在过表达菌株上调表达,pgm、UDPase、ugdh、uge在干扰菌株中上调表达,以上结果表明Svpgi基因在杨树桑黄多糖代谢途径中发挥负调控作用,但对于胞外

关键词：杨树桑黄多糖抗氧化活性代谢通路磷酸葡萄糖变位酶磷酸葡萄糖异构酶

灵芝多糖糖供体合成途径中关键酶的异源表达及其酶学性质

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微生物学通报 2019年第12期46卷 3233-3247页

作者：李阳赵丽婷顾正华李由然石贵阳丁重阳糖化学与生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122

【背景】灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)是一种具有多种生物活性的大分子物质,已有研究者通过发酵调控优化或菌种改良使灵芝多糖产量得到一定的提高。但由于灵芝多糖糖供体合成途径并未完全明晰,其中关键酶特性解析也... 详细信息

【背景】灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)是一种具有多种生物活性的大分子物质,已有研究者通过发酵调控优化或菌种改良使灵芝多糖产量得到一定的提高。但由于灵芝多糖糖供体合成途径并未完全明晰,其中关键酶特性解析也不完善,使得灵芝多糖产量的大幅度提高仍存在瓶颈。【目的】通过异源表达大量制备灵芝中含量较少的磷酸葡萄糖变位酶(Phosphoglucomutase,PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase,UGPG)和磷酸甘露糖异构酶(Phosphomannose isomerase,PMI),并分别探究和比较其酶学性质,深入了解灵芝多糖的糖供体合成途径中关键酶的特性信息,为灵芝多糖合成发酵策略的高效制定提供依据。【方法】以灵芝菌株CGMCC5.26的c DNA为模板,克隆得到关键酶基因gl-pgm、gl-ugpg和gl-pmi,分别在E. coli BL21(DE3)中诱导表达,产物通过Co-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究。【结果】纯化酶GLpgm、GLugpg和GLpmi均在E. coli中实现大量表达。GLpgm的最适反应pH为8.5,GLugpg和GLpmi的最适pH同为7.5;GLpgm、GLugpg和GLpmi最适反应温度依次为35、40和30℃;1mmol/L的Ag^+和Cu^2+对3种酶均具有强烈抑制作用,Mn^2+、Mg^2+对GLpgm和GLpmi均有激活作用,其中Mn^2+对GLpgm的激活作用高达2.7倍。GLpgm、GLugpg和GLpmi的kcat/Km值分别为196.08、818.60和1 105.22 mmol/(L·s)。【结论】在最适反应pH、温度及金属离子作用方面,GLpgm、GLugpg和GLpmi与植物及真菌来源的这3种酶较为相似,对底物的催化效率相对其他来源的酶高,为基于灵芝多糖合成途径的调控提供了更完善的信息。

关键词：磷酸葡萄糖变位酶 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶磷酸甘露糖异构酶异源表达酶学性质