检索结果-南通市图书馆

免疫组化和直接测序以及焦磷酸测序对IDH1突变的比较研究

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实验技术与管理 2019年第10期36卷 73-76页

作者：赵焕英方霄李慎涛甄亚萍李峰王雷明首都医科大学中心实验室北京100069 首都医科大学临检中心北京100069 首都医科大学神经生物系北京100069 首都医科大学宣武医院北京100053

采用免疫组化法、直接测序法、焦磷酸测序法分别对弥漫性脑胶质瘤患者异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)第132位精氨酸的突变进行检测.结果表明:3种方法对高频突变的检出一致性为90.62%,免疫组化只能检测出R132H突变类型,而两种测序方法都能检测出R... 详细信息

采用免疫组化法、直接测序法、焦磷酸测序法分别对弥漫性脑胶质瘤患者异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)第132位精氨酸的突变进行检测.结果表明:3种方法对高频突变的检出一致性为90.62%,免疫组化只能检测出R132H突变类型,而两种测序方法都能检测出R132-其他类型的突变;焦磷酸测序检出灵敏度最高达3%,直接测序法最经济和简便,但灵敏度低,仅能检测突变率为20%以上的突变.建议先用免疫组化和直接测序初筛IDH1基因突变,对发现的低频突变用焦磷酸测序验证.

关键词：异柠檬酸脱氢酶1 免疫组化直接测序焦磷酸测序

用5′加尾长引物进行AFLP片段的直接测序

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湖北大学学报（自然科学版） 2010年第2期32卷 206-209页

作者：刘耘陈勋李强华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室湖北武汉430070

现有的AFLP标记片段测序方法比较费时,成本也较高.设计一个包括EcoRI接头引物和5′端加36个额外核苷酸的长引物AF2SC,用该引物再扩增时可AFLP片段末端增加36个碱基.再利用这36个碱基的末端序列进行测序,只需一次反应就能获得AFLP标记片... 详细信息

现有的AFLP标记片段测序方法比较费时,成本也较高.设计一个包括EcoRI接头引物和5′端加36个额外核苷酸的长引物AF2SC,用该引物再扩增时可AFLP片段末端增加36个碱基.再利用这36个碱基的末端序列进行测序,只需一次反应就能获得AFLP标记片段的全序列.该方法缩短了AFLP片段测序所需时间,也降低了实验成本.

关键词： AFLP 5′加尾长引物直接测序

5-HT_(1A)受体基因PCR产物的直接测序及序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2008年第12期 97-98页

作者：林宁宁方勇王光圣白秀娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

目前,已知的5-羟色胺(5-HT)受体至少存在7种类型,即5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、5-HT5、5-HT6、和5-HT7,其中5-HT1受体又可分为5-HT1A、5-HT1B、5-HT1c、5-HT1D、5-HT1E和5-HT1F等亚型.5-HT1A是最早被克隆成功的5-HT受体亚型,也是哺乳... 详细信息

关键词： 5-HT1A 受体基因 PCR产物序列分析直接测序受体亚型 5-羟色胺

一株猴泡沫病毒野毒Pol基因的cDNA的直接测序

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中国实验动物学报 2000年第1期8卷 22-25页

作者：唐东红江勤芳匡德宣代解杰中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明花红洞650107

本研究对一株来源于医学灵长类中心 (CentreforMedicalPrimates)大笼饲养的恒河猴的原代猴肾细胞 (RhesusMonkeykidney ,RMK) ,377细胞株 ,经细胞培养三周后 ,具有典型泡沫样病变 ,即CPE( + )的细胞 ,进行Pol基因 ( 5898- 6362 )的cDNA... 详细信息

本研究对一株来源于医学灵长类中心 (CentreforMedicalPrimates)大笼饲养的恒河猴的原代猴肾细胞 (RhesusMonkeykidney ,RMK) ,377细胞株 ,经细胞培养三周后 ,具有典型泡沫样病变 ,即CPE( + )的细胞 ,进行Pol基因 ( 5898- 6362 )的cDNA的Nested -PCR扩增 ,对产物位置 5898- 6343区域进行直接测序。结果证明 :该株细胞所带的SFV与GENEBANK中的SFV - 1在该区域有 48个核苷酸存在差异 ( 1 0 .78% ) ,与SFVmac在该区域有 45个核苷酸存在差异 ( 1 0 .1 1 % )。VspⅠ酶切实验结果与之吻合 ,显示出该前病毒株的PCR产物与SFV - 1在该片段的第 69核苷酸有变异 ,碱基由T→A。

关键词：直接测序猴泡沫病毒核苷酸 Pol基因细胞吻合 DNA 灵长类碱基 PCR产物

聚合酶链反应—直接测序法快速检测结核分枝杆菌利福平耐药菌株

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聚合酶链反应—直接测序法快速检测结核分枝杆菌利福平耐药菌株

作者：于保东吉林大学

学位级别：硕士

目的:了解长春市结核分枝杆菌耐RFP 菌株基因突变情况,建立快速检测结核分枝杆菌耐RFP 菌株耐药性的基因检测法,提高临床治疗耐药结核病的水平。方法:用直接测序法(PCR-DS)分析结核分枝杆菌临床耐RFP菌株的突变基因,同时作细菌培养及... 详细信息

目的:了解长春市结核分枝杆菌耐RFP 菌株基因突变情况,建立快速检测结核分枝杆菌耐RFP 菌株耐药性的基因检测法,提高临床治疗耐药结核病的水平。方法:用直接测序法(PCR-DS)分析结核分枝杆菌临床耐RFP菌株的突变基因,同时作细菌培养及药敏试验。结果:结核分枝杆菌国际标准株及耐利福平国际标准株与临床利福平耐药株及利福平敏感株均扩得一258bp 的特异性条带。5 株RFP 敏感株测序结果与标准株相同,未发现突变位点。19 株RFP 耐药株均发现rpoB 基因突变,发生率为95%,其中531 点突变为8 例(42%),6 例为C→T 突变(Ser→Leu)。526 位点突变为8 例(42%),5 例为C→T 突变(His→Tyr)。3 株为516 位突变。1 株未发现rpoB基因突变。结论:PCR-DS 方法是快速,精确,方便,廉价的检测结核分枝杆菌利福平耐药菌株的方法,对临床指导抗结核药物治疗有重要意义。

关键词：聚合酶链反应直接测序结核分枝杆菌耐药菌株

促髓细胞分化的锌指基因单向PCR扩增直接测序的研究

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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生物化学杂志 1994年第6期10卷 657-661页

作者：穆莹惠培北京医科大学人民医院医学遗传科北京医科大学病理教研室

锌指基因是一种造血调节基因，编码锌指结构蛋白，主要在髓细胞中表达，促进髓细胞分化，在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中，促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中，探索并建立了单向聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增... 详细信息

锌指基因是一种造血调节基因，编码锌指结构蛋白，主要在髓细胞中表达，促进髓细胞分化，在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中，促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中，探索并建立了单向聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增特定单链ＤＮＡ，直接测序的新方法。它能产生质和量均佳的单链ＤＮＡ，无需纯化即可直接用于测序，使复杂的测序研究简便易行，可在２，３天内完成。这种单向ＰＣＲ扩增特定单链ＤＮＡ直接测序的方法，经对锌指基因的ｃＤＮＡ测序，得到验证。此法不仅适用于疾病研究中的ＤＮＡ测序，还可制各单链ＤＮＡ探针，更利于基因结构组成的研究。

关键词：髓细胞锌指基因 DNA 直接测序聚合酶链反应

直接测序与克隆测序检测不育男性H19基因甲基化印记的比较

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分子诊断与治疗杂志 2011年第4期3卷 249-254页

作者：丁婷岳磊余波澜周华袁静茹刘敏孙筱放广州医学院第三附属医院妇产科研究所广州市生殖与遗传重点实验室

目的建立亚硫酸氢盐修饰后测序技术,比较直接测序与克隆测序在不育男性精子印记基因DNA甲基化状态检测中的差别。方法对样本进行精液分析和精子形态学分析,密度梯度离心法制备精液。提取精液基因组DNA并行亚硫酸氢盐处理,行半巢式PCR,... 详细信息

目的建立亚硫酸氢盐修饰后测序技术,比较直接测序与克隆测序在不育男性精子印记基因DNA甲基化状态检测中的差别。方法对样本进行精液分析和精子形态学分析,密度梯度离心法制备精液。提取精液基因组DNA并行亚硫酸氢盐处理,行半巢式PCR,将纯化后PCR产物与pCR?2.1-TOPO?载体连接及转化,分别对PCR产物及阳性克隆菌液进行测序。结果 PCR产物直接测序,前半部分序列丢失约40bp,1号CpG位点甲基化状态信息丢失。每例标本只有一个测序结果,会出现CpG位点的部分甲基化状态。挑取15个克隆进行测序,序列无丢失,18个CpG位点甲基化状态信息均完整。15个克隆CpG位点甲基化状态有所不同,显示出此样本的平均甲基化状态。结论克隆测序不会造成序列丢失,CpG位点甲基化状态信息完整,克隆测序能较好地反应样本的平均甲基化状态。

关键词：男性不育 H19基因甲基化印记亚硫酸氢盐修饰后测序法直接测序克隆测序

直接测序法与荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变对比分析

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淮海医药 2016年第6期34卷 633-635页

作者：闵生萍蚌埠医学院第一附属医院呼吸与危重症医学科安徽蚌埠233040

目的:比较直接测序和荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因突变状态结果的差异。方法:分别采用荧光定量PCR(蝎形探针扩增阻滞突变系统ARMS)和直接测序法检测155例石蜡包埋NSCLC样本中EGFR基因18,19,20,21号外显子突变状态,比... 详细信息

目的:比较直接测序和荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因突变状态结果的差异。方法:分别采用荧光定量PCR(蝎形探针扩增阻滞突变系统ARMS)和直接测序法检测155例石蜡包埋NSCLC样本中EGFR基因18,19,20,21号外显子突变状态,比较检测结果的差异。结果:80例手术切除样本中,直接测序检测EGFR突变阳性者25例(31.25%),ARMS法为28例(35%),差异无统计学意义(P>0.05);75例活检样本中,直接测序检测EGFR突变阳性者19例(25.33%),ARMS法为26例(34.67%),差异具有统计学意义(P直接测序和ARMS法均可有效检测出EGFR基因突变状态;但对于活检组织样本,ARMS较直接测序灵敏性更高。

关键词：癌,非小细胞肺表皮生长因子受体基因突变直接测序荧光光定量PCR

双链DNA直接测序法在环境诱变剂致突变分子机制研究中的应用Ⅰ.非突变质粒抗性基因片段的序列测定

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癌变．畸变．突变 1991年第3期3卷 15-16,77-82页

作者：高惠兰谢大英李忠生左瑾方福德中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所中国医学科学院基础医学研究所

本文报告了双链DNA直接测序法的建立,并以质粒pBR322为研究对象,选择其四环素抗性基因作为模板,合成了一个位于***位点逆时针方向紧邻处的寡核苷酸5′-GGCCCTTTCGTCTTC-3′作为引物。整个测序主要步骤包括:双链DNA碱变性、酶促合成反应... 详细信息

本文报告了双链DNA直接测序法的建立,并以质粒pBR322为研究对象,选择其四环素抗性基因作为模板,合成了一个位于***位点逆时针方向紧邻处的寡核苷酸5′-GGCCCTTTCGTCTTC-3′作为引物。整个测序主要步骤包括:双链DNA碱变性、酶促合成反应和双脱氧末端终止法。结果显示,在非梯度胶的情况下,可以清晰可靠地读出200多个核苷酸顺序。

关键词：环境诱变剂双链DNA 直接测序