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一株西尼罗病毒株的生物学特征研究

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第2期25卷 133-136页

作者：张久松张泮河詹琳司炳银祝庆余曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的　对引进的西尼罗病毒 (WNV)毒株的形态学、致病性、细胞敏感性、免疫原性等生物学性状进行探讨 ,为进一步开展WNV的相关研究奠定基础。方法　选择Vero E6与C6 36细胞观察WNV的细胞病变效应 (CPE) ,并制作电镜负染标本和组织切片... 详细信息

目的　对引进的西尼罗病毒 (WNV)毒株的形态学、致病性、细胞敏感性、免疫原性等生物学性状进行探讨 ,为进一步开展WNV的相关研究奠定基础。方法　选择Vero E6与C6 36细胞观察WNV的细胞病变效应 (CPE) ,并制作电镜负染标本和组织切片标本进行病毒形态学鉴定 ;通过乳鼠脑内接种WNV确认其致病性 ;以灭活的感染乳鼠脑悬液免疫BALB c小鼠 ,以间接免疫荧光试验(IFA)测定其血清WNVIgG抗体 ;用RT PCR检测病毒核酸 ,扩增的核苷酸序列通过BLAST作同源性比较。结果　WNV所致Vero E6与C6 36细胞的CPE分别以细胞圆缩和融合为主要特征 ;电镜下所见病毒体为有包膜、直径约 30～ 5 0nm的球形颗粒 ;脑内接种WNV可致全部乳鼠死亡 ;灭活病毒可诱导小鼠产生WNV抗体 ;经RT PCR扩增 ,在WNV培养液及感染乳鼠脑组织中均检测到目的基因片段 ,且仅与WNV有较高的同源性 (94 %～ 1 0 0 %)。结论　本研究使用的WNV毒株可供进一步开展WNV的相关研究。

关键词：生物学特征 Vero-E6 病毒株 BALB/c小鼠间接免疫荧光试验 RT-PCR检测 RT-PCR扩增 C6/36细胞细胞病变效应 WNV 相关研究脑内接种西尼罗病毒细胞敏感性生物学性状形态学鉴定 IgG抗体同源性比较核苷酸序列免疫原性

肝癌高发区广西隆安县乙型肝炎病毒株全基因序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第3期18卷 272-276页

作者：葛宪民方钟燎李丹亚赵连三广西壮族自治区职业病防治研究所南宁530021 广西壮族自治区疾病预防控制中心广西医科大学第一附属医院四川大学华西医学中心第一附属医院

目的　探讨肝癌高发区广西隆安县乙型肝炎病毒 (HBV)株的全基因序列是否存在地域特殊性。方法　用套式PCR(nPCR)扩增该县HBV无症状携带者血清HBV全基因 ,用克隆测序法测序并做同源性对比。结果　本病毒株共 32 15个碱基 ,基因型为C ,血... 详细信息

目的　探讨肝癌高发区广西隆安县乙型肝炎病毒 (HBV)株的全基因序列是否存在地域特殊性。方法　用套式PCR(nPCR)扩增该县HBV无症状携带者血清HBV全基因 ,用克隆测序法测序并做同源性对比。结果　本病毒株共 32 15个碱基 ,基因型为C ,血清型为adw。其P基因区有 4 0处发生碱基点突变 ,导致 11个氨基酸改变 ;S基因区的前S1、前S2和S基因分别有 11、2和 3个碱基点突变 ,分别导致 3、1、1氨基酸改变 ,未发现“a”区突变 ;X基因区共有 6个碱基点突变 ,导致 4个氨基酸改变 ,其中出现能影响e抗原表达的双突变 (nt 176 2A→T、176 4G→A) ;未发现前C区基因突变 ,C基因有 13个碱基发生突变 ,导致 2个氨基酸改变。本病毒株与越南北部病毒株高于同为C基因型的上海株、北京株、西藏株。结论　未发现肝癌高发区的本例HBV基因C型的隆安株 ,基因虽有肝癌高发性 ,但无地域特殊性。

关键词：肝癌高发区改变乙型肝炎病毒点突变 HBV C基因病毒株氨基酸上海株

焦磷酸测序技术在确认北京严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株并检测基因突变中的应用

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病毒学报 2005年第3期21卷 168-172页

作者：程绍辉梁明华李泽琳张霆张珑马洪涛刘哲伟曾毅北京工业大学北京100022 苏州陆博生物科技有限公司苏州215000 首都儿科研究所北京100020

结合严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株序列信息分析和高通量测序技术,建立一种快速、简单地确定SARS病毒株并筛查SARS病毒突变位点和突变频率的方法。从感染人SARS病毒的Vero-6细胞中提取病毒RNA,反转录为cDNA后,PCR扩增目的基因片段,采... 详细信息

结合严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株序列信息分析和高通量测序技术,建立一种快速、简单地确定SARS病毒株并筛查SARS病毒突变位点和突变频率的方法。从感染人SARS病毒的Vero-6细胞中提取病毒RNA,反转录为cDNA后,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(PyrosequencingTechnology,PSQ)进行第2601、79199、4791、9838多个碱基突变位点测序和突变频率分析。通过测序分析多个可能出现突变的位点,确定了该病毒为北京流行株,同时发现第7919位碱基发生了A/G突变。PSQ技术对于高通量筛选研究病毒基因的突变和确定病毒株型别有着简单、快速、灵敏的特点。利用生物信息学分析核酸多态性,结合实验验证,可以确定SARS病毒流行株的特征,有利于对突发事件及早确定传染来源。

关键词：焦磷酸测序技术严重急性呼吸综合征 SARS 病毒株基因突变

口蹄疫病毒株China/99 P3区一级结构及与参考毒株的比较分析

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畜牧兽医学报 2002年第6期33卷 606-610页

作者：张显升赵启祖刘在新江鹏斐常惠芸陈应理李冬魏怀录谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

用RT -PCR法 ,以口蹄疫病毒China/ 99感染的牛舌水泡皮为材料 ,扩增目的cDNA ,与pGEM TEasy载体连接并转化JM1 0 9菌株 ,再经重组质粒电泳、PCR和EcoR1酶切鉴定。序列测定和分析结果表明 ,猪源毒在 3A基因内缺失 1 0个密码子 ,与牛源毒... 详细信息

用RT -PCR法 ,以口蹄疫病毒China/ 99感染的牛舌水泡皮为材料 ,扩增目的cDNA ,与pGEM TEasy载体连接并转化JM1 0 9菌株 ,再经重组质粒电泳、PCR和EcoR1酶切鉴定。序列测定和分析结果表明 ,猪源毒在 3A基因内缺失 1 0个密码子 ,与牛源毒的核苷酸和氨基酸序列差异较大。A G和T C的转换率较高 ,而且A G转换导致氨基酸变异的几率大于T C转换 ,它们是影响氨基酸稳定的因素之一。China/ 99P3区编码产物在第 8、1 2 0、1 2 1、1 2 7、1 32、1 93、493、50 1和 538位具有特征性氨基酸 ,可能与该毒株的表型如毒力等有关。 3A基因突变率较高 ,3B、3C和 3D较低 ,3D最为保守 ,这对维持 3C和 3D蛋白酶和

关键词：口蹄疫病毒株 China/99 P3区一级结构参考毒株

PRRSV强弱病毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 263-266页

作者：吕健韦祖樟高飞郑海红童光志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 国家知识产权局专利审查协作北京中心北京100193

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒... 详细信息

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆。将构建的嵌合克隆转染MA104细胞,4 d后观察到典型的细胞病变。通过RT-PCR和间接免疫荧光证明获得了强弱病毒株之间nsp2基因互换的嵌合病毒。这些嵌合病毒的构建和相应反向遗传操作平台的建立,为进一步研究HP-PRRSV的致病机制及相关疫苗的研发奠定了基础。

关键词： PRRSV 感染性克隆嵌合病毒病毒株猪繁殖与呼吸综合征病毒 PCR技术鉴定间接免疫荧光

SARS-CoV-2抗原快速检测卡对不同病毒株的灵敏度评价

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 680-686页

作者：施金荣周志军冯璐岳胜兰程小玲张雪婷胡勇段凯李策生武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国药集团武汉血液制品有限公司湖北武汉430207

目的比较国内外严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗原快速检测卡检测不同病毒株的灵敏度(稀释度)。方法以武汉生物制品研究所有限责任公司(以下简称武汉所)提供的4种SARS-CoV-... 详细信息

目的比较国内外严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗原快速检测卡检测不同病毒株的灵敏度(稀释度)。方法以武汉生物制品研究所有限责任公司(以下简称武汉所)提供的4种SARS-CoV-2病毒株[原始株、贝塔(Beta)变异株、德尔塔(Delta)变异株和奥米克戎(Omicron)变异株]疫苗原液作为灵敏度评估用样品盘,用国内外17个厂家的21批次SARS-CoV-2抗原快速检测卡及上海捷诺生物科技有限公司生产的SARS-CoV-2核酸检测卡分别检测4种疫苗原液的系列稀释样本,根据稀释度评价抗原快速检测卡和核酸检测试剂的灵敏度。并将抗原快速检测卡与核酸检测卡检测结果进行比较,判断稀释度最大即灵敏度最高1组抗原快速检测卡对应的核酸检测Ct值。结果检测原始株、Beta株、Delta株和Omicron株疫苗原液,抗原检测卡的灵敏度分别为1∶10~1∶8×10^(4)、1∶10^(3)~1∶2×10^(5)、1∶10^(2)~1∶4×10^(4)和1∶10~1∶4×10^(5);核酸检测试剂的灵敏度分别为10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)和10^(-7)。高灵敏度的抗原快速检测卡能达到核酸检测的N基因的Ct值分别为原始株(10^(-4))>31、Beta株(10^(-5))>36、Delta株(10^(-4))>34、Omicron株(10^(-5))>33,达到国内与欧盟对SARS-CoV-2抗原快速检测试剂的要求。结论所有抗原快速检测卡均能检出4种病毒株,但不同试剂检测不同病毒株的灵敏度存在一定差异,其中对Omicron株的灵敏度相对差异最大。

关键词：抗原快速检测卡严重急性呼吸综合征冠状病毒2 病毒株灵敏度

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草鱼出血病病毒株的筛选

海洋与湖沼 1993年第5期24卷 503-506页

作者：罗毅志杨广智叶雪平浙江省淡水水产研究所

为筛选适用草鱼出血病细胞疫苗工厂化生产的病毒株,于1987—1989年,在浙江湖州地区采集了12个具典型草鱼出血病症状的病鱼材料。通过比较它们的毒力,对细胞的适应性、免疫原性,研究病毒在细胞内的增殖动态、细胞病变特征,毒株保存。结... 详细信息

为筛选适用草鱼出血病细胞疫苗工厂化生产的病毒株,于1987—1989年,在浙江湖州地区采集了12个具典型草鱼出血病症状的病鱼材料。通过比较它们的毒力,对细胞的适应性、免疫原性,研究病毒在细胞内的增殖动态、细胞病变特征,毒株保存。结果表明,筛选出的ZV-8802和ZV-8909两毒株,其毒力高,免疫原性强,并能在细胞中大量增殖。应用这两株毒株制备的细胞疫苗,其免疫保护率在85％以上。

关键词：草鱼出血病病毒株筛选