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猪丁型冠状病毒病的诊断与防控措施

北方牧业 2022年第23期 26-26,30页

作者：张凤丽商丘美兰生物工程有限公司河南商丘476000

猪丁型冠状病毒病是由猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)引起的一种高度接触性、肠源性传染性疾病,临床上以腹泻、呕吐脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征。该病易与其他猪病混感或继发多种疾病,给我国养猪业带来严重危害。现就该病的诊断与防... 详细信息

猪丁型冠状病毒病是由猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)引起的一种高度接触性、肠源性传染性疾病,临床上以腹泻、呕吐脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征。该病易与其他猪病混感或继发多种疾病,给我国养猪业带来严重危害。现就该病的诊断与防治措施作一个简要探讨,希望对防治该病有一定的帮助。1病毒学特征猪丁型冠状病毒(PDCoV)为不分节段的单链正股有囊膜的RNA病毒,基因组的组成和排列与其他冠状病毒类似,呈典型的冠状病毒形态。该病毒粒子呈球形,直径约120~180纳米,包膜上有典型的“皇冠”状刺状凸起结构。

关键词：猪丁型冠状病毒传染性疾病猪德尔塔冠状病毒养猪业哺乳仔猪 RNA病毒病毒粒子猪病

一例仔猪德尔塔冠状和传染性胃肠炎病毒混感诊治

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中国畜禽种业 2020年第10期16卷 89-90页

作者：胡远鹏李中华湖南省益阳市资阳区畜牧水产局 413001

为了对耒阳某猪场仔猪顽固性腹泻及呕吐病因进行确诊,试验通过临床与实验室检测技术进行诊断,并进一步进行防控。结果表明,仔猪腹泻病因猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染,通过对猪群紧急免疫猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎... 详细信息

为了对耒阳某猪场仔猪顽固性腹泻及呕吐病因进行确诊,试验通过临床与实验室检测技术进行诊断,并进一步进行防控。结果表明,仔猪腹泻病因猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染,通过对猪群紧急免疫猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联弱毒苗和对症治疗,提高饲养管理和生物安全防控水平,疫情得到有效控制。笔者对其诊断与防控过程进行分析和讨论,旨在为广大养殖户和兽医提供参考。

关键词：仔猪猪德尔塔冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒混合感染诊治

PDCoV和PEAV二重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 141-146页

作者：黄海鑫宋心玥汪伟李笨王茂鹏肖朋朋郑敏金宁一孙文超鲁会军温州大学病毒学研究所浙江温州325035 军事科学院军事兽医研究所吉林长春130122 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530004

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪肠道α冠状病毒(PEAV)是两种新发现的猪传染性冠状病毒,临床上均以腹泻症状为主,症状相似,临床上难以快速诊断。为建立一种快速、准确区分PDCoV和PEAV的二重RT-PCR方法,本研究根据PDCoV和PEAV N基因序列,分... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪肠道α冠状病毒(PEAV)是两种新发现的猪传染性冠状病毒,临床上均以腹泻症状为主,症状相似,临床上难以快速诊断。为建立一种快速、准确区分PDCoV和PEAV的二重RT-PCR方法,本研究根据PDCoV和PEAV N基因序列,分别设计2对特异性引物,以阳性质粒为模板,对二重RT-PCR反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性试验。结果显示,所建立的方法能够扩增出PDCoV和PEAV的特异性片段,大小分别为690 bp和208 bp,且对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无扩增条带;对PDCoV和PEAV的最低检测量分别为5.13×102copies/μL、4.73×101copies/μL。对60份临床腹泻样本病料进行检测,结果PDCoV的检出率为21.6%,未检测出PEAV。本研究所建立的二重RT-PCR方法可用于临床流行病学监测,为快速诊断PDCoV和PEAV提供理论依据和技术支持。

关键词：猪德尔塔冠状病毒猪肠道α冠状病毒二重RT-PCR

PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 595-600页

作者：施开创王睿敏黎宗强谢守玉尹彦文陆文俊屈素洁广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,... 详细信息

为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,建立了同时检测4种病毒的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅特异性扩增PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV,与猪其它主要病毒无交叉反应,特异性较强;对PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV的质粒标准品的最低检出限分别为2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^1拷贝/μL、2.06×10^3拷贝/μL,具有较高敏感性;组内与组间变异系数均小于1.1%,具有良好的重复性。应用该方法和普通多重RT-PCR检测临床采集的243份腹泻病料样品,两者的符合率为96.71%。本研究建立的方法为临床PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的鉴别检测及流行病学调查提供了一种快速、特异、敏感、高效的技术手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪德尔塔冠状病毒猪轮状病毒荧光定量RT-PCR

PDCoV、PKV和MRV三重荧光定量PCR方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2023年第7期53卷 823-830页

作者：王利丽李富强董明奇任卫科路超张莉江珊田向学鄢明华天津市农业科学院畜牧兽医研究所天津300381 国家动物疫病天津观测实验点天津300381 天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室天津300381 天津市畜禽健康养殖工程技术中心天津300381 哈尔滨国生生物科技股份有限公司黑龙江哈尔滨150028

为了快速同步检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪呼肠孤病毒(MRV),参考GenBank中PDCoV M、PKV 5’UTR和MRV L1基因保守序列,设计了特异性引物和探针并优化了反应条件,建立了同时检测PDCoV、PKV和MRV的三重荧光定量PCR方法... 详细信息

为了快速同步检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪呼肠孤病毒(MRV),参考GenBank中PDCoV M、PKV 5’UTR和MRV L1基因保守序列,设计了特异性引物和探针并优化了反应条件,建立了同时检测PDCoV、PKV和MRV的三重荧光定量PCR方法。该方法可特异性检出PDCoV、PKV和MRV,与PRRSV、CSFV、PCV2、PRV、PEDV、TGEV、RV等病原无交叉反应,3种病毒的最低检测量分别为2.7×10^(1)copies/μL、1.22×10^(1)copies/μL和1.26×10^(2)copies/μL,组内及组间变异系数为0.001~0.019。应用所建立的方法与行业标准及文献报道方法同时检测142份临床样本,结果显示与行业标准及文献报道方法阳性符合率为78%~94.92%。本研究建立的三重荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为临床PDCoV、PKV和MRV的鉴别诊断和流行病学调查提供了快速敏感的技术手段。

关键词：猪德尔塔冠状病毒猪嵴病毒猪呼肠孤病毒三重荧光定量PCR方法同步检测

4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2023年第9期55卷 83-88页

作者：侯闻闻余良政樊毛迪朱振邦林成贤陈昌海李向东扬州大学兽医学院江苏扬州1225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司福建厦门361028 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036

为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化... 详细信息

为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件,建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示该方法特异性强,对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10^(2)、10^(2)、10^(3)、10^(3)TCID_(50)/mL,并具有良好的组内和组间重复性;而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)、10^(2)TCID_(50)/mL,敏感性略高于iiRT-PCR。2种方法对22份临床样品的检测结果符合率为100%,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV阳性率分别为40.91%、9.09%、45.45%、9.09%,其中PEDV与PoRV混合感染率为18.18%,PDCoV与PoRV混合感染率为4.55%。本研究建立的iiRT-PCR为临床现场检测4种猪腹泻病毒提供了一种简便快速的方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪轮状病毒猪德尔塔冠状病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR

同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的四重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

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中国兽医学报 2023年第3期43卷 448-454,461页

作者：高艺祥王金凤张倩孙晓霞刘立兵顾文源马宏伟韩庆安马增军王建昌石家庄海关技术中心河北石家庄050051 河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004 河北省动物疫病预防控制中心河北石家庄050035

为实现对猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)和猪流性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的同时鉴别检测,根据PDCoV M基因、TGEV S基因、PoRV VP6基因和TGEV N基因保守区域序列合成特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了一种可同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法。结果显示,所建立的四重实时荧光RT-PCR方法仅对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV出现阳性扩增,与PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PCV2等猪常见病原无交叉反应;对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的最低检出限分别为1.17×10^(3),1.13×10^(3),1.31×10^(2)和1.18×10^(2)拷贝;重复性好,组内和组间试验变异系数均小于4.5%。进一步应用所建立的同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法对199份采集自河北省不同地区腹泻猪的临床样品进行检测,结果检出23份PoRV阳性(11.56%)、12份PEDV阳性(6.03%)和1份TGEV阳性(0.50%),均为单一感染;未检出PDCoV阳性。本研究所建立的四重实时荧光RT-PCR检测方法可实现对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的同时鉴别检测,为实验室快速鉴别诊断猪病毒性腹泻提供了有效的技术支持。

关键词：猪德尔塔冠状病毒猪传染性胃肠炎猪轮状病毒猪流性腹泻病毒四重实时荧光RT-PCR

STAG2基因敲除的IPEC-J2细胞系构建及其对PDCoV复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 550-554页

作者：张洪玲陈建飞石照蓉李明蔚吴洋郭龙军冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069

为探究猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中基质抗原2(STAG2)因子对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)复制的影响,本研究针对STAG2基因设计并合成sgRNA,将其克隆至lentiCRISPR v2载体构建重组表达质粒。将重组质粒转染至IPEC-J2细胞后,利用嘌呤霉素(Puromy... 详细信息

为探究猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中基质抗原2(STAG2)因子对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)复制的影响,本研究针对STAG2基因设计并合成sgRNA,将其克隆至lentiCRISPR v2载体构建重组表达质粒。将重组质粒转染至IPEC-J2细胞后,利用嘌呤霉素(Puromycin)采用有限稀释法进行亚克隆,筛选STAG2基因缺失的单克隆细胞株,并经western blot鉴定后最终获得一株STAG2缺失的单克隆稳定细胞系IPEC-J2-STAG2-/-(KO)。利用western blot方法鉴定不同代次STAG2敲除细胞的遗传稳定性,结果显示,IPEC-J2-STAG2-/-细胞具有良好的遗传稳定性。为探究STAG2基因对PDCoV复制的影响,本研究将PDCoV分别感染IPEC-J2-STAG2-/-细胞和野生型IPECJ2细胞(WT),采用荧光定量PCR、western blot方法检测细胞中PDCo V N基因m RNA转录及其蛋白表达水平。结果显示,与WT组相比,IPEC-J2-STAG2-/-细胞中PDCo V N基因m RNA转录水平及其蛋白表达水平均极显著降低(P病毒基因的转录水平,从而抑制PDCoV的复制,为研究PDCoV和宿主因子相互作用提供了新思路。

关键词：猪德尔塔冠状病毒基质抗原2 CRISPR/Cas9 敲除细胞系

2016—2018年天津地区规模化猪场猪主要病毒性腹泻病原的调查与分析

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黑龙江畜牧兽医 2019年第22期 90-94页

作者：路超田向学李富强任卫科郑丽张莉王利丽鄢明华天津市畜牧兽医研究所天津300381 农业农村部兽用药物与诊断技术天津科学观测实验站天津300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津300381

为了确定2016—2018年天津地区规模化猪场流行的猪腹泻病主要病原,试验共采集腹泻样品1519份,应用RT-PCR的方法进行病原检测,检测病原包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)... 详细信息

为了确定2016—2018年天津地区规模化猪场流行的猪腹泻病主要病原,试验共采集腹泻样品1519份,应用RT-PCR的方法进行病原检测,检测病原包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),对样品的PEDV、PDCoV、TGEV和RV的阳性率进行统计,并按不同年份、不同地区、不同月份、不同季节及猪群腹泻病原混合感染和单一感染情况进行统计分析。结果表明:PEDV是导致天津地区猪群发病的主要病原,2016,2017,2018年阳性率分别为56.60%、45.44%、55.78%;其次为PDCoV,阳性率分别为25.24%、26.64%、33.33%;TGEV阳性率分别为7.46%、5.98%、7.48%;RV阳性率分别为5.54%、5.27%、5.10%。统计不同地区腹泻病毒的感染情况,发现宁河区的PEDV阳性率较高,为13.03%,静海区的TGEV阳性率是2.17%;RV和PDCoV在宝坻的阳性率较高,分别是1.38%和8.10%。PEDV和RV在春季高发,阳性率是60.06%和5.91%;TGEV在夏季阳性率较高,为7.33%;PDCoV在秋季阳性率较高,为40.06%。在被检样品中,混合感染病例占6.91%(105/1519),其中PEDV和RV混合感染率最高,为2.11%(32/1519)。说明天津地区猪腹泻病病原种类多且感染情况复杂,给该地区猪场的腹泻病防控工作带来了严峻的挑战。

关键词：天津规模化猪场病毒性腹泻病原猪德尔塔冠状病毒猪流行性腹泻病毒