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基于鸟枪蛋白组学与质谱多反应监测技术的三文鱼物种鉴别研究

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食品安全质量检测学报 2022年第16期13卷 5271-5278页

作者：张九凯马聪聪邢冉冉于宁康文瀚邓婷婷陈颖中国检验检疫科学研究院北京100176 河北科技大学生物科学与工程学院石家庄050018

目的对大西洋鲑(Salmo salar)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)中的多肽进行分离鉴定,筛选特征肽段,建立不同种类三文鱼的物种鉴别方法。方法以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基... 详细信息

目的对大西洋鲑(Salmo salar)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)中的多肽进行分离鉴定,筛选特征肽段,建立不同种类三文鱼的物种鉴别方法。方法以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基于鸟枪蛋白组学分析流程,样品经蛋白质提取、胰蛋白酶消化和超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF-MS)分离鉴定,得到的总离子流图谱(total ion chromatogram,TIC)与Uni Prot蛋白质数据库对比分析,筛选得到3个物种的特征肽段,利用Skyline软件构建特征肽的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)离子对,然后经三重四极杆质谱仪进行鉴定。结果最终共筛选出7条特征肽段,包括大西洋鲑中的4条特征肽段,大马哈鱼中的1条特征肽段,虹鳟中的2条特征肽段。结论基于鸟枪蛋白组学,结合多反应监测技术,筛选得到了大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种中的特征肽段,成功建立了不同种类三文鱼的物种精准定性鉴别方法。

关键词：三文鱼物种鉴别鸟枪蛋白组学多反应监测特征肽段

基于蛋白组学的三文鱼物种鉴别及新鲜度变化机理研究

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基于蛋白组学的三文鱼物种鉴别及新鲜度变化机理研究

作者：马聪聪河北科技大学

学位级别：硕士

三文鱼是鲑科鱼类的总称,主要分布于太平洋北部及大西洋和北冰洋交界水域,肉质鲜美,营养价值高,因此深受广大消费者的喜爱。三文鱼主要的食用方式为生食,因此对其品质要求极高。市场上常见的三文鱼主要是大西洋鲑,其脂肪酸和蛋白质含量... 详细信息

三文鱼是鲑科鱼类的总称,主要分布于太平洋北部及大西洋和北冰洋交界水域,肉质鲜美,营养价值高,因此深受广大消费者的喜爱。三文鱼主要的食用方式为生食,因此对其品质要求极高。市场上常见的三文鱼主要是大西洋鲑,其脂肪酸和蛋白质含量丰富,是生食料理店的上等佳品。市场上一些不法商家在经济利益驱动下,用肉质粗糙的大马哈鱼和淡水虹鳟替代大西洋鲑进行销售。另外,高蛋白和脂肪酸导致三文鱼在运输和储存过程中极易变质,如蛋白质降解、脂肪酸氧化、微生物不断繁殖,不仅使肌肉组织被破坏、营养价值大打折扣,还会产生对人体有害的物质,不注意而食用的话,对人体健康将产生威胁。有一些人将储存多天的不新鲜的三文鱼或冷冻运输和储存的三文鱼解冻后冒充冰鲜三文鱼销售,这不仅扰乱了水产市场的秩序,更侵犯了消费者的利益,危害了人们的身体健康。因此,本文以蛋白质为检测对象,采用鸟枪蛋白组学对大西洋鲑及其近源掺假物种进行区分,利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ）技术对不同新鲜度（不同储存时间、冰鲜或冰冻贮藏）的大西洋鲑肌肉蛋白进行定量标记,筛选出差异蛋白,不仅实现了不同样品的准确区分,也为品质变化的机理分析提供了理论基础。主要研究结果如下:（1）采用UPLC-TripleTOF-MS系统,基于鸟枪蛋白组学方法,对大西洋鲑、大马哈和虹鳟3个物种的全蛋白进行了鉴定。利用UPLC-QTrap-MS系统建立的MRM方法,确认了大西洋鲑中的4条特征肽段、大马哈中的1条特征肽段和虹鳟中的2条特征肽段,为准确区分大西洋鲑及其近源掺假提供了理论支撑。（2）采用iTRAQ技术对0℃条件下储存不同时间的大西洋鲑新鲜度进行了研究,筛选出28个与大西洋鲑储存期间品质变化相关的差异蛋白,并利用多反应检测模式（MRM）对这些蛋白进行了验证,找到了变化蛋白中包含降解位点的关键肽段,与iTRAQ结果互相印证,然后将其分为六类进行了详细的代谢通路分析。这些蛋白均随着储存时间的延长发生不同程度的下调和上调,并与鱼体死后僵直和解僵、葡萄糖无氧酵解、细胞器稳定、肌肉收缩和蛋白合成与分解密切相关,因此可以作为研究大西洋鲑新鲜度变化的潜在差异蛋白,为深入认识0℃条件下不同储存时间的大西洋鲑品质变化机理提供了一定的参考。（3）采用iTRAQ技术对冰鲜大西洋鲑和在-18℃条件下储存30天后冻融处理的大西洋鲑进行了区分研究,筛选出20个与大西洋鲑冻融后品质变化相关的差异蛋白,并利用多反应检测模式（MRM）对这些蛋白进行了验证,找到了变化蛋白中包含降解位点的关键肽段,与iTRAQ结果互相印证,为解释冻融处理后大西洋鲑品质变化规律奠定了理论基础。

关键词：三文鱼大西洋鲑鸟枪蛋白组学 iTRAQ 差异蛋白生物信息学物种鉴别新鲜度识别

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基于蛋白质组学的古代皮质文物物种鉴别研究

基于蛋白质组学的古代皮质文物物种鉴别研究

作者：由笑颖浙江理工大学

学位级别：硕士

在人类社会早期,人们就开始利用自然资源对动物皮进行一系列加工使其成为不易腐烂的皮革。皮革制品广泛悠久地应用于人类日常生活和生产中。皮革的使用根植于年代久远的草原文化,是草原经济文化中必不可少的因素,它不仅体现着当地人民... 详细信息

在人类社会早期,人们就开始利用自然资源对动物皮进行一系列加工使其成为不易腐烂的皮革。皮革制品广泛悠久地应用于人类日常生活和生产中。皮革的使用根植于年代久远的草原文化,是草原经济文化中必不可少的因素,它不仅体现着当地人民的文化面貌,在一定程度上还彰显着经济发展的走向和历程,它们的存在对于研究古代皮革制作工艺及经济文化发展水平有着重要意义。而皮质文物作为一种有机高分子材料,在历经千百年岁月的洗礼之后,其中的胶原蛋白受环境的影响往往产生严重的劣化现象,劣化的皮质文物无论是外貌形态还是内部结构都发生了巨大的改变,这使得一些常规的检测手段,如表面分析、光谱分析、DNA分析等,难以对皮质文物的物种进行准确鉴别。作为皮质文物的主要成分,胶原蛋白由2条α1链和1条α2链组成三股螺旋结构,这种结构具有高度的稳定性,在长时间的埋葬下也能保留其肽段信息。蛋白质组学分析作为一种新兴的检测方法,具有灵敏度高,特异性强的特点。近年来,针对古代蛋白质检测提出了“古蛋白质组学”的概念,在古代皮质文物物种鉴别上十分有优势,使用液相色谱串联质谱法检测经胰蛋白酶消化后的胶原蛋白肽段,通过数据库对比从而对肽段进行测序和识别。在面对珍贵的皮质文物时,胶原蛋白的提取需找到一种小样本量的提取方法,这种方法应使皮质文物的损伤降至最低,又不对检测结果的准确性产生影响。本论文以皮质文物中的胶原蛋白为主要研究对象,使用镊子对皮质文物进行微量取样,通过联合提取法对微量取样的皮质文物中的胶原蛋白进行有效提取,成功合成一种具有吸附性能和磁分离性能的磁性还原氧化石墨烯材料FeO@CS/RGO,对提取到的胶原蛋白进行富集纯化,并使用蛋白质组学超高效液相色谱串联质谱法结合Direct DIA定量分析技术,对皮质文物中的胶原蛋白酶解肽段进行全方面、无差异地检测,通过定性及定量方法从分子水平上对古代皮质文物进行物种鉴别。实验结果表明,FeO@CS/RGO可以富集到原低浓度提取液中高丰度的肽段及蛋白,达到纯化蛋白、去除干扰信号的目的。根据LC-MS/MS肽段定量***结果,FeO@CS/RGO对低浓度胶原蛋白溶液具有优异的富集效果,富集后的肽段定量***显著升高,并可用于物种来源的鉴别。通过这种微量取样、高效富集的方式将皮质文物用于蛋白质组学检测的取样量由毫克级别降至微克级别,这为皮质文物微量蛋白质组学物种鉴别提供了可行性方案。同时,本论文采用两种方式对来自新疆巴州营盘墓、甘肃悬泉置遗址和内蒙古锡盟伊和淖尔墓的7个皮质文物样品进行物种鉴别。一方面,从定性角度出发,利用由现代皮革样品确定的标志性肽段序列与古代皮质文物样品中检测出来的肽段序列进行匹配,从而对文物进行物种鉴别。另一方面,从定量角度出发,将古代皮质文物样品检测出的肽段定量信息直接在Uniprot牛亚科和羊亚科的蛋白质数据库进行搜库匹配和定量分析,对皮质文物进行物种鉴别。两个方式互相验证,综合判断这三个墓葬出土的皮质文物均是由牛皮制成的。为避免糟朽劣化的皮质文物进一步遭到破坏,本论文着眼于皮质文物中胶原蛋白的微量提取、高效富集,利用蛋白质组学DIA定量检测分析方法,对古代皮质文物进行物种鉴别,这对于历史文物的传承有重要意义。新兴的蛋白质组学技术能高灵敏、高通量地识别皮质文物中胶原蛋白的肽段信息,准确的鉴别皮质文物的物种来源,这对于研究文物相关的历史人文信息、文化发展水平,溯源古代畜牧业及相关制造行业的起源发展有重大意义。

关键词：蛋白质组学皮质文物物种鉴别微量取样富集

基于DNA条形码技术对山茶属植物物种鉴别的探讨

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基于DNA条形码技术对山茶属植物物种鉴别的探讨

作者：温贝贝河南农业大学

学位级别：硕士

本研究运用DNA条形码(DNA barcoding)检测技术,选取叶绿体基因组中的序列rbc L,matK,trnH-psbA序列与核基因组中的ITS,ITS2序列作为DNA条形码候选片段,验证其对山茶属植物的应用效力,以期在不受外部形态、发育阶段限制的条件下准确、快... 详细信息

本研究运用DNA条形码(DNA barcoding)检测技术,选取叶绿体基因组中的序列rbc L,matK,trnH-psbA序列与核基因组中的ITS,ITS2序列作为DNA条形码候选片段,验证其对山茶属植物的应用效力,以期在不受外部形态、发育阶段限制的条件下准确、快速、大规模地对山茶属植物进行鉴定,分析其亲缘关系及物种演化进程。采集山茶属植物18个组共64个植物样品,提取基因组DNA并用于序列的扩增,从引物的通用性、序列的测定成功率来看,叶绿体基因序列rbcL,matK和trn H-psbA能够成功扩增和测序;而基因组序列ITS和ITS2序列引物通用性不高,有较多杂带出现,PCR产物出现了结合和杂合的问题,导致测序失败。ITS序列难以扩增的现象较普遍,推测可能的原因是山茶属植物核基因组中存在多拷贝现象,或是引物特异性不强,致使PCR扩增产物杂带过多,无法获得正确序列信息。叶绿体基因rbcL,matK和trnH-psbA序列在山茶属基因扩增中较易获得,引物适用性高,可作为候选DNA条形码片段。主要结果如下:1山茶属植物组织含有较多的糖类、多酚类、单宁、蛋白质等次生代谢物质,在提取植物DNA时,能够与DNA分子发生特异地结合,从而污染样品。本试采取改良的CTAB法,对山茶属植物DNA提取具有较好的效果。2本研究共获得山茶属内物种的rbcL序列61条,长度为569 bp;matK序列64条,长度为846bp;trnH-psbA基因序列62条,长度为491bp,其中,trnH-psbA序列含有最多的变异位点(156)。3单一序列rbcL,matK和trn H-psbA在山茶属内的鉴定效率分别为29.51%、10.94%和32.26%,并且能够成功区分不同属植物。选取米碎柃木(Eurya chinensis)、红淡比(Cleyera japonica)、厚皮香(Ternstroemia gymnanthera)、碧桃(Prunus persica)、木蓝属植物Indigofera aspalathoides、爱玉子(Ficus pumila ***)和石榴(Punicagranatum)为外类群时,三个基因片段都能在属的水平将物种正确鉴定,rbcL,matK和trnH-psbA的属间鉴定成功率分别为75%,87.50%和87.50%。4组合序列中,matK+rbcL对于山茶属植物具有最大的物种鉴别率(36.07%),组合序列的鉴定结果与单一片段相似。结果表明,山茶属植物的保守性较大,山茶属植物中实果茶组、茶组、金花茶组、红山茶组和超长柄茶组变异率较大,能够正确鉴定。

关键词：山茶属 rbcL matK trnH-psbA DAN条形码物种鉴别

基于DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究

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基于DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究

作者：白文明华南农业大学

学位级别：硕士

鹅膏菌属(Amanita)是大型真菌中分布较广的大属。目前所报道的蘑菇中毒事件中90%以上是由误食鹅膏菌属物种所引起,也是蘑菇中毒事件中致死率最高的种属。在毒蘑菇所引起的食物中毒事件中,蘑菇样品经过了加工食用而导致原始形态特性的丢... 详细信息

鹅膏菌属(Amanita)是大型真菌中分布较广的大属。目前所报道的蘑菇中毒事件中90%以上是由误食鹅膏菌属物种所引起,也是蘑菇中毒事件中致死率最高的种属。在毒蘑菇所引起的食物中毒事件中,蘑菇样品经过了加工食用而导致原始形态特性的丢失,因此无法使用形态学识别的方法对其进行物种鉴别。分子生物学技术因其高度的特异性和准确度,是目前应用最多的一类分类方法。其中,DNA条形码技术是物种鉴别以及用于发现新型物种的常用方法。为解决长久存储以及因加工食用所导致的样品基因组DNA发生的降解及质量低等问题,本研究对常见的、易误食的有毒鹅膏菌属,开发基于DNA条形码的有毒鹅膏菌属精确鉴别技术。主要研究内容如下:1)基于常规DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究本研究收集了27个鹅膏菌属物种共38份样本,提取样品基因组DNA,应用通用引物扩增其内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)、核糖体大亚基(Large Subunit Ribosomal,LSU)、RNA聚合酶的第二大亚基(the Second Largest Subunit of RNA Polymerase II,RPB2)、β-微管蛋白(β-tubulin)基因序列并进行Sanger双向测序,将得到的序列进行校对拼接后与NCBI的Gen Bank数据库中的参考序列进行比对鉴别物种来源;计算物种的种内、种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统发育树。研究结果表明,β-tubulin、ITS基因序列鉴别能力优于RPB2、LSU基因序列,可将β-tubulin与ITS两者联合使用用于鹅膏菌属的物种鉴别,为有毒蘑菇诱发的食源性中毒风险进行预警。2)基于微型DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别研究通过分析有毒鹅膏菌的内转录间隔区序列,设计了一对微型DNA条形码的通用引物(ITS-39F/278R),对43份鹅膏菌属样品进行PCR扩增及Sanger双向测序,将得到的序列进行校对拼接后与NCBI的Gen Bank数据库中的参考序列进行比对,通过计算物种的种内、种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统发育树,分析微型DNA条形码的鉴别能力及准确性。研究结果表明,设计的引物具有良好的通用性,43份鹅膏菌样品均能扩增出长度为290 bp的目的基因片段;微型DNA条形码能够准确地鉴别出43份鹅膏菌样品,与常规DNA条码鉴别结果完全一致。为进一步验证微型DNA条形码的适用性,对鹅膏菌样品进行静态模拟体外消化,使其发生一定程度的降解,结果表明所建立的微型DNA条形码能够对消化后的样品进行物种成分鉴别。本研究开发的微型DNA条形码在分析保存时间长久的鹅膏菌以及误食毒蘑菇后的呕吐物等场景中具有较大的应用潜力,可作为鹅膏菌属中毒事件中物种鉴定及溯源的优选条形码。3)利用HTML5制作鹅膏菌属物种信息二维码通过基于HTML5(超文本标记语言)对本实验所得物种序列信息以及形态特征等信息进行编码,并将其转化为二维码图像,利用不同终端移动设备进行扫描,即可获得样品的详细信息。将二维码技术与DNA条形码技术相结合,为每个鹅膏菌物种提供一个标准二维DNA条形码,实现了序列的信息化,将DNA条形码的应用提升到一个更加实用化的水平。综上,本研究建立了基于β-tubulin与ITS靶基因联合使用的常规DNA条形码技术的鹅膏菌属物种鉴别方法,为有毒蘑菇分类鉴别、亲缘关系分析提供一定的理论基础,并为有毒蘑菇诱发的食源性中毒风险进行预警提供技术支持。另外,针对加工食用后以及长久存储的样品,建立了基于ITS基因序列的微型DNA条形码技术的有毒鹅膏菌属物种鉴别方法,可以为蘑菇中毒事件中中毒原因排查过程提供理论参考及技术支撑。

关键词：鹅膏菌属 DNA条形码微型DNA条形码二维码物种鉴别

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基于DNA条形码技术的鱼翅物种鉴别研究

基于DNA条形码技术的鱼翅物种鉴别研究

作者：隋哲中国海洋大学

学位级别：硕士

鱼翅是我国传统“海八珍”之一，属于高值水产加工品，伴随我国经济的发展，鱼翅消费量逐年增大，鱼翅市场上也因此浮现出诸多乱象。某些商贩将明胶等材料或者鳐类鱼翅标注为鲨鱼鱼翅进行贩卖干扰鱼翅贸易的正常进行，而不法分子捕捞濒... 详细信息

鱼翅是我国传统“海八珍”之一，属于高值水产加工品，伴随我国经济的发展，鱼翅消费量逐年增大，鱼翅市场上也因此浮现出诸多乱象。某些商贩将明胶等材料或者鳐类鱼翅标注为鲨鱼鱼翅进行贩卖干扰鱼翅贸易的正常进行，而不法分子捕捞濒危物种进行割取鱼翅不仅对鱼翅贸易造成了较大阻碍，也人为加重了某些鲨类的濒危程度。为了规范鱼翅市场，打击濒危物种的贸易并避免欺骗消费者现象的发生，鉴于此，进行鱼翅物种鉴别具有重要意义。传统的鱼翅鉴别主要通过感官鉴定法开展，感官鉴定法能够提供一定的鱼翅商品名分类信息，但无法提供准确的鱼翅物种来源信息。鉴于DNA条形码在水产品物种鉴定中运用广泛，准确性高等原因，本文基于DNA条形码方法进行鱼翅物种鉴别的相关研究。鱼翅为鲨鱼鱼鳍中的角质鳍条，属于致密结缔组织，细胞含量不丰富。本文中研究的鱼翅样品为市场上最为常见的明翅，即一种半加工形态鱼翅制品。此类鱼翅是经由鲨鱼鱼鳍通过褪沙（去皮），去除残肉与软骨，漂白晒干等加工步骤得到的。上述原因造成了鱼翅DNA提取的困难。为了获取能够满足条形码鉴定所需的DNA，本文针对鱼翅特性采用了发制-冻干的前处理方法进行鱼翅组织破碎，选取了Chelex-100螯合树脂法，STE法，经典CTAB法以及试剂盒纯化法用于鱼翅DNA提取效果的比较以选取最佳方法。根据比较结果，针对CTAB提取方法中的进行了多个步骤的优化与改进，提出了改良CTAB法用于鱼翅DNA提取。根据DNA浓度值/纯度值以及PCR扩增成功率，改良CTAB法能够获得较好的鱼翅DNA提取效果。为了准确进行国内水产市场中鱼翅制品的物种来源调查，本文选取了我国北方鱼翅贸易中心城市青岛及占全国鱼翅贸易总量90%以上的广东省分别进行采样。本文针对共计例107鱼翅样品进行了DNA条形码鉴别研究。除了选取COⅠ（cytochrome oxidase subunit Ⅰ）外，还着重考虑了使用16SrRNA编码基因进行鱼翅鉴别的可行性与准确性。针对鱼翅样品的物种鉴定结果显示：鱼翅的物种来源较丰富，涵盖不同鲨类10种，如尖吻鲭鲨，路氏双髻鲨，镰状真鲨，大青鲨等;基于16SrRNA序列的鉴定结果与基于COⅠ序列的鉴定结果一致。多数样本与已知物种的现有序列之间能够在聚类关系中形成单系，其中来源于灰鲭鲨属尖吻鲭鲨的鱼翅样品的存在两类聚类关系，基于两基因的聚类关系一致。而针对真鲨属不同种的鉴定结果显示，16SrRNA未能鉴别出来源于杜氏真鲨与蒂氏真鲨的鱼翅样本，进一步分析显示，这是由于NCBI中相关序列（全基因组及16S相关基因）的缺少所造成的，同时也表明基于16SrRNA在进行真鲨属不同鲨鱼物种鉴别水平上的准确性。可以得出结论，16SrRNA基因适用于常见鱼翅的物种来源鉴定。本文针对鲨鱼物种进行分析显示，存在两类双髻鲨类（路氏双髻鲨与锤头双髻鲨）为华盛顿公约附录Ⅱ中禁止国际贸易的物种，所占比例达到所检鱼翅的14.01%，上述两类鲨鱼及其相关制品属于我国二级重点保护动物，其相关贸易违反了我国现有法律条例。此外，所检鱼翅样品存在大眼长尾鲨、尖吻鲭鲨等根据红色名单划分属于“易危”类别，虽然我国现目前并没有针对此两类鲨鱼制定强制性法律要求，但世界范围的渔业管理部门已将此两类鲨鱼作为重点保护对象，应当控制其及其制品的相关贸易。鉴于上述现象，亟需基于物种水平的实施鲨鱼资源管理特别是鱼翅物种来源鉴定及管理措施，以保护濒危特种鲨鱼并维持鲨类资源可持续利用。

关键词：鱼翅 DNA提取 16SrRNA COⅠ 物种鉴别

鹧鸪线粒体COII、ATPase8和3个tRNA基因序列分析及物种鉴别研究

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中国畜牧兽医 2008年第4期35卷 52-56页

作者：王静宗卉刘丑生张利平范万红吴建平杨联甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 深圳检验检疫局深圳518000 农业部全国畜牧总站畜禽牧草种质资源保存利用中心北京100094

线粒体DNA是真核生物核外遗传物质,其结构简单,发生变异的机率相对稳定,被广泛用于系统起源、进化、亲缘关系及物种鉴别的研究中。为了挖掘禽类(源性成分)鉴别的分子生物学数据,探讨线粒体不同基因发育信息及鉴别的可信度和灵敏度。本... 详细信息

线粒体DNA是真核生物核外遗传物质,其结构简单,发生变异的机率相对稳定,被广泛用于系统起源、进化、亲缘关系及物种鉴别的研究中。为了挖掘禽类(源性成分)鉴别的分子生物学数据,探讨线粒体不同基因发育信息及鉴别的可信度和灵敏度。本研究扩增鹧鸪线粒体基因组中COⅡ、ATPase8区域,克隆出1138 bp片段,测序结果分析表明,在所克隆的片段中,含有COⅠ基因部分序列、tRNASer基因、tRNAAsp基因、COⅡ基因、tRNALeu基因、ATPase8基因全序列和ATPase6基因部分序列。分析COⅡ、ATPase8和tRNA基因显示其与鹌鹑、鸡、火鸡、鹅、鸵鸟5种禽类的序列均具有较高的同源性,基于它们用MEGA3.1构建系统进化树,探讨了它们所含的信息量及在鹧鸪和其它禽类鉴别方面的应用潜力,发现COⅡ比AT-Pase8和tRNA基因含有更多的鉴别信息。

关键词：鹧鸪线粒体DNA 克隆序列分析物种鉴别

合成牛肉、三文鱼咋鉴定？郑州海关实验室展示“物种鉴别”新方法

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食品工业 2019年第8期40卷 210-210页

'大排档易容羊肉串''合成牛肉''虹鳟冒充三文鱼'……生活中,这些涉及食品安全的现象屡有发生。那么权威部门是怎样鉴定的呢?在郑州海关实验室开放日活动中,工作人员介绍了一种基因扩增法的'物种鉴别'方法。在郑州海关技术中心化学检测... 详细信息

'大排档易容羊肉串''合成牛肉''虹鳟冒充三文鱼'……生活中,这些涉及食品安全的现象屡有发生。那么权威部门是怎样鉴定的呢?在郑州海关实验室开放日活动中,工作人员介绍了一种基因扩增法的'物种鉴别'方法。在郑州海关技术中心化学检测实验室、生物检测实验室,工作人员介绍,面对假羊肉卷(串)、合成牛肉、虹鳟冒充三文鱼等现象.

关键词：三文鱼物种鉴别

基于DNA条码技术的食品中鲑科鱼物种成分鉴别研究

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基于DNA条码技术的食品中鲑科鱼物种成分鉴别研究

作者：王楠山东农业大学

学位级别：硕士

鲑科鱼是一类具有营养价值和保健功效的深海鱼类,味道鲜美可口,深受广大消费者喜爱。目前,我国鲑科鱼类产品多依靠进口,需要经过多次转运之后才能到达商品销售地,而我国的市售鲑科鱼类食品标签规范性较差,仅以“三文鱼”作为商品标识,... 详细信息

鲑科鱼是一类具有营养价值和保健功效的深海鱼类,味道鲜美可口,深受广大消费者喜爱。目前,我国鲑科鱼类产品多依靠进口,需要经过多次转运之后才能到达商品销售地,而我国的市售鲑科鱼类食品标签规范性较差,仅以“三文鱼”作为商品标识,无法获知产品的具体物种信息。此外,鲑科鱼的深加工制品,因已丧失其鱼肉的原始形态,在经济利益的驱动下,存在以次充好、以假乱真等掺杂掺假现象,极大损害了消费者的利益。因此,亟需开发可靠、灵敏的鉴别方法以验证商品标签符合性。本研究旨在建立一整套完备的食品中鲑科鱼类物种成分鉴别方法,主要结果如下:(1)鲑科鱼产品DNA提取方法研究针对不同加工类型的鲑科鱼产品,比较了不同DNA提取方法的提取浓度和纯度,确定了最佳DNA提取方法。研究结果表明,在样品DNA提取方面,十六烷基三甲基溴化铵法对冰鲜、冰冻等未加工样品的DNA提取效果更好,NucleoSpin Food试剂盒法更适用于烟熏、罐头、鱼松等加工制品DNA提取。(2)基于Sanger测序的DNA条形码技术鲑科鱼物种鉴别研究针对单一物种组成样品,选择COI长条形码(658 bp)和16S rRNA微条形码(255 bp)作为分子标记,经PCR扩增后,对纯化的扩增产物进行Sanger测序,测序结果经序列拼接后与Genbank数据库进行BLAST比对获得物种序列信息。研究发现所有鱼类样品的两个扩增区间同Genbank数据库的序列覆盖度均在97%以上,且单独以COI或16S rRNA为靶标均能准确获得物种信息,测序成功率达100%。但就物种序列的最高匹配度而言,部分16S rRNA的序列鉴定结果≤COI序列鉴定结果,由此建立了以COI为主要靶标,16S rRNA为辅助靶标的基于Sanger测序的DNA条形码技术。(3)基于高通量测序的DNA条形码技术鲑科鱼类混合样品鉴别研究以鲑科鱼类混合样品为研究对象,16S rRNA微条形码为分子标记,建立基于高通量测序的DNA条形码技术,结合测序通量、测序结果准确性和检测灵敏度等评估该技术在混合物种鉴定中的可行性。结果显示,本研究建立的基于16S rRNA的高通量测序技术可准确检测出混合样品中包含的全部物种,测序通量高、准确性好,并可检测出低至1%含量的物种。(4)市售样品的分析将本研究建立的DNA条形码技术应用于32份市售鲑科鱼类食品的物种鉴别,针对不同的食品类型选择合适的测序方法,并对市售鲑科鱼食品标签的准确性进行初步研判。共在17份(53.13%)鲑科鱼加工制品中检出标签中未标识的物种,即存在不同程度的掺杂掺假现象。本研究建立的DNA条形码技术,可广泛应用于各类型鲑科鱼食品的物种鉴别,为鲑科鱼食品的市场监管提供技术支撑。

关键词：鲑科鱼 DNA条形码技术高通量测序物种鉴别标签