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烷烃降解菌的筛选、鉴定及优势菌株的降解特性

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应用与环境生物学报 2011年第4期17卷 572-576页

作者：郭娜李志敏叶勤华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

以正庚烷为唯一碳源,从长期受到石油污染的土壤中筛选获得可利用正庚烷的微生物14株.通过形态观察和16S rDNA序列比对,鉴定G2、G9、G14为红球菌属,G3、G27为人苍白杆菌属,G4、G7为芽孢杆菌属,G5、G10、G15、G25为节杆菌属,G16为缺陷短... 详细信息

以正庚烷为唯一碳源,从长期受到石油污染的土壤中筛选获得可利用正庚烷的微生物14株.通过形态观察和16S rDNA序列比对,鉴定G2、G9、G14为红球菌属,G3、G27为人苍白杆菌属,G4、G7为芽孢杆菌属,G5、G10、G15、G25为节杆菌属,G16为缺陷短波单胞菌,G17、G22为嗜麦芽寡养单胞菌属.通过考察其降解烷烃的能力,确定Rhodococcus sp.G2为烷烃降解优势菌株.该菌株可代谢庚烷获得最大菌体浓度D600 nm=7.51.同时该菌对不同碳链长度的烷烃,如十二烷、十六烷、煤油和二甲苯均具有较强的降解能力,以十二烷为碳源的最大比生长速率为0.37 h-1,最高菌体浓度为D600 nm=12.00,在正十六烷中生长,最大比生长速率为0.23 h-1,在煤油中生长,最大比生长速率为0.14 h-1,在以二甲苯为唯一碳源时,D600 nm也可达到1.00左右.研究表明该菌株对于石油污染土壤的生物修复有很大的应用前景.

关键词：烷烃降解红球菌菌株筛选 16S rDNA 石油污染土壤生物修复

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烷烃降解菌的选育及优势菌株的代谢研究

烷烃降解菌的选育及优势菌株的代谢研究

作者：郭娜华东理工大学

学位级别：硕士

石油在勘探、开采、运输、储存和加工等过程中会对环境造成严重污染,其主要化学成分是烷烃、苯、甲苯、二甲苯和复杂芳香烃等,多有致癌变、致突变、致畸变作用。本文从石油污染土壤中筛选具有烷烃降解能力的优势生长菌,以期利用该菌株... 详细信息

石油在勘探、开采、运输、储存和加工等过程中会对环境造成严重污染,其主要化学成分是烷烃、苯、甲苯、二甲苯和复杂芳香烃等,多有致癌变、致突变、致畸变作用。本文从石油污染土壤中筛选具有烷烃降解能力的优势生长菌,以期利用该菌株通过对烷烃的降解而产生具有商业价值的有机酸或酯类物质。本研究从受污染的土壤中筛选和培养了可利用庚烷的微生物14株,并对其进行16S rDNA鉴定,其中G2、G9、G14为红球菌属,G3、G27为人苍白杆菌属,G4、G7为芽孢杆菌属,G5、G10、G15、G25为节杆菌属,G16为缺陷短波单胞菌,G17、G22为嗜麦芽寡养单胞菌属。通过对这些菌株的降解能力考察,确定Rhodococcus sp. G2为烷烃降解优势菌株。同时本文研究Rhodococcus sp. G2对正庚烷、正十二烷、二甲苯等物质的降解,盐浓度对其生长的影响,以及葡萄糖和烷烃同时存在时该菌株的降解机制,并对该菌利用烷烃发酵产生的代谢产物进行了成分分析。结果表明,Rhodococcus sp. G2对于不同碳链长度的烷烃,甚至二甲苯均具有较强的降解能力;在以正十二烷为唯一碳源的实验中,培养18h时,菌体浓度OD600即达到12左右,产生的表面活性剂对于两相溶液的乳化性E24%为67.44%,对其产物进行分析可知存在酮及酯类物质;当氯化钠浓度达到10g/L时,Rhodococcus sp. G2的生长状况最佳;比起易利用的葡萄糖,该菌株更偏好于利用烷烃类物质。经过发酵过程优化,发现该菌株对于正十二烷和硫酸铵的利用是按照8：1的比例来摄取的。在正十二烷为碳源的代谢产物分析结果初步表明,Rhodococcus sp. G2利用烷烃的机制可能是多种氧化方式并存。

关键词：烷烃降解 16SrDNA 红球菌表面活性剂

高效烷烃降解菌XCZ的分离、鉴定及其烷烃单加氧酶基因alkB功能的研究

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高效烷烃降解菌XCZ的分离、鉴定及其烷烃单加氧酶基因alkB功能的...

作者：陆健南京农业大学

学位级别：硕士

本研究从原油中分离筛选到一株高效烷烃降解菌XCZ，经形态观察、生理生化特征、16S rDNA序列分析等将其初步鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。XCZ能以正十八烷为唯一碳源生长，在含500mg／L正十八烷为唯一碳源的培养基中培... 详细信息

本研究从原油中分离筛选到一株高效烷烃降解菌XCZ，经形态观察、生理生化特征、16S rDNA序列分析等将其初步鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。XCZ能以正十八烷为唯一碳源生长，在含500mg／L正十八烷为唯一碳源的培养基中培养40h后正十八烷降解率达97．5％。XCZ降解正十八烷的最适温度为37℃，最适pH值为7．0。XCZ可以降解高浓度原油(2g/L)中C-C的直链烷烃，其中对C-C烷的降解率大于80％。从*** XCZ的基因组DNA中扩增到了烷烃单加氧酶基因alkB1、alkB2，与模式菌株*** PAO1中的alkB1、alkB2基因同源性均大于99％。为了进一步研究***中alkB1、alkB2基因在烷烃降解中所起的作用，分别构建了两个用于突变*** XCZ中alkB1、alkB2基因的自杀式质粒：pEXB1’K用于突变alkB1基因，pJQB2’T用于突变alkB2基因。利用三亲接合的方法将两个同源重组质粒分别导入*** XCZ中，得到了alkB1基因单突变菌株B1M、alkB2基因单突变菌株B2M;将pJQB2’T导入B1M中得到了alkB1/alkB2基因双突变菌株B12M。Southern杂交的结果显示在*** XCZ中只存在单一的alkB1、alkB2基因拷贝;B1M、B12M中的alkB1基因以及B2M、B12M中的alkB2基因已经被成功的突变了。通过比较野生菌株及突变菌株在不同烷烃中的生长情况，分析了***中alkB1、alkB2基因的烷烃降解范围及其降解能力。研究发现双突变茵株B12M失去了对C-C烷的降解能力，但仍然能够降解C及以上的烷烃，说明在*** XCZ中还存在其它的烷烃降解基因，它(们)能够降解C及以上的烷烃，而alkB1、alkB2基因对于C及以下烷烃的降解是必需的。B1M、B2M均能够利用C-C烷生长，它们在C-C烷为唯一碳源培养基中的生长速率大于B12M而小于野生菌株，但在C-C烷为唯一碳源培养基中的生长速率却与B12M及野生菌株无明显差异。这说明*** XCZ中的烷烃单加氧酶AlkB1、AlkB2的烷烃降解范围可能都是C-C烷，它们均不能降解C及以上的烷烃。B1M在C-C烷为唯一碳源培养基中的生长速率要快于B2M，说明对于C-C烷的降解，alkB2基因相比alkB1基因起着更大的作用。B2M对C、C烷的降解效率很低，所以C、C烷的降解主要依赖于AlkB2。

关键词：烷烃降解分离鉴定铜绿假单胞菌烷烃单加氧酶基因敲除功能研究

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极端嗜盐古菌烷烃降解特征研究

极端嗜盐古菌烷烃降解特征研究

作者：黄河浪四川大学

学位级别：硕士

随着世界石油产业的不断发展,石油烃污染也日渐严峻。微生物处理法对比传统物化方法具有许多优势,逐渐成为世界主流的石油烃处理方法,但炼油废水、高盐废水等石油烃污染环境中往往盐度极高,绝大部分微生物难以生存。极端嗜盐古菌(Haloar... 详细信息

随着世界石油产业的不断发展,石油烃污染也日渐严峻。微生物处理法对比传统物化方法具有许多优势,逐渐成为世界主流的石油烃处理方法,但炼油废水、高盐废水等石油烃污染环境中往往盐度极高,绝大部分微生物难以生存。极端嗜盐古菌(Haloarchaea)是一类依赖高盐度环境生长的古菌,目前已有研究发现一些极端嗜盐古菌具有石油烃降解能力。然而,关于极端嗜盐古菌石油烃降解机理的研究仍然缺乏,其代谢方式尚不明晰。针对这些问题,本研究较全面地归总了极端嗜盐古菌潜在烷烃代谢相关酶,并从系统发育角度探究了潜在烷烃羟化酶在极端嗜盐古菌内的分布规律;利用组学手段解析了两株极端嗜盐古菌中可能的烷烃降解机制,并通过条件优化提升了两株菌的烷烃降解效率。研究结果有助于极端嗜盐古菌的烷烃代谢机理研究,同时可为高盐环境下石油烃的微生物降解提供指导。本论文的主要结果如下:根据目前已报道的烷烃降解途径,筛选归总了 116株极端嗜盐古菌潜在烷烃代谢相关酶,发现其中112株具有完整的潜在烷烃降解途径,其中潜在烷烃羟化酶种类有CYP450、AlmA和LadA;借助系统发育分析手段,发现极端嗜盐古菌的CYP450系统发育地位相对细菌较为独立,而AlmA和LadA和细菌的呈交叉分布。通过柴油降解评估,从10株极端嗜盐古菌中筛选出两株具有烷烃降解能力的菌株 Halogranum rubrum RO2-11 和 Haladaptatus litoreus RO1-22,9 d 降解率分别为70%和55%(初始浓度0.5%v/v)。对两株菌株及没有烃降解能力的RO1-22的同种菌株RO1-28进行基因组测序,发现三株菌株均具有完整的潜在烷烃降解途径;潜在烷烃羟化酶方面,三株菌株均有AlmA和LadA,而CYP450只在RO2-11和RO1-22中被发现。探究RO2-11和RO1-22的十六烷降解特性,发现两者必须在有额外辅助碳源存在条件下才能降解十六烷,且降解过程中未检测到生物表面活性剂生成。解析RO2-11和RO1-22十六烷降解条件下转录组,发现RO2-11潜在烷烃降解相关基因上调不明显,本底表达量较高;RO1-22潜在烷烃降解基因明显上调,但表达量相对较低,且上调的烷烃羟化酶基因只有CYP450。两株菌株TCA循环和赖氨酸合成途径的基因均有不同程度上调。通过对RO2-11十六烷降解代谢组分析,发现其可能具有一种基于双末端氧化的新烷烃氧化机制,且细胞内可能存在大量的赖氨酸乙酰化翻译后修饰过程。通过探究酵母提取物、鱼蛋白胨、丙酮酸钠三种额外有机碳源以及盐度、pH、温度对RO2-11和RO1-22降解十六烷的影响,发现这些因素对两株菌株降解十六烷的效率均有不同程度影响,进一步优化了两株菌株的烷烃降解条件。通过煤油降解评估发现,在优化条件下RO2-11和RO1-22在3 d内的煤油降解率分别达到76%和50%(初始浓度0.5%v/v)。

关键词：极端嗜盐古菌烷烃降解系统发育分析组学手段条件优化

Dietzia DQ12-45-1b中铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶在烷烃降解过程中的关键作用

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Dietzia DQ12-45-1b中铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶在烷烃降解过...

作者：范裕昭合肥工业大学

学位级别：硕士

在工业原油的开采过程中产生了较为严重的石油泄漏与周边土壤的原油污染现象,而对于原油污染所造成的环境污染情况的治理方法较少,而通过基因工程的技术手段对微生物进行改造优化,并应用于特定环境的土壤修复是最有前景的生态修复技术... 详细信息

在工业原油的开采过程中产生了较为严重的石油泄漏与周边土壤的原油污染现象,而对于原油污染所造成的环境污染情况的治理方法较少,而通过基因工程的技术手段对微生物进行改造优化,并应用于特定环境的土壤修复是最有前景的生态修复技术方案。通过对特定污染区域的环境中提取分离出的菌株,利用其对环境中的污染物为营养源的原理,对筛选出的降解菌株进行基因工程的分析与改造以应用于特定污染环境的治理场景是微生物生态修复技术手段中至关重要的一步。而作为烷烃降解途径中最为关键的一环,菌株中烷烃羟化酶的作用体系与原理则是后续进行基因改造的基石。本论文主要研究了从大庆油田环境中分离出的一株迪茨氏菌属菌株Dietzia ***12-45-1b菌株中,其存在的两组主要的烷烃羟化酶CYP153和Alk W,在菌株降解中长链烷烃的过程中可能存在的相互作用。主要通过中长链烷烃C16与C28为唯一碳源的形式培养前期随机插入文库获取的敲除菌株,筛选出相对于野生型菌株生长劣势的菌株确定随机插入位点,通过对相关基因的敲除与回补,对其分别进行C16和C28的单一碳源培养,对比野生型和不同敲除及回补菌株的生长情况,进而确定了位于p1质粒上的P450烷烃羟化酶基因簇对于DQ12-45-1b降解中长链烷烃C16的过程中起到至关重要的作用。有趣的是,P450基因簇由铁氧还蛋白(Ferredoxin)、细胞色素CYP153和铁氧还蛋白还原酶(Ferredoxin Reductase)三个基因所构成,而铁氧还蛋白与铁氧还蛋白还原酶的共同存在对烷烃降解过程至关重要,而作为P450烷烃羟化酶的核心CYP153基因的缺失却没有影响到DQ12-45-1b对正十六烷的利用,前期的工作表明,正十六烷的降解主要由另一组烷烃羟化酶Alk W羟化,由此推测Alk W在催化铁氧还蛋白与铁氧还蛋白还原酶的电子传递过程中起到了关键作用,而这也与Alk W相对于Alk B在电子传递蛋白红素氧还蛋白还原酶的缺失相对应。通过对两种烷烃羟化酶体系可能存在的催化作用的研究,有助于揭示多烷烃体系中可能存在的相互作用关系,为进一步了解烷烃羟化酶的作用过程中的作用机制提供理论基础。

关键词：烷烃降解迪茨氏菌属铁氧还蛋白铁氧还蛋白还原酶电子传递

CrgA调控假单胞菌SJTD-1中长链烷烃降解的分子机制研究

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CrgA调控假单胞菌SJTD-1中长链烷烃降解的分子机制研究

作者：纪南南上海交通大学

学位级别：硕士

微生物修复的方法被认为是解决石油污染的一种有效绿色又节能的手段。截至目前,已有多种石油降解菌株、石油降解的途径及相关酶系被分离鉴定出来,降解相关的调控已有部分推进。然而,中长链烷烃降解作为其中的研究难点,其调控机制依然不... 详细信息

微生物修复的方法被认为是解决石油污染的一种有效绿色又节能的手段。截至目前,已有多种石油降解菌株、石油降解的途径及相关酶系被分离鉴定出来,降解相关的调控已有部分推进。然而,中长链烷烃降解作为其中的研究难点,其调控机制依然不明确。本课题组前期分离出了一株可以高效降解长度为C12-C32的烷烃类物质的铜绿假单胞菌株SJTD-1,通过对其全基因组测序及注释,蛋白质组学分析等方式我们筛选出了一些潜在的与烷烃降解代谢相关的基因P450、P450、alkB1、alkB2、almA1、almA2、ladA1、ladA2等,且alkB2基因已被证实参与了SJTD-1中的中长链烷烃降解。通过Pull-Down实验我们筛选出了若干个包括预测为CrgA在内的可能参与到SJTD-1菌株烷烃降解代谢的转录调控因子。本工作由体外和体内两方面着手,体外通过CrgA蛋白异源表达、凝胶阻滞实验、Footprinting实验、解离试验,体内通过敲除实验、生长曲线测定、RT-qPCR、荧光表达实验,探究了转录调控因子CrgA对筛选出的几个中长链烷烃降解基因尤其是alkB2基因的调控作用。通过多序列比对、进化树分析与三级结构的模拟,铜绿假单胞菌株SJTD-1中预测为CrgA的蛋白与脑膜炎奈瑟氏菌中的CrgA具有较高的同源性和序列相似性,故将其归为LysR家族CrgA亚家族;凝胶阻滞实验显示CrgA蛋白与alkB2、almA2、ladA1、ladA2基因以及自身编码基因crgA上游启动子区均有特异性的结合;Footprinting实验显示CrgA蛋白与alkB2基因上游启动子区有两个镜像结构即反向对称结构(IIR)的结合区,分别为:5’-CCCTTGGCCGGC/CTGCCCCATCCC-3’和5’-TCGTTCTGT/CCGCCGCT-3’。且将该结构截断一半破坏其反向对称的结构后,与CrgA蛋白的结合水平大大减弱。这一现象表明该结构是对两者结合的关键结构;烷烃的中间代谢产物,十六酰-CoA与十八酰-CoA对CrgA蛋白与alkB2基因上游启动子区的结合具有解除效应,而乙酰辅酶A等其他效应物对其不具有显著的解除效应。生长实验显示crgA基因的敲除使得菌株在烷烃为碳源生长时的生长速率加快;RT-qPCR实验显示SJTD-1与crgA单敲除菌株S1ΔcrgA在葡萄糖和不同中长链烷烃(C12-C24)中培养时,相较于在葡萄糖中培养,alkB2基因的转录表达水平显著升高。敲除crgA基因后,在烷烃存在条件下,S1ΔcrgA中alkB2基因的转录表达水平较高。almA2、ladA1、ladA2基因也显示了同样的现象;荧光表达实验显示,带有alkB2启动子的报告质粒在S1ΔcrgA菌株荧光蛋白的表达高于带有相同质粒的野生型SJTD-1菌株。且在烷烃存在时相较于葡萄糖为唯一碳源,绿色荧光蛋白的表达水平更高。综上可知,CrgA可以通过抑制alkB2的转录来参与菌株SJTD-1的烷烃降解调控过程。且CrgA蛋白也可能参与了almA2、ladA1、ladA2等几个长链烷烃羟化酶编码基因的转录调控。本研究进一步推进了烷烃降解的分子调控机制研究,为后续对高效可应用菌株的改造提供可靠的理论支持。

关键词：铜绿假单胞菌SJTD-1 烷烃羟化酶烷烃降解转录调控 CrgA

一株深海不动杆菌烷烃降解特性及基因组学和转录组学研究

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一株深海不动杆菌烷烃降解特性及基因组学和转录组学研究

作者：赵成西北大学

学位级别：硕士

烷烃作为石油中的主要污染物由于其疏水性、有毒性等特性对生态环境造成严重破坏,微生物修复是目前采用较广的一种修复方法。本研究以深海不动杆菌Acinetobacter pittii sw-1为出发菌株,结合基因组学和转录组学研究菌株的烷烃降解特性... 详细信息

烷烃作为石油中的主要污染物由于其疏水性、有毒性等特性对生态环境造成严重破坏,微生物修复是目前采用较广的一种修复方法。本研究以深海不动杆菌Acinetobacter pittii sw-1为出发菌株,结合基因组学和转录组学研究菌株的烷烃降解特性及代谢调控机制。正构烷烃降解实验表明*** sw-1能够以CC的正构烷烃为唯一碳源进行生长,对C-C的正构烷烃降解率均在80%以上,对较长烷烃C和C降解能力较弱。添加适当浓度的表面活性剂鼠李糖脂后能够促进菌株对烷烃的利用。菌株最适p H在7-8之间,并能够耐受3%的Na Cl,在15℃低温条件下也能够降解烷烃,此外菌株对多数重金属都具有一定的耐受性。全基因组测序显示,菌株基因组大小为4071456 bp,G+C含量38.66%,共有3808个蛋白质编码序列(protein coding sequence,CDS),1个16S rRNA,1个23S rRNA,63个tRNAs,以及4个ncRNAs。此外,菌株基因组上有一系列烷烃降解相关基因,包括四个烷烃羟化酶基因alk B、alm A、lad A1和lad A2,相应的调节因子以及乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶等基因,同时分析了四个烷烃羟化酶序列与其它菌株的同源关系。比较基因组学研究显示菌株sw-1与*** HUMV4683亲缘关系最近,菌株在脂质代谢和转运、DNA复制、重组和修复、转录、翻译、防御机制及可移动原件原噬菌体和转座子等方面较其它烷烃降解菌具有一定的优势。此外,本研究通过转录组测序探究了菌株sw-1在C诱导下的烷烃降解相关基因的表达情况。分析结果显示,表达有显著差异的基因共831个,包括上调基因437个,下调基因394个。其中多个烷烃代谢通路的基因出现上调,烷烃羟化酶基因alk B上调量高达78.28倍。此外参与TCA循环、不饱和脂肪酸、膜蛋白、渗透酶、外排泵及硫转运蛋白生物合成的基因均出现不同程度的诱导。RT-qPCR结果证实,C、C和C均能显著诱导alk B的表达,alm A在C和C诱导下的表达量的高于C,而lad A2仅被C诱导,lad A1均未被上述正构烷烃诱导。综上所述,本研究在结合基因组和转录组测序的基础上,分析了深海不动杆菌*** sw-1的烷烃降解特性和代谢调控途径,对菌株sw-1应用到烷烃污染修复中提供了基础理论指导。

关键词：深海不动杆菌烷烃降解烷烃羟化酶基因组学转录组学

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微生物降解烷烃中间产物分离鉴定及代谢途径

大庆石油地质与开发 2010年第5期29卷 140-142页

作者：盖立学陆原鹏郭盟华金锐中国石油大学石油工程学院北京102200 大庆油田有限责任公司黑龙江大庆163453 哈尔滨工业大学计算机科学与技术学院黑龙江哈尔滨150001 大庆油田有限责任公司勘探开发研究院黑龙江大庆163712

为进一步提高微生物降解原油烃的效率,采用铜绿假单胞菌、蜡状芽胞杆菌和地衣芽孢杆3株采油菌株进行微生物降解烷烃途径研究,建立了中间产物分离制备方法,采用重氮甲烷衍生的方法对酸性中间产物进行甲基化衍生,实验菌株对正十四烷、正... 详细信息

为进一步提高微生物降解原油烃的效率,采用铜绿假单胞菌、蜡状芽胞杆菌和地衣芽孢杆3株采油菌株进行微生物降解烷烃途径研究,建立了中间产物分离制备方法,采用重氮甲烷衍生的方法对酸性中间产物进行甲基化衍生,实验菌株对正十四烷、正二十二烷和非正构烷烃化合物具有较高的降解能力.利用GC-MS方法,在实验菌株作用正二十二烷的产物中,检测到二十二烷酸、十八烷酸和十六烷酸,可以判断采油微生物是以末端单加氧的形式代谢正二十二烷生成二十二烷醇,然后进一步氧化成酸,进入β-氧化过程.该研究为微生物摄取原油中不同组分和控制降解过程、进一步改善微生物采油技术效果奠定了理论基础.

关键词：微生物采油烷烃降解 GC-MS 代谢途径 β-氧化

一株降解中长链烷烃菌株的分离鉴定及其特性研究

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一株降解中长链烷烃菌株的分离鉴定及其特性研究

作者：谭佳西华师范大学

学位级别：硕士

随着石油的不断开发,石油污染日益严重,这不仅损害环境,对人类的健康也伤害极大。因此,石油污染的治理越来越受到人们的关注。石油污染的微生物修复是既经济、环保,又高效的修复方法。但目前仍缺乏对高效、稳定、适应性强的石油降解菌... 详细信息

随着石油的不断开发,石油污染日益严重,这不仅损害环境,对人类的健康也伤害极大。因此,石油污染的治理越来越受到人们的关注。石油污染的微生物修复是既经济、环保,又高效的修复方法。但目前仍缺乏对高效、稳定、适应性强的石油降解菌的深入研究,而高效的石油降解菌又是进行石油污染治理的关键。本研究从长期被石油污染的土壤中采集样品,以原油为唯一碳源,经过一系列的筛选、分离纯化,获得一株石油烃降解菌,将其命名为TWJ22。经过形态学研究、生理生化研究和16S r DNA进化分析对该菌进行初步鉴定。该菌为革兰氏阴性菌、无芽孢、无荚膜,菌体呈短杆状,大小为0.5~0.8μm×0.9~2.0μm,氧化酶阴性,与液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）和变形斑沙雷氏菌（Serratia proteamaculans）的生理生化特征相似度较高,经过16S rDNA进化分析,确定该菌为变形斑沙雷氏菌（Serratia proteamaculans）。本文对该菌在LB液体培养基中的最适生长条件了进行研究,其最适生长温度为30℃、最适生长pH为7.0、最适摇床转速为180 rpm。实验结果表明以1%的甘油为唯一碳源的无机盐培养基为该菌的最佳种子培养基（Optimum seed medium）,且在最佳种子培养基中,菌株TWJ22经过2h的延迟期后,进入对数生长期,在16h左右到达稳定生长期。对该菌降解性能的研究发现,该菌对C12、C14、C16、C18、C20、C22、C24、C28、C32均有一定的降解作用,但对C22的降解效果最好。当TWJ22接入以C22（2%,W/V）为唯一碳源的无机盐培养基中培养时,正二十二烷降解的最适温度为30℃、最适生长pH为7.0、最适Na Cl浓度为0~1%、最适接种量为3%,在最适降解条件下,该菌对正二十二烷的降解率可达70%。土壤中金属离子的浓度对石油烃降解菌的生长影响也很大,因此本文还研究了金属离子对菌株TWJ22生长的影响。研究发现,低于0.01 mmol/L的Ag+、Ni2+对该菌生长的抑制极强,表明Ag+、Ni2+对TWJ22有较强的毒性;Cr3+、Fe3+、Pb2+、Ti4+在浓度小于0.05 mmol/L时,对该菌生长的抑制作用不明显,在浓度高于0.06mmol/L时,抑制作用较强;Co2+、Cu2+在浓度小于0.01 mmol/L时,对该菌的生长有一定的促进作用,当浓度大于0.03 mmol/L时,对该菌的生长有很强的抑制作用;Fe2+、Mn2+、Ba2+、K+在浓度小于0.06 mmol/L时,对该菌的生长有促进作用,当浓度逐渐增大时,抑制该菌的生长且抑制作用也逐渐增大;Ca2+、Mg2+在浓度高达5 mmol/l时,对菌株TWJ22的生长表现为促进作用。其研究结果对于利用该菌株处理石油废水具有一定的指导意义。

关键词：微生物修复石油烃降解菌分离鉴定烷烃降解金属离子