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纤维素科学与技术 2016年第3期24卷 12-16,58页

作者：刘毅超付雅欣陆泽赟高红亮常忠义杨雪霞东华大学化学化工与生物工程学院上海201620 华东师范大学生命科学学院上海200062

采用亚硝基胍诱变热凝胶多糖产生菌土壤杆菌(Agrobacterium sp.)DH02以提高热凝胶多糖的产量。以热凝胶多糖产量和凝胶强度为指标,采用平板初筛和摇瓶复筛,得到一株高产突变菌株39#,该菌株热凝胶多糖粗提产量为30.5 g/L,较出发菌株产量2... 详细信息

采用亚硝基胍诱变热凝胶多糖产生菌土壤杆菌(Agrobacterium sp.)DH02以提高热凝胶多糖的产量。以热凝胶多糖产量和凝胶强度为指标,采用平板初筛和摇瓶复筛,得到一株高产突变菌株39#,该菌株热凝胶多糖粗提产量为30.5 g/L,较出发菌株产量25.1 g/L提高21.5%,凝胶强度从出发菌株的593 g/cm^2提高到811 g/cm^2。

关键词：热凝胶多糖亚硝基胍诱变产量凝胶强度

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热凝胶多糖产生菌株的诱变选育

热凝胶多糖产生菌株的诱变选育

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作者：付雅欣东华大学

学位级别：硕士

热凝胶多糖是一种主要由土壤杆菌类微生物产生的胞外多糖,具有独特的加热成胶性、良好的持水性、冻融性稳定性和安全性等优良特性,在食品、生物医药等领域具有广阔的应用前景。虽然热凝胶多糖在国外已实现工业化生产,但生产成本仍较高,... 详细信息

热凝胶多糖是一种主要由土壤杆菌类微生物产生的胞外多糖,具有独特的加热成胶性、良好的持水性、冻融性稳定性和安全性等优良特性,在食品、生物医药等领域具有广阔的应用前景。虽然热凝胶多糖在国外已实现工业化生产,但生产成本仍较高,产量和质量仍需进一步提高。菌种改造是提高微生物发酵产品产量和质量的重要手段之一。本文通过对菌种的诱变选育以提高热凝胶多糖的产量和特性,主要内容包括采用紫外诱变、亚硝基胍诱变、复合诱变等多种手段对热凝胶多糖产生菌株进行诱变和筛选,考察了高产菌株的生长代谢规律,并对菌株产生的热凝胶多糖结构及凝胶性能进行了测试分析。(1)诱变出发菌株714经16Sr DNA序列同源性比对并结合生理生化特征鉴定为土壤杆菌属细菌。(2)对菌株714进行紫外诱变,所得诱变条件为:培养20h的种子液稀释至OD为0.4(10CUF/ml)用于诱变,诱变时间15s和25s时对应的致死率为74.1%和97.7%。建立了紫外诱变-平板筛选-摇瓶筛选体系。通过苯胺蓝平板显色法共挑选35株菌,摇瓶发酵初筛得到10株得率高于对照的菌株,其中菌株25-19-2所产热凝胶多糖粗提得率为18.8g/L,是出发菌株714所产热凝胶多糖粗提得率(3.8g/L)的4.9倍。且该菌株产热凝胶多糖的遗传性能稳定。(3)采用苯胺蓝平板显色法筛选菌株时,容易出现假阳性,这是由于部分菌株代谢产酸较多,易使苯胺蓝染料显色而并非产热凝胶多糖较多所致。(4)以紫外诱变得到的高产菌株25-19-2为出发菌株进行亚硝基胍诱变。种子液培养至20h,诱变处理时间为30min,,当亚硝基胍浓度为0.4mg/ml时,致死率为90%左右;亚硝基胍浓度为0.6mg/ml时致死率接近100%。致死率为90%以上的高剂量下更容易筛得高产菌株。通过苯胺蓝平板筛选出344株形态正突变菌株,摇瓶发酵初筛得到热凝胶多糖粗提得率高于出发菌株10%的菌株19株,经反复验证后得到两株高产菌株0.5-50和0.6-45,热凝胶多糖的粗提得率和精提得率分别为26.4g/L、19.4g/L和26.5g/L、18.0g/L,分别是出发菌株714热凝胶多糖粗提得率(3.8g/L)的6.95和6.97倍。(5)以亚硝基胍诱变高产菌株0.6-45为出发菌株,进行紫外-氯化锂、紫外-5-氟尿嘧啶复合诱变,平板筛选分别得到4株和17株形态正突变菌株,但经摇瓶发酵筛选后未得到得率显著提高的菌株,可能是因为筛选菌数较少。(6)考察了培养基糖浓度对高产菌株0.6-45和0.5-50产多糖和对培养基中糖利用的影响。发酵培养基葡萄糖浓度低于90g/L时,两高产菌株能完全利用培养基中的糖,发酵4天时菌株0.6-45和0.5-50的热凝胶多糖粗提得率分别为29.8g/L和30.0g/L,培养基中剩余葡萄糖含量分别为1.11g/L和1.05g/L。两菌株的生长代谢规律相似,培养至第1天菌体生物量达最大值,分别为2.96g/L和2.98g/L;菌株从第一天开始产热凝胶多糖,至发酵培养第4天时热凝胶多糖得率达最大值,粗提得率分别为29.2g/L和28.9g/L,精提得率分别为24.4g/L和24.5g/L;p H在发酵培养第一天降至最低,分别为5.34、5.59,之后逐渐回升,第3天时达到5.8和5.9左右;随着发酵时间的延长,培养基中的葡萄糖含量快速降低,至第3天时降至3.14g/L和4.50g/L,之后趋于稳定。(7)对高产菌株0.6-45和0.5-50所产热凝胶多糖进行结构及凝胶特性分析。来自菌株0.6-45和0.5-50的精提热凝胶多糖糖含量为91.8%和96.2%,样品的纯度较高。红外光谱分析和核磁共振分析表明突变菌株热凝胶多糖的结构组成均为β-1,3葡聚糖。GPC结果表明菌株0.6-45和菌株0.5-50产生的热凝胶多糖分子量(M)分别为1.44×10Da和1.01×10Da。凝胶特性和质构分析(TPA)分析表明,高产菌株产热凝胶多糖的凝胶强度、胶着性、咀嚼性、硬度低于日本样品,破裂强度、破裂位移、内聚性、弹性、恢复性高于日本样品,即高产菌株产热凝胶多糖凝胶比日本样品凝胶的弹性、韧性更高。

关键词：热凝胶多糖紫外诱变亚硝基胍诱变复合诱变高产菌株凝胶特性

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^(60)Coγ射线诱变选育热凝胶多糖高产菌株的研究

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核农学报 2003年第5期17卷 343-346页

作者：李卫旗何国庆浙江大学生命科学学院浙江杭州310012 浙江大学农业工程与食品科学学院浙江杭州310027

利用60 Coγ射线对产生热凝胶多糖 (Curdlan)出发菌株GM 2 4的菌体细胞与原生质体分别进行辐照处理 ,发现60 Coγ射线对GM 2 4原生质体的诱变效应明显优于对其菌体细胞的作用。对最终诱变筛选获得的 1株高产稳定的Curdlan生产突变株A81... 详细信息

利用60 Coγ射线对产生热凝胶多糖 (Curdlan)出发菌株GM 2 4的菌体细胞与原生质体分别进行辐照处理 ,发现60 Coγ射线对GM 2 4原生质体的诱变效应明显优于对其菌体细胞的作用。对最终诱变筛选获得的 1株高产稳定的Curdlan生产突变株A81研究表明 :与GM 2 4相比 ,其Curdlan产量提高了 5 0 4%,发酵周期缩短了 1 8%,发酵终止后底物残糖由 1 5 3g L降至7 4g L。糖的转化率从 38 7%提高至 5 8 2 %。这说明在Curdlan生产菌株的筛选中60

关键词：钴60γ射线热凝胶多糖诱变选育产碱杆菌食品添加剂

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热凝胶多糖产生菌株的复合诱变选育

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安徽农业科学 2017年第11期45卷 7-10页

作者：付雅欣雷高方青高红亮杨雪霞东华大学化学化工与生物工程学院上海201620 上海东圣食品科技有限公司上海200333 华东师范大学生命科学学院上海200241

[目的]提高热凝胶多糖产量和凝胶特性。[方法]采用紫外线和亚硝基胍对土壤杆菌714进行诱变;通过平板-摇瓶筛选方法,得到2株高产菌。[结果]突变菌株0.6-45和0.5-50的热凝胶多糖粗提得率分别为26.5和26.4 g/L,分别是出发菌株粗提得率(3.8 ... 详细信息

[目的]提高热凝胶多糖产量和凝胶特性。[方法]采用紫外线和亚硝基胍对土壤杆菌714进行诱变;通过平板-摇瓶筛选方法,得到2株高产菌。[结果]突变菌株0.6-45和0.5-50的热凝胶多糖粗提得率分别为26.5和26.4 g/L,分别是出发菌株粗提得率(3.8 g/L)的7.0和6.9倍,热凝胶多糖精提得率分别为19.4和18.0 g/L。凝胶特性分析表明,突变菌株热凝胶多糖凝胶的破裂强度、破裂位移、弹性、内聚性、恢复性较好,均高于市售样品,而凝胶强度、硬度、胶着性和咀嚼性低于市售样品。GPC测定菌株0.6-45和菌株0.5-50产热凝胶多糖的MW分别为1.57×10~6和1.27×10~6Da。[结论]复合诱变提高了热凝胶多糖的产量并改善了多糖的凝胶特性。

关键词：热凝胶多糖紫外诱变亚硝基胍诱变高产菌株凝胶特性

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