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激光共聚焦显微镜技术在研究肠上皮细胞内钙超载中的应用

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中华实验外科杂志 2005年第10期22卷 1275-1275页

作者：秦环龙陈前贾震易上海交通大学附属第六人民医院外科 200233

细胞内钙稳态的维持对生命活动至关重要.病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱,致细胞坏死和凋亡[1,2].目前有关肠上皮细胞(IEC)缺血缺氧损伤导致IEC细胞内钙超载是否确切,钙离子阻断剂是否有防治作用,目前尚无这方面的研究报... 详细信息

细胞内钙稳态的维持对生命活动至关重要.病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱,致细胞坏死和凋亡[1,2].目前有关肠上皮细胞(IEC)缺血缺氧损伤导致IEC细胞内钙超载是否确切,钙离子阻断剂是否有防治作用,目前尚无这方面的研究报道.激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)可定量分析活细胞内不同部位的[Ca2+]i及其动态变化,还可提供高分辨率的钙离子动态变化图像,是记录钙荧光信号的有效技术手段[3].我们采用LSCM技术,用钙敏荧光探针Fluo-3/AM标记培养的IEC,实时动态观察在缺血缺氧损伤及加用钙离子阻断剂后细胞内钙超载的影响.

关键词：激光共聚焦显微镜技术肠上皮细胞细胞内钙超载钙离子阻断剂

钛颗粒对诱骨条件下骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

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四川大学学报（医学版） 2004年第3期35卷 323-326页

作者：曹慧陈槐卿吴江李良四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程研究室成都610041

目的　探讨钛颗粒对体外培养诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法　采用四唑盐比色法测定诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞在钛颗粒负荷后的吸光度值 ,并用共聚焦激光扫描显微镜观察细胞形态变化。结果　钛颗粒负荷下 ,... 详细信息

目的　探讨钛颗粒对体外培养诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法　采用四唑盐比色法测定诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞在钛颗粒负荷后的吸光度值 ,并用共聚焦激光扫描显微镜观察细胞形态变化。结果　钛颗粒负荷下 ,诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力受到抑制 ,不同直径 ,不同浓度和不同作用时间有程度各异的抑制作用。三种钛颗粒负荷中直径为 0 .9μm钛颗粒对诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞的抑制作用最显著 ;相同直径下 ,抑制程度也受浓度和时间影响 ,1g/L的抑制作用最强 ,出现抑制作用的时间最早 ,浓度越低 ,抑制作用越弱 ;钛颗粒负荷时间越长 ,增殖能力的抑制最显著。结论　钛颗粒负荷后诱骨条件下的大鼠骨髓间充质干细胞增殖能力受到抑制 ,且其抑制作用与钛颗粒的直径、浓度、时间有关。

关键词：钛颗粒骨髓间充质干细胞激光共聚焦显微镜技术无菌性松动

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钙离子参与Nogo-A抑制轴突生长的作用

解剖学报 2005年第6期36卷 582-585页

作者：熊南翔赵洪洋张方成朱长庚朱贤立华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科武汉430022

目的探索胞内钙离子在Nogo-A抑制轴突生长中的作用,以进一步了解Nogo-A抑制轴突生长的信号转导机制。方法利用激光共聚焦显微镜技术,检测Nogo-A作用于小脑颗粒细胞后不同时段胞内钙离子的浓度,并观察加入钙通道阻滞剂———尼莫地平对No... 详细信息

目的探索胞内钙离子在Nogo-A抑制轴突生长中的作用,以进一步了解Nogo-A抑制轴突生长的信号转导机制。方法利用激光共聚焦显微镜技术,检测Nogo-A作用于小脑颗粒细胞后不同时段胞内钙离子的浓度,并观察加入钙通道阻滞剂———尼莫地平对Nogo-A抑制轴突生长的影响。结果小脑颗粒细胞内钙离子浓度升高发生于加入Nogo-A后5 min,30 min时达到最高,然后逐渐下降,2 h后恢复至正常水平;加入尼莫地平组的轴突生长与对照组相比有显著差异。结论钙离子可能参与了Nogo-A抑制轴突生长的信号转导。

关键词： Nogo-A 钙离子轴突再生信号转导激光共聚焦显微镜技术大鼠

人PFP、GrB共表达诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的研究

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免疫学杂志 2009年第2期25卷 150-153,157页

作者：李秀英夏良平赖延东暨南大学药学院基因组药物研究所中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室广州医学院化学致癌研究所

目的探讨人穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达是否可以诱导人的喉癌细胞系Hep-2的凋亡及其作用的机理。方法利用脂质体2000将PFP、GrB共表达载体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB)转染人喉癌Hep-2细胞,采用荧光染料Hoechst33342法、流式... 详细信息

目的探讨人穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达是否可以诱导人的喉癌细胞系Hep-2的凋亡及其作用的机理。方法利用脂质体2000将PFP、GrB共表达载体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB)转染人喉癌Hep-2细胞,采用荧光染料Hoechst33342法、流式细胞仪(FCM)检测、透射电镜观察Hep-2细胞的凋亡情况。以激光共聚焦显微镜检测重组载体转染后的Hep-2细胞内[Ca2+]i浓度的变化,并探讨其作用机理。结果pVAX1-PIG转染组的Hep-2细胞大量凋亡且其凋亡率显著高于对照组(P镜研究显示单个Hep-2细胞内亦出现凋亡的特征。Hep-2细胞内[Ca2+]i的浓度发生了变化,且由FI值增大可知细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高。结论PFP、GrB共表达能够诱导人Hep-2细胞的凋亡,且凋亡的发生与细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高有关。

关键词：凋亡激光共聚焦显微镜技术透射电镜流式细胞仪分析

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Plk1在急性白血病患者中的表达及其意义

中华血液学杂志 2006年第8期27卷 554-556页

作者：承璐雅黄伟周剑锋刘文励复旦大学附属中山医院血液科华中科技大学附属同济医院血液科武汉430030

Plk-1（Polo-like kinase 1）是一种高度保守的丝氨酸／苏氨酸激酶，在大多数人类肿瘤中高表达，针对Plk1 mRNA的反义寡核苷酸治疗实验证实对多种肿瘤有效旧。。目前有关Plk-1肿瘤相关性研究主要局限于实体瘤，在白血病等血液系统恶性... 详细信息

Plk-1（Polo-like kinase 1）是一种高度保守的丝氨酸／苏氨酸激酶，在大多数人类肿瘤中高表达，针对Plk1 mRNA的反义寡核苷酸治疗实验证实对多种肿瘤有效旧。。目前有关Plk-1肿瘤相关性研究主要局限于实体瘤，在白血病等血液系统恶性肿瘤中的表达水平尚不明确。我们采用细胞免疫组化结合激光共聚焦显微镜技术对30例不同类型急性白血病患者骨髓和（或）外周血标本及K562细胞系Plk-1的表达水平及细胞内分布模式进行了研究。

关键词：急性白血病患者 Plk1 激光共聚焦显微镜技术其意义血液系统恶性肿瘤 K562细胞系反义寡核苷酸细胞免疫组化苏氨酸激酶肿瘤相关性

高原红细胞增多症患者血细胞中IL-6的研究

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中华血液学杂志 2003年第4期24卷 207-208页

作者：莎珍次仁布芷张世馥西藏自治区第二人民医院 850002 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

由于藏、汉两族高原红细胞增多症（HAPC）患者血浆中的IL-6的含量较健康人大幅度增高，我们利用激光共聚焦显微镜技术(Confocal Laser Scanning Microscopy, CLSM)对HAPC患者IL-6进行了细胞原位定位和定量分析，以探讨IL-6在HAPC发病过... 详细信息

由于藏、汉两族高原红细胞增多症（HAPC）患者血浆中的IL-6的含量较健康人大幅度增高，我们利用激光共聚焦显微镜技术(Confocal Laser Scanning Microscopy, CLSM)对HAPC患者IL-6进行了细胞原位定位和定量分析，以探讨IL-6在HAPC发病过程中可能的作用机制。

关键词：高原红细胞增多症发病机制白细胞介素-6 激光共聚焦显微镜技术原位定位定量分析

牛磺酸对低氧复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

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第四军医大学学报 2003年第3期24卷 226-228页

作者：程何祥张荣庆王海昌李飞贾国良赵新国陈丹刘兵第四军医大学西京医院心血管内科陕西西安710033 第四军医大学基础部电镜中心陕西西安710033

目的 :研究低氧复氧对心肌细胞内Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)的影响 ,以及牛磺酸减轻模拟心肌缺血再灌过程中钙超载的作用 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血再灌注模型 .实验分 3组 :①正常对照组 ;②模拟缺血 ... 详细信息

目的 :研究低氧复氧对心肌细胞内Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)的影响 ,以及牛磺酸减轻模拟心肌缺血再灌过程中钙超载的作用 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血再灌注模型 .实验分 3组 :①正常对照组 ;②模拟缺血再灌注组 :细胞低氧 30min 复氧 30min ;③牛磺酸 +缺血 -再灌组 :先加入终浓度为 2 0mmol·L-1的牛磺酸 ,再行低氧 30min 复氧 30min .以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞[Ca2 + ]i 变化 .结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 + ]i 荧光强度(6 5 0± 4 1)U和荧光光密度较低 .低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 + ]i荧光强度开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 + ]i 荧光强度(2 5 37± 187)U和光密度显著增高 (P <0 .0 1vs对照组 ) .而牛磺酸组细胞内荧光强度和光密度较模拟缺血再灌组显著降低 [(895± 5 0 )Uvs (2 5 37± 187)U ,P <0 .0 1].结论 :心肌细胞低氧复氧导致钙超载 ;而牛磺酸有明显减轻心肌细胞低氧复氧时Ca2 +

关键词：心肌损伤缺血-再灌注钙牛磺酸激光共聚焦显微镜技术低氧-复氧动物实验

共聚焦显微技术分析卡维地洛对人心房肌细胞内钙离子的影响

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中国临床医学 2005年第2期12卷 335-337页

作者：张殿新程何祥张荣庆黄岚王海昌郭文怡刘兵张清李伟杰第四军医大学西京医院心内科西安710032 第三军医大学新桥医院心内科重庆400038

目的:研究卡维地洛对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人心房肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法:急性分离单个人心房肌细胞。实验分4组:正常对照组; AngⅡ组:加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ;卡维地洛组:加入终浓度为1μmol/L的卡维地洛; AngⅡ+... 详细信息

目的:研究卡维地洛对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人心房肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法:急性分离单个人心房肌细胞。实验分4组:正常对照组; AngⅡ组:加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ;卡维地洛组:加入终浓度为1μmol/L的卡维地洛; AngⅡ+卡维地洛组:卡维地洛1μmol/L与AngⅡ0.1μmol/L同时加入。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化。结果:对照组和卡维地洛组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.05)。而AngⅡ+卡维地洛组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内Ca2+超载,卡维地洛能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载。

关键词：卡维地洛细胞内钙离子显微技术血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 激光共聚焦显微镜技术 Ca^2+超载 Fluo-3/AM 心房肌细胞内 mol/L [Ca^2+]i 光密度值细胞内钙超载人心房肌细胞荧光强度正常对照组荧光指示剂拮抗作用急性分离

定向迁移细胞前沿α4整合素对Rac局部化激活的分子调控机制

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定向迁移细胞前沿α4整合素对Rac局部化激活的分子调控机制

作者：李思锐湖南师范大学

学位级别：硕士

本研究项目根据已发表的,激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控Rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出在细胞前沿,整合素正调控Rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化进而抑制其与paxillin结合... 详细信息

本研究项目根据已发表的,激活的整合素α4在细胞尾部、两侧,负调控Rac活性的信号转导通路的研究结果,结合相关信号分子的结构、功能,提出在细胞前沿,整合素正调控Rac活性的信号转导通路,即当α4胞内区域磷酸化进而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1,与PIX、PAK形成信号分子复合物。由于PAK为Rac的效应分子,PIX为Rac的转换分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使Rac1在细胞前沿持续的局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前迁移推动力的全新构想。首先我们将验证hFN对Rac蛋白的激活,然后我们将采用免疫印迹实验,初步证明这些蛋白在细胞前沿存在两两相互作用,即该处存在这样的信号分子复合物,进而通过荧光双定位验证这些分子间的相互作用可以发生在细胞前沿,最后通过FRET单分子探针,实时、定量高分辨率的监测Rac的激活时空变化图像。

关键词：激光共聚焦显微镜技术 Rac蛋白激活免疫印迹 FRET探针荧光双定位