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渥曼青霉素联合丝裂霉素对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

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渥曼青霉素联合丝裂霉素对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

作者：张健重庆医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:研究表明,PI3K/Akt信号传导通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关。本实验研究PI3K激酶抑制剂Wortmannin联合丝裂霉素对肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及相关基因Cyclin D1、Bad表达的影响,并初步探讨其机制。方法:①不同药物浓... 详细信息

背景与目的:研究表明,PI3K/Akt信号传导通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关。本实验研究PI3K激酶抑制剂Wortmannin联合丝裂霉素对肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及相关基因Cyclin D1、Bad表达的影响,并初步探讨其机制。方法:①不同药物浓度的渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合作用HepG-2细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖、生长状态。②分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞核形态学变化。③分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,流式细胞术检测肿瘤细胞增殖周期和凋亡率。④分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,逆转录聚合酶联反应及Western blot检测PI3K/Akt信号传导通路相关基因和蛋白的表达。结果:①渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌细胞增殖,并呈量效与时效关系。24 h单用渥曼青霉素、丝裂霉素的IC50分别是联合用药IC50的8.57倍及1.85倍。②渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,流式细胞术检测结果显示,细胞分别主要被阻止于G0/G1期、G2/M期、G0/G1期。细胞凋亡率由处理前的(3.23±1.32)%分别提高到(9.17±1.78)%,(9.00±2.01)%,(14.82±1.36)% (P渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h,荧光显微镜下观察, HepG-2细胞出现典型的凋亡形态学改变。联合用药后,细胞凋亡形态改变更加明显。④渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h,细胞p-Akt活化程度降低,Cyclin D1表达量减少,Bad表达量增加(P渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌HepG-2细胞生长、增殖,联合用药后,抑制作用更加明显。②渥曼青霉素与丝裂霉素均可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,联合用药后,促凋亡作用更加明显。③Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平下调是渥曼青霉素与丝裂霉素抑制HepG-2细胞生长、增殖作用机制之一;Bad mRNA及蛋白表达水平上调是渥曼青霉素与丝裂霉素诱导HepG-2细胞凋亡作用机制之一。④渥曼青霉素与丝裂霉素可能是通过PI3K/Akt信号通路抑制HepG-2细胞增殖,诱导其凋亡。

关键词：肝癌渥曼青霉素丝裂霉素凋亡 PI3K/Akt信号通路

氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

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吉林大学学报（医学版） 2013年第1期39卷 29-33页

作者：刘杉珊杨岩焦本蒸李薇吉林大学第一医院血液肿瘤中心吉林长春130021 吉林大学第一医院核医学科吉林长春130021

目的:探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株(HCT-116和SW-480)增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法:将处于对数生长期的HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对... 详细信息

目的:探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株(HCT-116和SW-480)增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法:将处于对数生长期的HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂(PFT-α)组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术(FCM)检测各组细胞12、24和48h的存活率和细胞凋亡率。结果:与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低(P渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化(P>0.05),而SW-480细胞48h的存活率显著降低(P渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡;抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡。

关键词：氟尿嘧啶渥曼青霉素 p53 细胞凋亡结肠肿瘤

右美托咪定对渥曼青霉素引起的海马CA1区神经元凋亡的影响

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广东医学 2012年第7期33卷 912-914页

作者：张小宁徐州医学院护理学院江苏徐州221004

目的探讨右美托咪定(Dex)对渥曼青霉素(Wort)引起的海马CA1区神经元凋亡的影响。方法以SD大鼠胎鼠海马CA1区神经元为研究对象,(1)Wort对海马CA1区神经元的致凋亡作用:将SD大鼠海马CA1区神经元随机分为4组,对照组及Wort不同剂量组(Wort ... 详细信息

目的探讨右美托咪定(Dex)对渥曼青霉素(Wort)引起的海马CA1区神经元凋亡的影响。方法以SD大鼠胎鼠海马CA1区神经元为研究对象,(1)Wort对海马CA1区神经元的致凋亡作用:将SD大鼠海马CA1区神经元随机分为4组,对照组及Wort不同剂量组(Wort 0.3、1.0、3.0组),对照组不作处理,Wort 0.3、1.0、3.0组分别接受0.3、1.0、3.0μmol/L Wort处理24 h;(2)Dex的抗凋亡作用:将SD大鼠海马CA1区神经元随机分为5组,对照区(不作处理)、Wort组(3μmol/L Wort处理24 h)、Wort+Dex 0.1组(3μmol/L Wort+0.1μmol/L Dex处理24 h),Wort+Dex 1.0组(3μmol/L Wort+1.0μmol/L Dex处理24 h)和Wort+Dex 10.0组(3μmol/L Wort+10.0μmol/L右美托米啶处理24 h)。采用DAPI荧光染色法法计数细胞凋亡数,计算凋亡率。结果 3个剂量的Wort均可引起海马CA1区神经元凋亡,以Wort 3.0组最为明显;Wort+Dex 0.1、1.0、10.0组与Wort组比较细胞凋亡率明显下降(P<0.05,P<0.01),但仍明显高于对照组(P<0.01)。结论 Dex能有效抑制Wort引起的海马CA1区神经元凋亡,具有神经保护作用。

关键词：右美托咪定渥曼青霉素凋亡海马

渥曼青霉素通过调节AKT/NF-κB通路抑制人黑色素瘤细胞的迁移和侵袭

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四川医学 2022年第12期43卷 1185-1191页

作者：杜旭袁源简华宏李晓凤李建军重庆市黔江中心医院皮肤性病科重庆409099

目的探讨渥曼青霉素对人黑色素瘤C8161细胞迁移和侵袭的影响及对PI3K/AKT/NF-κB通路的调节作用。方法将体外培养C8161细胞分别用不同浓度(2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μmol/L)的渥曼青霉素或阳性药物(200μmol/L的5-氟尿嘧啶)处理,对... 详细信息

目的探讨渥曼青霉素对人黑色素瘤C8161细胞迁移和侵袭的影响及对PI3K/AKT/NF-κB通路的调节作用。方法将体外培养C8161细胞分别用不同浓度(2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μmol/L)的渥曼青霉素或阳性药物(200μmol/L的5-氟尿嘧啶)处理,对照组细胞不做处理。然后使用倒置显微镜观察C8161细胞形态,活细胞计数(CCK-8)法测定细胞活力,EdU法测定细胞增殖率,划痕法测定细胞迁移情况,Transwell小室检测细胞侵袭情况,RT-qPCR测定EMT相关因子[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)]mRNA表达,蛋白免疫印迹法(WB)测定PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白(AKT、p-AKT、NF-κB p65和p-NF-κB p65)和EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)表达情况。结果与对照组比较,不同浓度渥曼青霉素和阳性药物处理抑制细胞的生长、增殖率、迁移率、侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin、p-AKT/AKT和p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平,增加了E-cadherin mRNA和蛋白表达水平,且渥曼青霉素处理组呈浓度依赖性;低浓度实验组对细胞的活力没有显著影响(P>0.05),阳性药物显著降低了细胞的活力(P渥曼青霉素可显著抑制C8161细胞的迁移、侵袭和EMT,该抑瘤作用可能是通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路的活化实现的。

关键词：渥曼青霉素黑色素瘤迁移侵袭 PI3K/AKT/NF-κB

渥曼青霉素抑制脉络膜黑色素瘤细胞生物学行为的分子机制研究

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遵义医科大学学报 2020年第1期43卷 32-37页

作者：宋慧王英豪李霞恩施土家族苗族自治州中心医院眼科中心湖北恩施445000

目的观察渥曼青霉素对脉络膜黑色素瘤MuM-2C细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及凋亡的影响,及其作用分子机制。方法CCK-8方法检测了MuM-2C细胞活力,Caspase-glot-3/-9活性测定试剂盒检测了Caspase-3/9活性,Western blot实验分析了Cleaved cas... 详细信息

目的观察渥曼青霉素对脉络膜黑色素瘤MuM-2C细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及凋亡的影响,及其作用分子机制。方法CCK-8方法检测了MuM-2C细胞活力,Caspase-glot-3/-9活性测定试剂盒检测了Caspase-3/9活性,Western blot实验分析了Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、p-P85(Y458)、p-AKT(S473和T308)和p-S6K(T389)蛋白表达水平,ELISA法检测了单链DNA(ss DNA)的水平,流式细胞术检测了MuM-2C细胞凋亡率。结果渥曼青霉素处理MuM-2C细胞48 h后,呈浓度和时间依赖性的抑制细胞增殖、诱导Caspase-3/9活性的增强、增高了细胞凋亡标志物ss DNA水平、还促使了促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Cleaved PARP的表达;4μM的渥曼青霉素处理细胞48 h后,能明显诱导MuM-2C细胞的早期和晚期凋亡,还显著抑制了P85(Y458)、AKT(S473和T308)和S6K(T389)的磷酸化水平;渥曼青霉素相比于同浓度的PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制剂(LY3023414、纳巴霉素、OSI-027和MK-2206)抗A431细胞增殖的活性更强。结论渥曼青霉素通过阻滞PI3K-AKT-mTOR信号传导抑制脉络膜黑色素瘤MuM-2C细胞的生物学行为。

关键词：渥曼青霉素脉络膜黑色素瘤生物学行为

渥曼青霉素通过Chemerin/CMKLR1途径抑制Kupffer细胞NLRP3的活性缓解小鼠非酒精性脂肪肝

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重庆医学 2018年第17期47卷 2279-2284页

作者：吴明兵张文锋龚建平苗春木重庆两江新区第二人民医院普外科 401123 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科 400010

目的探讨Chemerin诱导枯否细胞(Kupffer cells,KCs)的炎性反应在小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)进展中的作用和机制。方法分别用磷脂酰肌醇3-激酶的抑制剂渥曼青霉素作用于预先用Chemerin体外刺激的KCs 2h,以及由高脂饮食饲养的C57BL/6J小... 详细信息

目的探讨Chemerin诱导枯否细胞(Kupffer cells,KCs)的炎性反应在小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)进展中的作用和机制。方法分别用磷脂酰肌醇3-激酶的抑制剂渥曼青霉素作用于预先用Chemerin体外刺激的KCs 2h,以及由高脂饮食饲养的C57BL/6J小鼠12周。然后,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液及血清细胞因子水平;反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测体内外KCs中目的分子的mRNA和蛋白表达水平;记录小鼠体质量变化并检测小鼠胰岛素耐受和葡糖糖耐受情况;HE染色结合NAS评分评测小鼠肝脏脂肪变性程度。结果在渥曼青霉素处理的Chemerin-KCs或者NAFLD模型小鼠中:细胞上清液和血清中白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和IL-18的水平明显低于单独用Chemerin处理组或者单独高脂饮食组;Chemerin细胞受体(CMKLR1)和炎症小体3样受体蛋白(NLRP3)的mRNA和蛋白表达明显低于单独用Chemerin处理KCs或者单独高脂饮食的小鼠。此外,在高脂饮食单独饲养的小鼠的体质量变化、肝功能变化、胰岛素抵抗情况、葡糖糖抵抗情况及肝脏脂肪指数变化均比渥曼青霉素处理的NAFLD模型小鼠变化明显。结论渥曼青霉素能通过下调CMKLR1和NLRP3的表达减轻由高脂饮食诱导的肝脏脂肪变和KCs介导的炎性反应。

关键词：非酒精性脂肪肝枯否细胞渥曼青霉素炎症小体 Chemerin

渥曼青霉素对胃癌细胞PARP蛋白表达的影响

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胃肠病学和肝病学杂志 2007年第2期16卷 130-131页

作者：胡晓雯艾耀伟李欢杨艳曹俊于红刚武汉大学人民医院消化内科湖北武汉430060

目的研究磷脂酰激酶3通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的影响。方法应用DNA琼脂糖凝胶电泳检测胃癌细胞BGC-823凋亡,以蛋白印迹法检测PARP蛋白及活化片断表达情况。结果足叶乙甙(etoposide)及... 详细信息

目的研究磷脂酰激酶3通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的影响。方法应用DNA琼脂糖凝胶电泳检测胃癌细胞BGC-823凋亡,以蛋白印迹法检测PARP蛋白及活化片断表达情况。结果足叶乙甙(etoposide)及阿霉素(doxorubicin)能诱导胃癌细胞凋亡及BGC-823 PARP裂解的发生,wortmannin可以增强其作用。结论磷脂酰激酶3通路抑制剂渥曼青霉素可以增强胃癌细胞凋亡的发生。

关键词：渥曼青霉素足叶乙甙阿霉素聚腺苷二磷酸核糖聚合酶胃癌

渥曼青霉素对脑外伤大鼠自噬及脑保护作用的机制研究

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山西医科大学学报 2011年第10期42卷 797-801页

作者：陈晔俞向梅林凌潘晓东林栋福建中医药大学中西医结合学院解剖学教研室福州350108 福建省医学科学研究院福建医科大学附属协和医院神经内科

目的探讨渥曼青霉素(wortmannin)在大鼠脑外伤(TBI)引起的损害中发挥的作用及其可能机制。方法①成年雄性Wistar大鼠120只,随机分为3组:假手术组(sham组)、wortmannin组、DMSO组。采用改良自由落体法建立大鼠脑外伤模型,sham组暴露硬脑... 详细信息

目的探讨渥曼青霉素(wortmannin)在大鼠脑外伤(TBI)引起的损害中发挥的作用及其可能机制。方法①成年雄性Wistar大鼠120只,随机分为3组:假手术组(sham组)、wortmannin组、DMSO组。采用改良自由落体法建立大鼠脑外伤模型,sham组暴露硬脑膜而不撞击,wortmannin组手术前10 min侧脑室注射渥曼青霉素,而DMSO组为手术前10 min注射等量DMSO。②采用免疫印迹法检测自噬相关蛋白(ATG5,LC3)的表达情况,PI阳性细胞计数法(腹腔注射碘化丙锭PI)观察脑外伤细胞死亡情况。③水迷宫行为学观察大鼠海马学习记忆功能变化。结果①与sham组相比,脑外伤后24 h和48 hDMSO组ATG5、LC3蛋白表达均明显提高,而渥曼青霉素组脑外伤引起的ATG5与LC3上调则被明显抑制。②与sham组相比,脑外伤后24 h和48 h DMSO组的PI阳性细胞数均明显增加(P渥曼青霉素处理的大鼠每天学习的程度更接近假手术大鼠,而DMSO处理的大鼠每天的学习程度较其明显下降(P渥曼青霉素能明显抑制脑外伤引起的ATG5与LC3的激活,明显减少脑外伤后PI阳性细胞数,并改善大鼠学习记忆能力,表明渥曼青霉素能减轻脑外伤引起的细胞死亡与神经功能障碍,可能为脑外伤的治疗提供靶点。

关键词：脑外伤渥曼青霉素微管相关蛋白1轻链3 水迷宫

渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响

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浙江医学 2020年第5期42卷 418-421,429页

作者：高倩章文俊杨国军潘晔陈乃君朱巍金华伟绍兴文理学院附属医院内分泌科 312000

目的探讨渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响及其作用机制。方法高糖培养小鼠胰岛β细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化叉头转录因子1(p-FoxO1)表达水平,确定高糖诱导细胞FoxO1磷酸化最佳时间。小鼠胰岛β细胞根据... 详细信息

目的探讨渥曼青霉素对高糖培养小鼠胰岛β细胞去分化的影响及其作用机制。方法高糖培养小鼠胰岛β细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化叉头转录因子1(p-FoxO1)表达水平,确定高糖诱导细胞FoxO1磷酸化最佳时间。小鼠胰岛β细胞根据培养条件分为4组:(1)常规糖浓度组:用含25mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;(2)高张浓度组:用含25mmol/L葡萄糖浓度和35mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养;(3)高糖浓度组:用含60mmol/L葡萄糖浓度的DMEM培养液培养;(4)高糖浓度+渥曼青霉素干预组:用含60mmol/L葡萄糖浓度和50nmol/L渥曼青霉素的DMEM培养液培养。培养12h后采用蛋白质印迹法检测各组小鼠胰岛β细胞p-FoxO1、FoxO1蛋白表达水平;培养72h后采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠胰岛β细胞神经元素3(ngn3)、胰岛十二指肠同源盒-1(PDX1)蛋白和mRNA表达水平。结果在一定时间范围内,高糖能刺激FoxO1蛋白磷酸化;高糖培养小鼠胰岛β细胞后细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均增加,PDX1蛋白和mRNA表达水平均减少。渥曼青霉素同步干预后,FoxO1磷酸化减少,细胞ngn3蛋白和mRNA表达水平均减少,PDX1蛋白和mRNA表达水平均增加。结论渥曼青霉素能抑制高糖诱导的小鼠胰岛β细胞去分化,渥曼青霉素可能通过抑制FoxO1的磷酸化而产生该抑制作用的。

关键词：糖尿病渥曼青霉素胰岛β细胞