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氢水对脓毒血症大鼠急性肾损伤的保护作用

中华急诊医学杂志 2013年第5期22卷 472-475页

作者：李国民田蜜纪木火曾秋婷袁冬斯妍娜孙学军鲍红光杨建军江苏大学附属金坛医院ICU 江苏省金坛213200 南京军区南京总医院麻醉科南京医科大学附属南京第一医院麻醉科第二军医大学潜水医学科

目的研究氢水（HRS）对脓毒血症大鼠急性‘肾损伤（AKI）的影响。方法24只雄性SD大鼠随机（随机数字法）均分为3组（n=8），Sham组、盲肠结扎穿孔（CLP）组及CLP＋HRS组。Sham组采用假手术，CLP组及CLP＋HRS组采用CLP脓毒症模型。假手术... 详细信息

目的研究氢水（HRS）对脓毒血症大鼠急性‘肾损伤（AKI）的影响。方法24只雄性SD大鼠随机（随机数字法）均分为3组（n=8），Sham组、盲肠结扎穿孔（CLP）组及CLP＋HRS组。Sham组采用假手术，CLP组及CLP＋HRS组采用CLP脓毒症模型。假手术或CLP后0、6、18h，CLP＋HRS组于腹腔注射HRS5ml／kg，Sham组和CLP组则分别注射生理盐水5ml／kg。假手术或CLP后24h，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）及高迁移率族蛋白1（HMGBl）水平；利用酶法检测血浆尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）水平；利用黄嘌呤氧化酶法检测肾组织丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性；利用苏木精一伊红染色法（HE）评估肾组织损伤程度，原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡程度。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Student-Newman-Keulsa（SNK）法。结果与Sham组相比，CLP组及CLP＋HRS组血浆TNF-d、IL-6、IL-10、HMGBl、BUN、Cr及。肾组织MDA升高，肾组织损伤程度加重，细胞凋亡增多，而肾组织SOD降低，差异具有统计学意义（P〈0．05）。与CLP组相比，CLP＋HRS组血浆HMGBl、BUN、Cr、肾组织MDA降低，肾组织损伤程度减轻，细胞凋亡减少，而SOD升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论HRS抑制脓毒血症大鼠的炎性反应和氧化应激，从而改善AKI时的。肾功能。

关键词：氢水脓毒症炎症反应氧化应激急性肾损伤

氢水对脑缺血再灌注大鼠脑组织一氧化氮及其合酶的影响

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解剖学杂志 2014年第2期37卷 196-198,251页

作者：张连双路青忠王秀秀撒焕兰刘同慎冯国营赵伟王希锋滨州医学院组织学与胚胎学教研室烟台264000 滨州医学院临床医学系烟台264000 滨州医学院烟台市毓璜顶医院ICU烟台264000

目的：探讨氢水治疗对急性脑缺血/再灌注损伤引起的脑组织一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶活力改变的影响.方法：成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氢水治疗组.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型,免疫组织化学... 详细信息

目的：探讨氢水治疗对急性脑缺血/再灌注损伤引起的脑组织一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶活力改变的影响.方法：成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氢水治疗组.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型,免疫组织化学测定大脑皮层一氧化氮合酶的表达,硝酸还原酶法测定缺血侧脑组织匀浆中NO含量,分光光度计法测定脑组织提取液中一氧化氮合酶的活性.结果：术后6h时,模型组脑组织一氧化氮合酶阳性细胞灰度值、NO浓度及一氧化氮合酶活性均较假手术组显著升高,而氢水治疗后其水平较模型组显著下降,但仍高于假手术组.治疗24 h时,模型组一氧化氮合酶阳性细胞灰度值、NO浓度及一氧化氮合酶活性仍显著高于假手术组,但治疗组与模型组相比差异无统计学意义.结论：氢水治疗可通过早期减少缺血后脑组织中NO含量及降低一氧化氮合酶的活性来减轻脑缺血/再灌注损伤.

关键词：氢水脑缺血再灌注一氧化氮一氧化氮合酶大鼠

氢水对反复力竭运动大鼠海马组织氧化应激损伤及细胞自噬的影响

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北京体育大学学报 2014年第7期37卷 69-74页

作者：陈婷张燕田振军陕西师范大学运动生物学研究所陕西西安710062 西藏民族学院体育学院陕西咸阳712082 西安交通大学心血管研究中心陕西西安710062

目的:探讨补充氢水对反复力竭运动大鼠海马氧化应激损伤及细胞自噬的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,随机分为安静组(C),力竭运动组(EX),力竭运动+维生素E组(EX+E),力竭运动+氢水组(EX+H),每组12只。C组常规安静饲养。EX组、EX+E组和EX+... 详细信息

目的:探讨补充氢水对反复力竭运动大鼠海马氧化应激损伤及细胞自噬的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,随机分为安静组(C),力竭运动组(EX),力竭运动+维生素E组(EX+E),力竭运动+氢水组(EX+H),每组12只。C组常规安静饲养。EX组、EX+E组和EX+H组均进行4周反复力竭运动,4周运动强度为(15 m/min×5 min→20 m/min×5 min→25 m/min×5 min→30 m/min×5 min→35 m/min,直至力竭,5 d/周),记录大鼠运动至力竭时间。EX组每次运动前30 min纯水灌胃4 mL,EX+E组维生素E溶液灌胃4 mL(20 mg),EX+H组氢水灌胃4 mL。训练结束后24 h取材。透射电子显微镜观察海马超微结构变化。海马组织抗氧化指标测定:硫代巴比妥(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,比色法测定总抗氧化能力(T-AOC)水平,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测海马组织自噬相关蛋白,包括雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)表达。结果:EX+H组大鼠力竭时间较EX组显著延长(P水肿严重,核内出现亮区,内质网、线粒体严重肿胀。EX+E组和EX+H组神经元结构水肿及内质网和线粒体肿胀程度明显减轻;EX组海马组织MDA、T-AOC水平及SOD活性均显著高于C组(P水平及SOD活性均显著升高(P水平较EX+E组显著升高(P氢水可有效抑制反复力竭运动造成的海马组织超微结构、氧化应激损伤及细胞自噬现象,且补充氢水较传统抗氧化剂维生素E效果更显著。

关键词：氢水海马自噬现象氧化应激力竭运动

氢水干预对反复力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤及细胞自噬的影响

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陕西师范大学学报（自然科学版） 2018年第6期46卷 116-121页

作者：徐祖杰谷红娣田振军陕西师范大学体育学院陕西西安710119

为探讨氢水干预对反复力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤及细胞自噬的影响,将3月龄雄性SD大鼠30只,体重180~210g,随机分为安静组(C),力竭对照组(EX),力竭氢水组(EH),每组10只。EX和EH组均进行4周反复力竭运动,运动初始速度为15m/min,每5mi... 详细信息

为探讨氢水干预对反复力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤及细胞自噬的影响,将3月龄雄性SD大鼠30只,体重180~210g,随机分为安静组(C),力竭对照组(EX),力竭氢水组(EH),每组10只。EX和EH组均进行4周反复力竭运动,运动初始速度为15m/min,每5min递增5m/min,至35m/min,运动直至力竭,5d/周,共4周。EH组大鼠于运动前30min给予氢水干预,记录大鼠力竭运动时间。透射电子显微镜观察骨骼肌超微结构变化。检测血清SDH和CK活性,骨骼肌SOD活性、MDA含量和T-AOC水平。Western blotting方法检测骨骼肌mTOR、pmTOR、LC3B-2和P53等自噬相关蛋白表达。结果表明:与EX组比较,氢水干预后,EH组骨骼肌组织超微结构损伤和线粒体肿胀程度均明显减轻,力竭运动时间显著延长(P氢水干预可显著改善反复力竭运动导致的大鼠骨骼肌超微结构损伤、氧化应激损伤及细胞过度自噬现象,提高骨骼肌抗氧化能力和运动耐力。

关键词：氢水力竭运动骨骼肌氧化应激自噬

氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞的影响

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氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞的影响

作者：陈欣欣中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是一种自身免疫性疾病,发病机理尚未完全明了,目前临床和基础研究均发现氧化应激在TAO的发病过程中起到一定的作用,试验性的抗氧化剂治疗对于轻度、中度TAO也取得了比较... 详细信息

研究目的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是一种自身免疫性疾病,发病机理尚未完全明了,目前临床和基础研究均发现氧化应激在TAO的发病过程中起到一定的作用,试验性的抗氧化剂治疗对于轻度、中度TAO也取得了比较理想的治疗效果。抗氧化剂氢水因其几乎无毒副作用,近年来被大量地研究,众多的医学和生物学方面的研究成果表明,氢水可以通过抗氧化、抗凋亡、抗炎作用,有效治疗因氧化应激导致的各器官损伤。本研究采用原代培养的眼眶脂肪结缔组织来源的眼眶成纤维细胞,研究氢水对于体外培养正常人和TAO患者眼眶成纤维细胞的影响,同时与地塞米松作对照研究,检测在过氧化氢(HO)氧化损伤眼眶成纤维细胞后,各种氧化应激指标:活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量的变化,并且检测眼眶成纤维细胞凋亡情况,增殖能力以及细胞内透明质酸(HA)的含量。研究方法1、取TAO患者及正常人的眼眶脂肪结缔组织,进行原代培养,获得稳定传代的眼眶成纤维细胞,并用形态学和免疫组化的方法鉴定。2、选取不同浓度的HO作用于正常人及TAO患者眼眶成纤维细胞,CCK-8法检测细胞18h后的增殖能力,为后续实验选取合适的过氧化氢浓度。3、将正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞分为几下几组:空白组、氧化损伤模型组、氢水+模型组、地塞米松+模型组。CCK-8法分别检测各组眼眶成纤维细胞0、24h、48h、72h的增殖能力。4、流式细胞仪检测上述各组眼眶成纤维细胞72h后的早期凋亡率、晚期凋亡率和坏死率。5、分光光度计法检测上述各组眼眶成纤维细胞72h后MDA、GSH-PX的含量。6、酶标仪法检测上述各组眼眶成纤维细胞72h后SOD的含量。7、流式细胞仪检测上述各组眼眶成纤维细胞72h后ROS的含量。8、将TAO患者的眼眶成纤维细胞分成三组:空白组、氢水组、地塞米松组,ELISA法检测各组细胞72h后HA的含量。结果1、本实验成功培养出眼眶脂肪结缔来源的成纤维细胞,经过形态学和免疫组化法鉴定其确为眼眶成纤维细胞,能够稳定传代,成功为后续实验建立细胞体系。2、不同浓度的HO作用于眼眶成纤维细胞18h后,根据其对细胞增殖能力的影响,最终选取100μmol/L的HO作为后续实验药物。3、氢水+模型组及地塞米松+模型组在24h、48h、72h所测的细胞增殖能力均显著高于氧化损伤模型组。4、与氧化损伤组相比,氢水及地塞米松在作用72h后均可以显著降低细胞晚期凋亡率和坏死率。5、氢水及地塞米松在作用72h后均可以显著降低氧化损伤后细胞的MDA含量,升高细胞GSH-PX含量。6、氢水及地塞米松在作用72h后均可以显著升高氧化损伤后细胞的SOD含量。7、氢水及地塞米松在作用72h后均可以显著降低氧化损伤后细胞的ROS含量。8、TAO患者眼眶成纤维细胞内HA含量显著高于正常人,氢水及地塞米松作用72h后均降低了TAO患者眼眶成纤维细胞的HA含量。结论TAO患者眼眶成纤维细胞的增殖能力高于正常人,氢水及地塞米松均升高了HO氧化损伤后眼眶成纤维细胞的增殖能力;TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞的凋亡率和坏死率并无明显差异,但加入氢水和地塞米松作用于氧化损伤后的眼眶成纤维细胞后,TAO患者细胞的晚期凋亡率和坏死率明显高于正常人;氢水及地塞米松均可以通过降低氧化损伤后细胞MDA和ROS含量,提高SOD和GSH-PX的含量,抑制氧化应激反应;最后氢水及地塞米松均可以减少TAO患者OFs内HA的含量。

关键词：氢水甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞氧化应激

氢水对新生大鼠脑缺血损伤的神经保护作用研究

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氢水对新生大鼠脑缺血损伤的神经保护作用研究

作者：蔡建美青岛大学

学位级别：硕士

目的:探讨氢生理盐水对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的神经保护作用。方法:参照Rice-Vannucci模型,建立新生大鼠脑缺血缺氧模型(HIBD),采用氯化2,3,5-三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)、HE染色和Nissl组织化学染色方法... 详细信息

目的:探讨氢生理盐水对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的神经保护作用。方法:参照Rice-Vannucci模型,建立新生大鼠脑缺血缺氧模型(HIBD),采用氯化2,3,5-三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)、HE染色和Nissl组织化学染色方法,观察大鼠皮层和海马CA1区细胞凋亡数;采用Caspase-3/CPP32生物化学法观察皮层和海马半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(caspase-3)活性变化;通过体重及水迷宫等实验观察HS对新生大鼠脑细胞是否具有长期保护效应结果:与缺血对照组比较,腹腔注释氢生理盐水可显著减少新生大鼠皮层和海马梗死面积(P＜0.05),增加皮层和海马神经细胞的存活率(P＜0.05),降低Caspase-3酶的活性(P＜0.05);且后期可明显增加大鼠的学习记忆能力(P＜0.05)。结论:氢水可减少新生大鼠脑缺血缺氧损伤,并提高大鼠的学习记忆能力,该作用可能与减弱脑细胞氧化应激效应有关。

关键词：氢水凋亡缺血缺氧 caspase-3

氢水对大强度和力竭运动大鼠海马组织氧化应激损伤的保护作用及其机制探讨

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氢水对大强度和力竭运动大鼠海马组织氧化应激损伤的保护作用及其...

作者：张燕陕西师范大学

学位级别：硕士

目的：探讨补充氢水对大强度和力竭运动大鼠海马氧化应激损伤的保护作用及其可能机制,为开发新型抗氧化补剂提供实验依据。研究方法：选取8周龄SD雄性大鼠56只,体重180-220g。随机分为力竭运动+氢水组（A组）、力竭运动+VE组（B组... 详细信息

目的：探讨补充氢水对大强度和力竭运动大鼠海马氧化应激损伤的保护作用及其可能机制,为开发新型抗氧化补剂提供实验依据。研究方法：选取8周龄SD雄性大鼠56只,体重180-220g。随机分为力竭运动+氢水组（A组）、力竭运动+VE组（B组）、力竭运动组（C组）、大强度运动+氢水组（D组）、大强度运动+VE（E组）、大强度运动组（F组）及安静组（J组）,每组8只。其中J组大鼠不做运动,安静饲养,不进行灌胃,自由饮食。A组、B组、C组、D组、E组和F组大鼠先进行1wk的适应性运动,起始速度为10m/min,运动10min后,递增至15m/min,共运动20min。之后,A组、B组和C组大鼠进行力竭运动,方案为：前3wk:15m/min×5min→20m/min×5min→25m/min×50min,第4wk:15m/min×5min→20m/min×5min→25m/min×50min→30m/min×5min→35m/min直至力竭。记录大鼠力竭运动时间。D组、E组和F组大鼠进行4周大强度运动,运动方案为：15m/min×5min→20m/min×5min→25m/min×50min;A组和D组大鼠每次运动前30min灌胃氢水,剂量为4m1,B组和E组大鼠每次运动前30min灌胃VE溶液,剂量4ml（20mg）,C组和F组大鼠每次运动前30min灌胃纯水4m1。J组大鼠自由饮水。4wk运动结束后,各组大鼠均在术次运动结束24h后,进行灌注固定取材,取大鼠海马组织,电镜制样,观察大鼠海马超微组织结构变化情况;另取大鼠血液和海马组织,测定血浆Hb、血清SDH和CK和海马组织抗氧化相关指标***和T-AOC,Western-Blot检测海马组织自噬相关蛋白mTOR、pmTOR和LC3B的表达。结果： 1大强度运动大鼠海马神经元结构发生水肿,内质网和线粒体峭肿胀、结构不清晰;大强度运动补充VE组大鼠海马区神经元结构水肿减轻,内质网和线粒体肿胀程度减轻;与大强度运动组和补充VE组比较,大强度运动补充氢水组大鼠海马神经元结构水肿、内质网和线粒体肿胀程度明显减轻,超微结构趋于正常。 2力竭运动大鼠海马神经元结构水肿严重,细胞通透性改变,核内出现亮区,内质网严重肿胀扩张,线粒体嵴不清晰,细胞器减少;与力竭运动大鼠比较,力竭运动补充VE组,大鼠海马神经元的线粒体峭紊乱程度减轻;力竭运动补充氢水组大鼠海马神经元结构水肿、内质网和线粒体肿胀程度明显减轻,超微结构未恢复到正常水平。 3大强度运动可使大鼠血浆Hb、血清SDH和CK显著升高（p＜0.01）。与大强度运动组比较,大强度运动补充VE组大鼠血浆Hb、血清SDH和CK降低,但无显著性变化;与大强度运动组比较,大强度运动补充氢水组大鼠血浆Hb、血清SDH和CK显著降低（p＜0.05）;与大强度运动补充VE组比较,大强度运动补充氢水组血浆Hb、血清SDH有所降低,但无显著性变化,血清CK显著降低（p＜0.01）。 4力竭运动可使大鼠血浆Hb、血清SDH和CK显著升高p＜0.01)。与力竭运动大鼠比较,力竭运动补充VE组大鼠血浆Hb、血清SDH和CK降低,但无显著性差异;与力竭运动大鼠比较,力竭运动补充氢水组大鼠血浆Hb、血清SDH和CK显著降低p＜0.05);与力竭运动补充VE组比较,力竭运动补充氢水组大鼠血清CK和SDH有所降低,但无显著性变化,血浆Hb显著降低（p＜0.01）。 5补充氢水组大鼠力竭时间与力竭对照组比较显著延长（p＜0.05）,与VE补充组比较其力竭时间延长,但无显著性差异。 6大强度运动可使大鼠海马SOD、MDA和T-AOC显著高于安静对照组（p＜0.05）;与大强度运动比较,大强度运动补充VE组大鼠海马SOD和T-AOC有升高趋势,MDA有降低趋势,但无显著性差异;与大强度运动组比较,大强度运动补充氢水组大鼠海马组织SOD和T-AOC显著升高（p＜0.01,p＜0.05）,MDA显著降低（p＜0.05）;与大强度运动补充VE组比较,大强度运动补充氢水组大鼠SOD,显著升高（P＜0.05）,T-AOC有升高趋势,MDA有降低趋势,但无显著性差异。 7力竭运动大鼠海马SOD、MDA和T-AOC显著高于安静对照组（p＜0.05,p＜0.01）;与力竭运动大鼠比较,力竭运动补充VE组大鼠海马组织SOD和T-AOC有升高趋势,MDA有降低趋势,但均无显著性差异;与力竭运动大鼠比较,力竭运动补充氢水组大鼠海马组织SOD和T-AOC显著升高（p＜0.05,p＜0.01）,MDA显著降低（p＜0.05）;与补充VE组比较,力竭运动补充氢水组大鼠T-AOC显著升高p＜0.05),SOD有升高趋势,MDA有降低趋势,但均无显著性差异。

关键词：海马大强度运动力竭运动氧化应激氢水

注射氢水对一次性力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响

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中国运动医学杂志 2011年第5期30卷 452-455页

作者：李爱春张林周君来孙学军浙江体育职业技术学院杭州310012 苏州大学体育学院浙江工业大学第二军医大学

目的:观察注射氢水对一次性力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响。方法:30只健康雄性SD大鼠,按体重配对后随机分成安静对照组(C组)、运动对照组(E组)与运动给氢组(H组)3组,每组10只。C组不运动。H组于运动前按10 ***-1体重剂量腹腔注... 详细信息

目的:观察注射氢水对一次性力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响。方法:30只健康雄性SD大鼠,按体重配对后随机分成安静对照组(C组)、运动对照组(E组)与运动给氢组(H组)3组,每组10只。C组不运动。H组于运动前按10 ***-1体重剂量腹腔注射氢水,E组注射同体积生理盐水,然后以0坡度、28 ***-1速度进行一次性力竭跑台运动,力竭运动后3 h取后肢腓肠肌,用Elisa法测定其3-硝基酪氨酸(3-NT)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度,用化学比色法测定MDA、SOD、GSH与TAOC。结果:与C组比较,E组3-NT、MDA与8-OHdG均显著升高(P氢水能降低骨骼肌自由基代谢水平,提高骨骼肌抗氧化酶活性,增强骨骼肌的总抗氧化能力,对骨骼肌运动性氧化应激损伤具有保护作用。

关键词：氢水力竭运动骨骼肌氧化应激

氢水对大强度及力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的保护作用及其机制探讨

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氢水对大强度及力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的保护作用及其机...

作者：谷红娣陕西师范大学

学位级别：硕士

目的：本文旨在探讨氢水对大强度及力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响,为氢水作为新型抗氧化补剂的研发提供实验依据。方法：选3月龄雄性健康SD大鼠40只,体重180-220g,适养一周。随机分为力竭氢水组、力竭对照组、大强度氢水组... 详细信息

目的：本文旨在探讨氢水对大强度及力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响,为氢水作为新型抗氧化补剂的研发提供实验依据。方法：选3月龄雄性健康SD大鼠40只,体重180-220g,适养一周。随机分为力竭氢水组、力竭对照组、大强度氢水组、大强度对照组和安静对照组,每组8只。各组均采用国家啮齿类动物标准干燥饲料喂养,自由饮食。各组大鼠在正式运动前进行3d适应性运动,起始速度为5m/min,运动3min后逐渐递增至10m/min,运动10min,最后增至15m/min,运动7min,共运动20min,使大鼠学会在跑台上跑步。3d后,力竭氢水组和力竭对照组大鼠进行大强度运动3wk,速度为15m/min,5min;20m/min,5min;25m/min,50min;第4wk进行力竭运动,速度为15m/min,5min;20m/min,5min;25m/min,5min;30m/min,5min;35m/min,至力竭;大强度氢水组和大强度对照组大鼠进行大强度运动4wk,速度与力竭氢水组和力竭对照组大强度运动的速度相同。运动5d/wk,连续运动4wk;安静组安静饲养。力竭氢水组和大强度氢水组大鼠于运动前30min按4m1/只给予氢水灌胃;力竭对照组和大强度对照组大鼠给予等剂量的自来水灌胃。各组大鼠均在末次运动结束24h后取材。各组大鼠随机挑选两只腹腔灌注固定,取股四头肌组织进行组织学制片,电镜下观察大鼠骨骼肌超微结构变化;其余各组大鼠抽血后迅速取出骨骼肌组织,放入液氮保存,制备血清、血浆-80℃冰箱保存。测定血浆Hb含量、血清SDH和CK活性以及骨骼肌***和总抗氧化能力等生化指标,并采用Western-Blot方法检测骨骼肌自噬相关蛋白的表达。结果： 1大强度运动和力竭运动可导致骨骼肌超微结构发生运动性损伤。大强度运动可导致线粒体空泡样变,线粒体数量减少,肌浆网扩张明显。而力竭运动则导致线粒体空泡样变进一步增多,损伤加重,肌浆网扩张,线粒体结构破坏,膜结构发生损伤,肌节有断裂现象;2大强度运动大鼠补充氢水后,骨骼肌细胞水肿及肌丝断裂有所减轻,线粒体损伤减轻,细胞膜结构完整性较好。而力竭运动大鼠补充氢水后,有线粒体结构破坏出现,但与力竭对照组相比有所减轻,肌丝结构较完整,细胞膜完整性较好;提示,氢水可有效减轻大强度和力竭运动对骨骼肌造成的损伤,保护线粒体的功能,降低线粒体空泡样变的出现,保护细胞膜、线粒体和肌丝的结构完整。 3生化指标结果显示,大强度和力竭运动均导致机体氧化应激水平增高,但是大强度氢水组和力竭氢水组与其对照组相比：血浆Hb含量（p＜0.05）、血清CK活性（p＜0.05）和骨骼肌MDA含量（p＜0.01）均显著降低,血清SDH、骨骼肌SOD活性和总抗氧化能力均显著升高（p＜0.05）。表明补充氢水可有效降低大强度和力竭运动大鼠骨骼肌氧化应激水平,提高抗氧化酶活性和总抗氧化能力。 4大强度和力竭运动大鼠补充氢水后,骨骼肌mTOR蛋白表达与其对照组比较显著升高（p＜0.05）。大强度和力竭运动大鼠补充氢水后,骨骼肌PmTOR蛋白表达与其对照组比较显著升高（p＜0.01）。 5大强度和力竭运动大鼠补充氢水后,骨骼肌LC3B-2蛋白表达与其对照组比较显著降低（p＜0.05）。 6大强度和力竭运动大鼠补充氢水后,骨骼肌P53蛋白表达与其对照组比较显著降低（p＜0.05）。 7力竭运动大鼠补充氢水后可有效延长力竭时间,提高运动能力。结论： 1大强度运动和力竭运动可导致骨骼肌超微结构发生运动性损伤。大强度运动可导致线粒体空泡样变增多,线粒体数量减少,肌浆网扩张明显;而力竭运动则导致线粒体空泡样变进一步增多,损伤加重,肌浆网扩张,线粒体结构破坏,膜结构发生损伤,肌节有断裂现象;2氢水能够有效减轻大强度运动和力竭运动对骨骼肌造成的损伤,保护线粒体的功能,降低线粒体空泡样变的出现,保护细胞膜、线粒体和肌丝结构完整。 3氢水能够有效降低骨骼肌氧化应激损伤,提高骨骼肌抗氧化的能力,提高运动能力。 4大强度和力竭运动可显著提高大鼠骨骼肌细胞自噬现象。补充氢水能够有效抑制大强度和力竭运动大鼠骨骼肌细胞的过度自噬。

关键词：氢水运动氧化应激自噬