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地塞米松对人晶状体上皮细胞核转录因子κb及其抑制蛋白α的表达和细胞凋亡的影响

中华实验眼科杂志 2011年第2期29卷 145-150页

作者：王钧蔚王林葛红岩刘平哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院 150001

背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κb（NF—κb）／NF—κb抑制蛋白κ（Iκbκ）表达的影响及LECs凋亡的发... 详细信息

背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κb（NF—κb）／NF—κb抑制蛋白κ（Iκbκ）表达的影响及LECs凋亡的发生情况，了解皮质类固醇性白内障的发病机制。方法取人LECs系（HLE283）在含质量分数20％胎牛血清的DMEM中进行培养和传代。将不同浓度的地塞米松（0．01、0．1、1、10、100μmol／L）分别加入DMSO无血清DMEM培养液中作为不同浓度地塞米松组，不含地塞米松的DMSO无血清DMEM培养液培养的LECs作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot、流式细胞术等方法，分别在基因水平、蛋白水平检测LECs中NF—κb／Iκb α浓度的改变及LECs凋亡率的变化。结果扩增的基因片段与所设计片段大小一致。地塞米松作用后NF—α核蛋白在LECs中的表达量随着地塞米松浓度的增加而下降，差异有统计学意义（F=36．077，P=0．004）；Iκbα蛋白的表达随着地塞米松浓度的增加而上升，差异有统计学意义（F=35．741，P=0．002）。在同浓度地塞米松组，NF—κb核蛋白在LECs中的表达量随作用时间的不同差异有统计学意义（F=16．606，P=0．01），与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48h时的NF—κb核蛋白表达量明显下降，差异有统计学意义（P=0．002；P=0．01）。与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48hIκbα蛋白在LECs中的表达量明显增加，差异均有统计学意义（P=0．014；P=0．002）。流式细胞仪检测显示LECs的凋亡率随着地塞米松浓度的增加明显上升，与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论地塞米松通过上调Iκbα的表达而过度抑制了NF—κb的活性，并导致LECs凋亡，其作用呈浓度依赖性，这可能是皮质类固醇性白内障发生发展的细胞学和分子生物学机制之一。

关键词：皮质类固醇性白内障地塞米松核转录因子κb 核转录因子κb抑制蛋白α 凋亡人晶状体上皮细胞

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携带突变型人IκbαDN cDNA重组嵌合腺病毒Ad5F35的制备与表达

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江苏医药 2008年第6期34卷 586-589页

作者：王光平王凯齐振华陈方平中南大学湘雅医院血液病科长沙410008 海军总医院儿科

目的制备携带突变型人核转录因子κb抑制蛋白α(Iκbα)cDNA的重组5型和35型嵌合腺病毒(Ad5F35),并分析其表达。方法应用DNA重组技术,从含有突变型人Iκbα(IκbαDN)cDNA的重组逆转录病毒载体pCLX-IκbαDN克隆IκbαDNcDNA到pDC316载... 详细信息

目的制备携带突变型人核转录因子κb抑制蛋白α(Iκbα)cDNA的重组5型和35型嵌合腺病毒(Ad5F35),并分析其表达。方法应用DNA重组技术,从含有突变型人Iκbα(IκbαDN)cDNA的重组逆转录病毒载体pCLX-IκbαDN克隆IκbαDNcDNA到pDC316载体以构建pDC-IκbαDN并随即制备携带IκbαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35。转染HL-60细胞后,通过实时定量PCR分析Iκbα的表达。结果通过DNA重组技术,将IκbαDNcDNA成功克隆到pDC316载体。DNA序列测定显示,重组pDC-IκbαDN载体内携带有无其它突变并具有正确阅读框架的人IκbαDNcDNA。转染HL-60细胞48h后,HL-60细胞IκbαmRNA表达增加。结论成功制备到含有人IκbαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35,并能够在HL-60细胞有效表达Iκbα。

关键词：腺病毒核转录因子κb抑制蛋白α 突变

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琐琐葡萄黄酮对阿尔茨海默病大鼠NF-κb/Iкb-α信号通路的影响

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时珍国医国药 2017年第10期28卷 2325-2328页

作者：马丽娟吴燕倪袁芳新疆医科大学高等职业技术学院新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学继续教育学院新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830054

目的探讨琐琐葡萄黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马组织NF-κb/Iкb-α信号通路的影响及可能的作用机制。方法SD大鼠分为对照组、多奈哌齐组、AD模型组、VTF低、中、高剂量组,采用海马双侧注射Aβ_(25-35)造模,通过免疫组化、免疫印迹及RT-PC... 详细信息

目的探讨琐琐葡萄黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马组织NF-κb/Iкb-α信号通路的影响及可能的作用机制。方法SD大鼠分为对照组、多奈哌齐组、AD模型组、VTF低、中、高剂量组,采用海马双侧注射Aβ_(25-35)造模,通过免疫组化、免疫印迹及RT-PCR检测NF-κbp65、Iкb-α在实验大鼠海马组织内的磷酸化水平、蛋白和基因表达情况。结果 VTF对Aβ_(25-35)诱导的NF-κb激活起到了一定的抑制作用。结论 VTF通过抑制Iκb-α的磷酸化实现对NF-κbp65核转位的抑制,从而保护大脑神经细胞。

关键词：阿尔茨海默病琐琐葡萄黄酮核转录因子κb 核转录因子κb抑制蛋白α

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蛋白酶体抑制剂PSI对大鼠早期糖尿病肾病发病的作用

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解剖学研究 2019年第1期41卷 29-34页

作者：黄红梅徐勇双流区第一人民医院内分泌科四川成都610200 西南医科大学附属医院内分泌科四川泸州646000

目的研究泛素蛋白酶体途径(UPP)对大鼠早期糖尿病肾病(DN)发病的可能作用机制及蛋白酶体抑制剂(PSI)对DN的治疗作用。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型后随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)和PSI治疗组(DP组)。检查体质... 详细信息

目的研究泛素蛋白酶体途径(UPP)对大鼠早期糖尿病肾病(DN)发病的可能作用机制及蛋白酶体抑制剂(PSI)对DN的治疗作用。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型后随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)和PSI治疗组(DP组)。检查体质童、肾重、肾重指数、24 h尿微量白蛋白(24 h U-mAlb)、尿蛋白/尿肌酐比值(Up/Ucr)、肾纤维化情况、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达及NF-κb和Iκbα蛋白表达。结果在6、8周时,与NC组比较,DC组的体质童明显降低(Pb、空腹血糖、FN mRNA均显著性增加(Pb、FN mRNA均显著性降低(P0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,DC组胞浆NF-κb P65蛋白表达显著降低(Pb P65蛋白表达增高(Pbα蛋白表达明显降低(Pb信号通路的泛素化调节从而参与早期DN发生;蛋白酶体抑制剂PSI能改善早期DN,理论上可部分治疗DN。

关键词：糖尿病肾病核转录因子κb 核转录因子κb抑制蛋白α 泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂

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