携带突变型人IκBαDN cDNA重组嵌合腺病毒Ad5F35的制备与表达

作     者：王光平 王凯 齐振华 陈方平 

作者机构：中南大学湘雅医院血液病科长沙410008 海军总医院儿科 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2008年第34卷第6期

页      面：586-589页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金(30270575) 

主　　题：腺病毒 核转录因子κB抑制蛋白α 突变 

摘      要：目的制备携带突变型人核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)cDNA的重组5型和35型嵌合腺病毒(Ad5F35),并分析其表达。方法应用DNA重组技术,从含有突变型人IκBα(IκBαDN)cDNA的重组逆转录病毒载体pCLX-IκBαDN克隆IκBαDNcDNA到pDC316载体以构建pDC-IκBαDN并随即制备携带IκBαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35。转染HL-60细胞后,通过实时定量PCR分析IκBα的表达。结果通过DNA重组技术,将IκBαDNcDNA成功克隆到pDC316载体。DNA序列测定显示,重组pDC-IκBαDN载体内携带有无其它突变并具有正确阅读框架的人IκBαDNcDNA。转染HL-60细胞48h后,HL-60细胞IκBαmRNA表达增加。结论成功制备到含有人IκBαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35,并能够在HL-60细胞有效表达IκBα。