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侵染昆明园林植物的4个HCRV分离株核壳体蛋白氨基酸序列分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2021年第1期36卷 165-168页

作者：王宇琪吴保为陶宏征贾志强高雪王景文刘雅婷云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201

【目的】比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。【方法】2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyrant... 详细信息

【目的】比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。【方法】2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyranthes candida)、文殊兰(Crinum asiaticum)、喜林芋(Philodendron schott)和酢浆草(Oxalis corniculata)4份感染朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)的样品,通过克隆、测序获得4份样品的S RNA序列,利用ORF Finder获得核壳体蛋白(nucleocapsid protein,N)并进行序列分析。【结果】文殊兰、喜林芋和酢浆草是首次报道的HCRV新寄主;4个HCRV分离物的N蛋白与NCBI首次报道的HLS1-2 N蛋白(登录号:AFX74694)一致性达到99.34%;系统进化树分析显示:4个HCRV分离物与GenBank公布的同样来自云南的株系聚为1支。【结论】病毒的地理分布相关性强于寄主相关性。

关键词：朱顶红褪绿环斑病毒核壳体蛋白序列分析

人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P的表达鉴定

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中国病毒学 2006年第3期21卷 213-216页

作者：虞结梅何金生李栋梁杨兵袁媛安徽医科大学免疫学教研室安徽合肥230032

本研究根据编码A亚型人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyncytialVirus,HRSV)核壳体蛋白(Nucleocapsidprotein,N)和磷蛋白(phosphoprotein,P)的基因序列,各设计一对特异性的引物,应用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得n和p的基因片断,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。获得的重组质粒通过脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,72h后再用Westernblot鉴定蛋白的表达。结果显示真核表达载体pcDNA3.1(+)/N和pcDNA3.1(+)/P的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变,利用蛋白印记方法也检测到了N和P的特异性条带。于是我们认为成功构建了含有HRSVN和P编码基因的真核表达载体,在真核细胞内能顺利表达。为进一步开展HRSV反向遗传学等研究奠定了基础。

关键词：人呼吸道合胞病毒(HRSV) 核壳体蛋白磷蛋白真核表达

汉坦病毒核蛋白基因表达及产物抗原活性的研究

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中国公共卫生 1999年第12期15卷 1148-1149页

作者：田君喜王敬军卢永周燕平封怀义张家驹陕西省卫生防疫站西安710054

为了制备肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）诊断用基因工程抗原，构建了合汉坦病毒７６１１８株编码核蛋白（ＮＰ）基因片段的重组质粒ｐＢＶ２２０Ｈ１－３Ｓ，经转化大肠杆菌和诱导表达，ＳＤＳＰＡＧＥ显示菌体中有分子量约为４... 详细信息

为了制备肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）诊断用基因工程抗原，构建了合汉坦病毒７６１１８株编码核蛋白（ＮＰ）基因片段的重组质粒ｐＢＶ２２０Ｈ１－３Ｓ，经转化大肠杆菌和诱导表达，ＳＤＳＰＡＧＥ显示菌体中有分子量约为４８ＫＤ的新蛋白质生成。用经包含体纯化获得的表达产物做抗原，以间接酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）检测了４８份疑似出血热患者的血清特异性ＩｇＧ，其结果与经典的间接免疫荧光（ＩＦＡ）检测的阴性、阳性及总符合率分别为１００％、９２－８６％和９３－７５％。证实该重组ＮＰ

关键词：汉坦病毒核壳体蛋白原核表达

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犬瘟热病毒的分离鉴定

中国兽医杂志 2007年第1期43卷 38-42页

作者：肖定福张汇东温海李文平朱骞湖南农业大学动物科学技术学院湖南长沙410128 公安部南京警犬研究所江苏南京210012

犬瘟热病毒(CDV)是副粘病毒科麻疹病毒属的重要成员,基因组为不分节、非重叠的负链RNA,其长15960 bp,由一个短的3′端前导区和核壳体蛋白(N蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、基质蛋白(M蛋白)、融合蛋白(F蛋白)、血细胞凝集素蛋白(H蛋白)和巨蛋白(... 详细信息

犬瘟热病毒(CDV)是副粘病毒科麻疹病毒属的重要成员,基因组为不分节、非重叠的负链RNA,其长15960 bp,由一个短的3′端前导区和核壳体蛋白(N蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、基质蛋白(M蛋白)、融合蛋白(F蛋白)、血细胞凝集素蛋白(H蛋白)和巨蛋白(L蛋白)等六个结构基因及V蛋白和C蛋白两个非结构蛋白组成[1,2].本试验中分离的CDV株可用于致弱驯化选育为疫苗侯选株,此疫苗株免疫特异性可望比目前用的疫苗株好;也可为今后对其核苷酸序列测定及分析研究和研制单克隆抗体打下基础.

关键词：犬瘟热病毒分离鉴定核苷酸序列测定血细胞凝集素 N蛋白核壳体蛋白单克隆抗体疫苗株

短发卡RNA对细胞及小鼠体内甲型流感病毒抑制作用研究

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临床军医杂志 2020年第1期48卷 1-4页

作者：史亮尹沈慧任浩高荣赵俭马壮孙文武曹建平北部战区总医院呼吸与危重症医学科辽宁沈阳110016 海军军医大学海军医学系上海200433 解放军联勤保障部队第九六八医院呼吸科辽宁锦州121001

目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞及小鼠体内甲型流感病毒(IVA)抑制作用。方法合成12种针对IVA保守区域的shRNA,观察这些shRNA对IVA在细胞中复制的影响。将转染了shRNA的质粒以气溶胶形式雾化吸入小鼠,然后以流感病毒感染小鼠并检测小鼠... 详细信息

目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞及小鼠体内甲型流感病毒(IVA)抑制作用。方法合成12种针对IVA保守区域的shRNA,观察这些shRNA对IVA在细胞中复制的影响。将转染了shRNA的质粒以气溶胶形式雾化吸入小鼠,然后以流感病毒感染小鼠并检测小鼠肺组织流感病毒载量。结果转染了质粒PLKD-M-121、PLKD-M-935、PLKD-NP-391、PLKDNP-1291、PLKD-PA-1365、PLKD-PA-1645的犬肾细胞中IVA载量均显著低于对照组及空质粒组(P 蛋白(M2)、核壳体蛋白(NP)和聚合酶A(PA)片段的shRNA可以抑制流感病毒的产生,以气溶胶形式吸入聚乙烯亚胺/PLKD-NP-391复合物可以抑制小鼠肺部流感病毒的产生。

关键词：甲型流感病毒 RNA干扰基质蛋白2 核壳体蛋白聚合酶A 短发卡RNA

shRNA对H1N1及H7N9亚型流感病毒抑制作用的研究

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西南国防医药 2020年第8期30卷 701-704页

作者：史亮尹沈慧任浩高荣马壮孙文武曹建平北部战区总医院呼吸与危重症医学科沈阳110016 海军军医大学海军医学系

目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞内H1N1及H7N9甲型流感病毒(IVA)的抑制作用。方法合成12种针对H1N1亚型流感病毒保守区域的短发卡RNA(shRNA),观察了这些shRNA对不同亚型流感病毒在细胞中复制的影响。结果转染了质粒pLKD-M-121、pLKD-M-... 详细信息

目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞内H1N1及H7N9甲型流感病毒(IVA)的抑制作用。方法合成12种针对H1N1亚型流感病毒保守区域的短发卡RNA(shRNA),观察了这些shRNA对不同亚型流感病毒在细胞中复制的影响。结果转染了质粒pLKD-M-121、pLKD-M-935、pLKD-NP-391、pLKD-NP-1291、pLKD-PA-1365和pLKD-PA-1645的MDCK细胞的H1N1病毒载量显著低于H1N1阳性对照组和空质粒组(P蛋白(M2),核壳体蛋白(NP)和聚合酶A(PA)片段的shRNAs可以抑制H1N1和H7N9亚型流感病毒的复制。

关键词：甲型流感病毒 RNA 干扰基质蛋白2 核壳体蛋白聚合酶A 短发卡RNA

Tospovirus属病毒的ssRNA-S链的比对分析

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Tospovirus属病毒的ssRNA-S链的比对分析

用位点杂交法检测自然感染仔猪肺中PRRSV核酸

中国植物病理学会2009年学术年会

作者：刘雅婷李正跃郑元仙徐小刚李永忠云南农业大学农学与生物技术学院云南农业大学植保学院云南农业大学烟草学院

Tospovirus属引起多种农作物和花卉的严重病害。本研究应用生物信息学软件DNAstar、DNAman对Tospovirus属所有成员的RNA-S中的外壳蛋白（NC）和非结构蛋白（NSs）的编码核酸和氨基酸序列进行了较为系统的分析:同源性树状图、进化树图以... 详细信息

Tospovirus属引起多种农作物和花卉的严重病害。本研究应用生物信息学软件DNAstar、DNAman对Tospovirus属所有成员的RNA-S中的外壳蛋白（NC）和非结构蛋白（NSs）的编码核酸和氨基酸序列进行了较为系统的分析:同源性树状图、进化树图以及一致性（Identity）的值,同源性的值以及进化树的值。同时应用网络软件NPSA和SMART进行了该蛋白质氨基酸组成和蛋白质拓扑结构的预测,发现ssRNA-S链中的NC的特异性非常高。为将来应用RT-PCR或IC-RT-PCR技术鉴定番茄斑萎病毒种的引物设计及致病机制研究提供依据。

关键词：番茄斑萎病毒属核壳体蛋白非结构蛋白

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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畜牧兽医科技信息 1999年第5期1卷 6-6页

作者：李凯年

韩国研究人员用位点杂交法研究了7头自然感染仔猪福尔马林固定石蜡包埋肺组织中猪繁殖和呼吸道综合征病毒(PRRSV)的复制,本法使用洋地黄毒苷标记的探针。用PCR生成一个433bp cDNA探针,该探针可用于编码一个Korean PRRSV分离物核壳体蛋... 详细信息

韩国研究人员用位点杂交法研究了7头自然感染仔猪福尔马林固定石蜡包埋肺组织中猪繁殖和呼吸道综合征病毒(PRRSV)的复制,本法使用洋地黄毒苷标记的探针。用PCR生成一个433bp cDNA探针,该探针可用于编码一个Korean PRRSV分离物核壳体蛋白的病毒RNA。所有7头用PRRSV感染的仔猪都表现清晰的阳性信号,散布于整个肺泡隔与间隙。

关键词： PRRSV 自然感染杂交法呼吸道综合征核壳体蛋白 cDNA探针肺泡巨噬细胞石蜡包埋猪肺位点杂交

High-yield expression of recombinant SARS coronavirus nudeocapsid protein in methylotrophic yeast Pichia pastoris

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世界胃肠病学杂志：英文版 2004年第24期10卷 3602-3607页

作者： Ru-Shi Liu Kun-Yu Yang Jian Lin Yi-Wei Lin Zhi-Hong Zhang Jun Zhang Ning-Shao Xia The Key Laboratory for Cell Biology and Tumor Cell Engineering of the Ministry of Education The Research Center for Medical Molecular Virology of Fujian Province,Xiamen University,Xiamen 361005,Fujian Province,China

AIM: Nucleocapsid (N) protein plays an important role in reproduction and pathological reaction of severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus (SCoV), the antigenicity of the protein is better than spike (S) *** study was to find a highly specific and antigenic recombinant SCoV nucleocapsid (rSCoVN) protein, and to provide a basis for further researches on early diagnosis of ***: Full length cDNA of SCoV nucleocapsid (SCoVN) protein was amplified through polymerase chain reaction (PCR) and cloned into yeast expression vector pPIC3.5K to construct plasmid of pPIC3.5K-SCoVN. The plasmid was linearized and then transformed into Pichia pastoris (***) GS115 (His^+ Mut^+) by electroporation. His^+Mut^+ recombinant strains were identified by PCR and cultivated on MM/MD plates. The influence of different factors on biomass and rSCoVN protein production during induction phase, such as various induction media, dissolved oxygen (DO) and different final concentrations of methanol, was subsequently studied. The expression level and activation were detected by SDS-PAGE and Western-blot ***: All of the recombinants were His^+Mut^+ after transformation of *** with linearized plasmids. The BMMY medium was optimal for recombinant ScoVN (rSCoVN) protein expression and growth of the recombinant *** final optimal concentration of methanol was 20 ml_/L,the DO had a significant effect on rSCoVN protein expression and growth of recombinant strains. The rSCoVN protein expressed in recombinant strains was about 8% of the total cell protein, 520 mg/L of rSCoVN protein was achieved,and a maximum cell A at 600 nm of 62 was achieved in shake flask culture. The rSCoVN protein had a high specificity against mouse-anti-SARS-CoVN-mAb and SARS positive sera, but had no cross-reaction with normal human *** biological activity of rSCoVN expressed in *** was about 4-fold higher than that expressed in Ecoliwhen the same rSCoVN

关键词：高生长表达重组细胞 SARS 冠状病毒核壳体蛋白甲基营养菌毕赤酵母 rSCoVN蛋白质