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作者：王方莉浙江工业大学

学位级别：硕士

固相微萃取(solid-phase microextraction,SPME)是集采样、萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理与富集技术,常与气相色谱-质谱仪结合,分析复杂基质中的痕量目标化合物。基于蜂蜜挥发性成分的研究可以从植物的角度辨别蜂蜜真假和种类。... 详细信息

固相微萃取(solid-phase microextraction,SPME)是集采样、萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理与富集技术,常与气相色谱-质谱仪结合,分析复杂基质中的痕量目标化合物。基于蜂蜜挥发性成分的研究可以从植物的角度辨别蜂蜜真假和种类。本文主要从柑橘蜜分析方法的建立和贮藏时间试验两方面进行论述:1.采用顶空固相微萃取采样与气相色谱-质谱法结合进行柑橘蜜中挥发性组分的定性和定量测定。取柑橘蜜4.00 g与水1.00 g置于顶空瓶中,用DVB/CAR/PDMS作萃取头,将顶空瓶密封,在50℃水浴中搅拌10 min,并进行顶空固相微萃取50 min。取出萃取头,插入气相色谱仪进样口于250℃解吸3.5 min,经TG-5MS毛细管柱分离,质谱测定中采用EI离子化方式。用此方法分析了 13种柑橘蜜样品,鉴定了 105种挥发性组分,主要有醇、烃、醛及酯类化合物,并确定柠檬烯、反式和顺式氧化芳樟醇、炉芳樟醇以及柠檬醛为其特征性成分,其含量区间分别为 0.10-47.18、13.62-3854.85、1.50-1136.15、0.10-131.69、0.10-22.67μg.100g-1。测得各特征性成分的绝对峰面积值的相对标准偏差(n=5)在2.9%-19.7%之间。2.研究25℃避光环境下贮藏1天、30天、60天、90天、150天后测定8种柑橘蜜挥发性成分。通过固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术提取、分离和检测。所有柑橘蜜在整个贮藏过程中都含有乙醇、邻甲基异丙基苯、柠檬烯、柠檬醛、反式和顺式氧化芳樟醇、(1,1-叔丁基)-2-甲基-1,3-丙二酯、灸芳樟醇、脱氢芳樟醇和α-萜品醇。金桔蜜特征性成分可能为1,1,5-三甲基-1,2-二氢化萘;沙糖桔特征性成分比较丰富,有紫丁香醇(异构体I)、γ-萜品烯、异佛尔酮、藏花醛等13种物质;椪柑蜜特征性成分可能为1,7,7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-烯和(E)-橙花叔醇;蜜桔蜜特征性成分可能为乙酸-3-甲基-1-丁酯、己酸乙酯;脐橙蜜特征性成分可能为水杨酸甲酯。结合主成分分析判别贮藏过程中不同品种柑橘蜜,效果显著,第一主成分的方差为47.7%,第二主成分的方差为24.8%。随着贮藏时间的延长,柑橘蜜挥发性成分种类增多,主要是酯类、醇类物质;芳樟醇及其派生物含量减低,风味有所降低。

关键词：顶空固相微萃取气相色谱-质谱法特征性成分贮藏时间柑橘蜜

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柑橘蜜的化学组成及其对急性酒精肝损伤的预防作用

柑橘蜜的化学组成及其对急性酒精肝损伤的预防作用

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作者：谢妙龄南昌大学

学位级别：硕士

芸香科柑橘属(Citrus)植物包括柚(***)、甜橙(***)和柑橘(***)等。我国是柑橘类水果大国,江西柑橘类水果栽培尤其突出。2015年末,全省的柑橘类水果种植面积为333.10千公顷,产量410.12万吨。柑橘属植物多为泌蜜量大的蜜源植物,江西柑橘... 详细信息

芸香科柑橘属(Citrus)植物包括柚(***)、甜橙(***)和柑橘(***)等。我国是柑橘类水果大国,江西柑橘类水果栽培尤其突出。2015年末,全省的柑橘类水果种植面积为333.10千公顷,产量410.12万吨。柑橘属植物多为泌蜜量大的蜜源植物,江西柑橘蜜的蜜源非常丰富,对柑橘蜜的系统性研究具有重要意义。柑橘蜜是一种常见的单花蜜,具有蜂蜜的一般理化性质,含有丰富的酚类化合物,具有抑菌能力和抗氧化活力等生物活性。目前,埃及、西班牙、意大利等国的柑橘蜜已有相关研究,中国的柑橘蜜研究较少。本文以江西产柑橘蜜为研究对象,通过对含水量、酸度、糖组成、电导率、p H、淀粉酶指数、5-羟甲基糠醛(5-HMF)等指标,研究柑橘蜜的理化性质;采用DPPH、FRAP和ABTS 3种方法测定了柑橘蜜的抗氧化活性。基于高效液相色谱(HPLC)结合标准品对柑橘蜜中的酚类化合物进行定性和定量,研究柑橘蜜的酚类化合物组成,进一步使用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS)分析柑橘蜜的化学组成,并通过构建小鼠酒精肝损伤模型,探究柑橘蜜对酒精肝损伤的预防作用。主要的研究结果如下:1、按照国家标准及国际蜂蜜委员会规定办法测定了柑橘蜜的常规理化指标,结果表明,柑橘蜜颜色为浅琥珀色(色度L*:52.16-57.33,a*:-1.56-0.78,b*:5.49-12.40)。含水量(18.76%-20.48%)、p H值(4.21-4.66)、酸度(8.77-10.12 m L·kg)、电导率(0.16-0.17 m S·cm)、糖组成、5-HMF(0.20-0.58 mg·kg)、淀粉酶活性(5.69-7.18[m L·(g·h)])、总酚(15.39-18.47 mg/100 g)和总黄酮(4.03-4.51mg/100 g)等各项理化指标符合行业标准。柑橘蜜的5-HMF含量较低,淀粉酶活性较高,总酚、总黄酮含量较低。ABTS、FRAP、DPPH自由基清除结果表明柑橘蜜具有一定的抗氧化能力,ABTS为0.48-0.53 m M,FRAP为0.28-0.33 m M,对DPPH自由基清除的IC值为66.9-135.3 mg·m L。2、采用HPLC-UV法对柑橘蜜中14种酚类化合物进行定性定量,包括没食子酸(67.12-89.92μg·(100 g))、原儿茶酸(16.07-17.00μg·(100 g))、绿原酸(30.07-42.78μg·(100 g))、对羟基苯甲酸(76.56-87.36μg·(100 g))、咖啡酸(11.63-16.71μg·(100 g))、对香豆酸(35.32-54.29μg·(100 g))、芦丁(228.19-298.43μg·(100 g))、阿魏酸(34.11-43.82μg·(100 g))、染料木苷(19.76-26.57μg·(100 g))、橙皮苷(76.79-83.17μg·(100 g))、白藜芦醇(1086.65-1388.31μg·(100 g))、槲皮素(84.50-96.56μg·(100 g))、山萘酚(115.83-140.96μg·(100g))和橙皮素(53.76-59.57μg·(100 g))。进一步通过UPLC-Q-TOF-MS在柑橘蜜中鉴定出了41种化合物,其中正、负离子模式下分别鉴定了19种和22种化合物,包括黄酮类化合物、酚酸、有机酸、生物碱和萜类化合物等。3、小鼠喂食柑橘蜜12周后进行酒精造模,以探究柑橘蜜对小鼠酒精肝损伤保护及肠道菌群的调节作用。酒精导致血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)明显升高,高剂量柑橘蜜能降低ALT和AST水平,低剂量柑橘蜜能降低ALT水平。将肝组织做苏木精伊红(HE)染色切片,酒精导致肝脏细胞脂肪变性、水肿,肝组织炎症细胞浸润,柑橘蜜能起到缓解作用,高浓度柑橘蜜效果最好。酒精也导致肠道菌群生态失调,厚壁菌门丰度提高,拟杆菌门丰度降低,柑橘蜜可以缓解这种变化,低浓度柑橘蜜效果最好。肠道菌群的β多样性(PCo A分析和样本层级聚类分析)和LEf Se分析说明,不同浓度柑橘蜜组间差异较小,较接近空白对照组,酒精模型组与其他各组差异较大。综上所述,柑橘蜜的各项理化指标都符合国家标准,具有5-HMF含量低、淀粉酶活性高等特征;柑橘蜜富含多种酚、黄酮类活性成分,并具有较强的抗氧化能力,对酒精性肝损伤有一定预防作用。本研究为柑橘蜜的开发利用提供了理论基础,为柑橘蜜的品质评价、真实性鉴定、质量控制和蜜源植物溯源等提供了一定的理论依据。

关键词：柑橘蜜理化性质化学组成 HPLC-UV UPLC-Q-TOF-MS 抗氧化活性酒精肝损伤肠道菌群

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顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法对柑橘蜜中挥发性组分的定性和半定量分析

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理化检验（化学分册） 2014年第4期50卷 429-434页

作者：王方莉吴俐勤沈振陆莫卫民李丽钱鸣蓉章虎汪建妹浙江工业大学化学工程与材料学院杭州310014 浙江省农业科学院农产品质量标准研究所杭州310021

采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱法结合进行柑橘蜜中挥发性组分的定性和半定量分析。取柑橘蜜4.00g与水1.00g置于顶空瓶中,用DVB/CAR/PDMS纤维头作萃取头,将顶空瓶密封,在50℃水浴中搅拌10min,萃取50min。取出萃取头,插入气相色谱仪... 详细信息

采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱法结合进行柑橘蜜中挥发性组分的定性和半定量分析。取柑橘蜜4.00g与水1.00g置于顶空瓶中,用DVB/CAR/PDMS纤维头作萃取头,将顶空瓶密封,在50℃水浴中搅拌10min,萃取50min。取出萃取头,插入气相色谱仪中于255℃解吸3.5min,经TG-5MS毛细管柱分离,质谱测定采用电子轰击离子化方式。用此方法分析了4种柑橘蜜样品,鉴定了72种挥发性组分,主要有醇、烃、酮、醛及酯类化合物,并确定柠檬烯、反式和顺式氧化芳樟醇、β-芳樟醇以及柠檬醛为其特征性成分。按方法对8种样品进行分析,测得各特征性成分的绝对峰面积的相对标准偏差(n=5)在2.9%~20%之间。

关键词：顶空固相微萃取气相色谱-质谱法柑橘蜜挥发性组分

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UPLC-MS/MS法分析10种不同蜜源蜂蜜中的黄酮类组分

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药物分析杂志 2016年第12期36卷 2180-2189页

作者：王笑笑周勇俞婷婷颜伟华吴永江衢州市食品药品检验研究院衢州324002 浙江大学药学院杭州310058 浙江中医药大学附属第三医院杭州310005

目的:建立超高效液相色谱质谱分析方法,比较不同蜜源蜂蜜中黄酮类组分的区别。方法:不同蜜源蜂蜜经D_(101)型大孔吸附树脂提取纯化后采用UPLC-MS/MS进行分析。色谱柱采用Inertsil ODS-3柱(2.1 mm×75 mm,2μm),以甲醇-0.02%甲酸水溶液... 详细信息

目的:建立超高效液相色谱质谱分析方法,比较不同蜜源蜂蜜中黄酮类组分的区别。方法:不同蜜源蜂蜜经D_(101)型大孔吸附树脂提取纯化后采用UPLC-MS/MS进行分析。色谱柱采用Inertsil ODS-3柱(2.1 mm×75 mm,2μm),以甲醇-0.02%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L·min^(-1),柱温40℃;以儿茶素、表儿茶素、芦丁、芸香柚皮苷、桑黄素、杨梅素、山柰酚、生松素等16个黄酮类对照品作为对照,采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)进行分析。结果:儿茶素、表儿茶素、芸香柚皮苷、芦丁、桑黄素、杨梅素、柚皮素、槲皮素、染料木素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、生松素、汉黄芩素、白杨素和高良姜素的质量浓度分别在0.835~83.5μg·m L^(-1)(r=0.998 5)、0.562~22.48μg·m L^(-1)(r=0.999 0)、0.095 2~4.76μg·m L^(-1)(r=0.995 5)、0.052 2~1.307μg·m L^(-1)(r=0.998 0)、1.608~40.2μg·m L^(-1)(r=0.997 0)、0.45~9.0μg·m L^(-1)(r=0.998 5)、0.006 9~0.69μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、0.022 5~4.498μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、0.040 6~4.055μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、0.073 3~3.665μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、3.26~32.6μg·m L^(-1)(r=0.996 5)、0.021 4~1.072μg·m L^(-1)(r=0.999 0)、0.047 2~1.18μg·m L^(-1)(r=0.998 5)、0.001 4~0.353μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、0.058~2.925μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、0.222 4~11.12μg·m L^(-1)(r=0.997 5)范围内与峰面积呈良好的线性关系,提取回收率分别为2.7%、3.8%、0.26%、0.00%、70.6%、59.3%、83.0%、87.8%、83.4%、81.1%、93.3%、89.9%、86.1%、95.9%、89.8和93.3%,基质效应(n=5)在94.29%~115.72%之间,18 h内基本稳定,其中杨梅素6 h内稳定(RSD=2.3%)。不同蜜源蜂蜜之间黄酮类组分及其含量有一定程度的差异。如洋槐蜜中槲皮素、白杨素、生松素和山柰酚为主,木犀草素、染料木素、汉黄芩素等为辅;柑橘蜜中以槲皮素、山柰酚、高良姜素和汉黄芩素为主,木犀草素和芹菜素为辅;油菜蜜中以山柰酚和槲皮素为主,白杨素、生松素、柚皮素、染料木素、木犀草素和汉黄芩素等为辅等。某些化合物有可能成为蜂蜜中的潜在标志组分,如洋槐蜜中的染料木素及柑橘蜜中的汉黄芩素,与其他蜜源蜂蜜中的组分含量相比,具有含量占比高或蜂蜜和蜜源花中均有等特点。结论:该方法选择性强,灵敏度高,所得结果准确可靠,同时有助于单花蜜蜜源来源的鉴定。

关键词：蜂蜜蜜源洋槐蜜柑橘蜜油菜花蜜黄酮类化合物桑黄素杨梅素柚皮素槲皮素染料木素木犀草素山柰酚芹菜素生松素汉黄芩素白杨素高良姜素超高效液相串联质谱

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UPLC-MS/MS法分析3种蜂蜜及其蜜源花中的特征黄酮类组分

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药物分析杂志 2017年第6期37卷 994-1000页

作者：程巧鸳王笑笑浙江省食品药品检验研究院杭州310052 衢州市食品药品检验研究院衢州324002

目的:分析柑橘、油菜和紫云英蜜中的特征黄酮类组分。方法:采用UPLC-MS/MS同时分析油菜蜜、紫云英蜜和柑橘蜜及其蜜源花中的黄酮类组分。色谱柱采用Inertsil ODS-3柱(2.1 mm×75 mm,2μm),柱温40℃,以甲醇-0.02%甲酸为流动相梯度洗脱,... 详细信息

目的:分析柑橘、油菜和紫云英蜜中的特征黄酮类组分。方法:采用UPLC-MS/MS同时分析油菜蜜、紫云英蜜和柑橘蜜及其蜜源花中的黄酮类组分。色谱柱采用Inertsil ODS-3柱(2.1 mm×75 mm,2μm),柱温40℃,以甲醇-0.02%甲酸为流动相梯度洗脱,流速为0.4 m L·min^(-1);以儿茶酸、表儿茶酸、芦丁、芸香柚皮苷、桑黄素、杨梅素、山柰酚、生松素等16个黄酮类对照品作为对照,采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)进行分析。结果:不同蜜源蜂蜜中的特征黄酮类组分及其含量(从高到低排列)有所不同:柑橘蜜的特征组分有柚皮素、木犀草素、芹菜素和汉黄芩素;油菜花蜜的特征组分有柚皮素、槲皮素和汉黄芩素;紫云英蜜的特征组分有槲皮素、山柰酚、芹菜素和汉黄芩素。结论:该方法灵敏度高,以蜜源花作为"对照"寻找蜂蜜中的特征成分具有数据可靠、可溯源性,并对蜜源花中化学成分的分析具有指导意义。

关键词：油莱蜜柑橘蜜紫云英蜜黄酮柚皮素槲皮素山柰酚芹菜素汉黄芩素木犀草素超高效液质色谱联用

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