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江苏科技成果通报 2000年第9期 18-19页

枸杞糖肽是从中药枸杞子中提取纯化得到的有效部位，是一种植物糖蛋白，平均分子量为40000。糖蛋白含量超过70％。

关键词：枸杞糖肽枸杞子植物糖蛋白提取工艺中药

枸杞糖肽可减轻放射治疗后人牙龈成纤维细胞来源的外泌体导致的成骨抑制

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南方医科大学学报 2024年第9期44卷 1752-1759页

作者：何思齐文楠陈勋王跃张艇牟雁东成飞医院四川成都610073 宜宾市第一人民医院四川宜宾644000 四川省人民医院口腔科四川成都610072 卷烟减害降焦四川省重点实验室四川成都610100

目的研究枸杞糖肽(LbGP)对放射后人牙龈成纤维细胞(HGFs)来源的外泌体对成骨抑制的保护作用。方法将HGFs分为对照组、放射组及枸杞糖肽组,通过RT-qPCR、Western blotting及β-半乳糖苷酶染色检测细胞的凋亡、衰老水平以及α-平滑肌肌动... 详细信息

目的研究枸杞糖肽(LbGP)对放射后人牙龈成纤维细胞(HGFs)来源的外泌体对成骨抑制的保护作用。方法将HGFs分为对照组、放射组及枸杞糖肽组,通过RT-qPCR、Western blotting及β-半乳糖苷酶染色检测细胞的凋亡、衰老水平以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的差异表达。提取各组细胞分泌的外泌体,通过电镜观察、粒径分析以及Western blotting鉴定外泌体,并分别将各组牙龈成纤维细胞产生的外泌体作用于破骨前体细胞及骨髓间充质干细胞(BMSCs)中,通过Trap染色、茜素红染色、ALP染色、RT-qPCR以及Western blotting检测细胞的破骨及成骨情况。结果衰老细胞在放射组较对照组增多,而在枸杞糖肽组较放射组减少;与对照组相比,放射组Bcl-2/Bax降低(P枸杞糖肽组Bcl-2/Bax增多(P枸杞糖肽组破骨细胞减少;钙结节、碱性磷酸酶表达水平在放射组低于对照组,在枸杞糖肽组高于放射组;成骨相关基因(BMP2、ALP、RUNX2)及成骨相关蛋白(ALP、RUNX2)的表达水平在枸杞糖肽组高于放射组(P均枸杞糖肽可通过作用于放射后的牙龈成纤维细胞的外泌体,有效抑制破骨、促进成骨和预防放射性颌骨骨髓炎的发展,这可能为放射性颌骨骨髓炎的治疗提供一种新策略。

关键词：枸杞糖肽外泌体放射性颌骨骨坏死成骨分化

枸杞糖肽可减轻放射治疗后人牙龈成纤维细胞来源的外泌体导致的成骨抑制

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南方医科大学学报 2024年

作者：何思齐文楠陈勋王跃张艇牟雁东成飞医院宜宾市第一人民医院四川省人民医院口腔科卷烟减害降焦四川省重点实验室

目的研究枸杞糖肽（LbGP）对放射后人牙龈成纤维细胞（HGFs）来源的外泌体对成骨抑制的保护作用。方法将HGFs分为对照组、放射组及枸杞糖肽组，通过RT-qPCR、Western blotting及β-半乳糖苷酶染色检测细胞的凋亡、衰老水平以及α-平... 详细信息

目的研究枸杞糖肽（LbGP）对放射后人牙龈成纤维细胞（HGFs）来源的外泌体对成骨抑制的保护作用。方法将HGFs分为对照组、放射组及枸杞糖肽组，通过RT-qPCR、Western blotting及β-半乳糖苷酶染色检测细胞的凋亡、衰老水平以及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的差异表达。提取各组细胞分泌的外泌体，通过电镜观察、粒径分析以及Western blotting鉴定外泌体，并分别将各组牙龈成纤维细胞产生的外泌体作用于破骨前体细胞及骨髓间充质干细胞（BMSCs）中，通过Trap染色、茜素红染色、ALP染色、RT-qPCR以及Western blotting检测细胞的破骨及成骨情况。结果衰老细胞在放射组较对照组增多，而在枸杞糖肽组较放射组减少；与对照组相比，放射组Bcl-2/Bax降低（P枸杞糖肽组bcl-2/bax增多（P枸杞糖肽组破骨细胞减少；钙结节、碱性磷酸酶表达水平在放射组低于对照组，在枸杞糖肽组高于放射组；成骨相关基因（BMP2、ALP、RUNX2）及成骨相关蛋白（ALP、RUNX2）的表达水平在枸杞糖肽组高于放射组（P均枸杞糖肽可通过作用于放射后的牙龈成纤维细胞的外泌体，有效抑制破骨、促进成骨和预防放射性颌骨骨髓炎的发展，这可能为放射性颌骨骨髓炎的治疗提供一种新策略。

关键词：枸杞糖肽外泌体放射性颌骨骨坏死成骨分化

Ⅲ型干扰素和枸杞糖肽在抗SARS-CoV-2感染的作用和机制研究

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Ⅲ型干扰素和枸杞糖肽在抗SARS-CoV-2感染的作用和机制研究

作者：范君言中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景和目的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019,COVID-19）是由新型冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）引起的严重威胁人类健康的传染病,目前全球累计新冠确诊病例超6亿人,给世界... 详细信息

研究背景和目的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019,COVID-19）是由新型冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）引起的严重威胁人类健康的传染病,目前全球累计新冠确诊病例超6亿人,给世界带来了严重的公共卫生危机和沉重的社会经济负担。尽管疫苗接种和单克隆抗体疗法降低了与SARS-CoV-2感染相关的发病率和死亡率,但刺突基因的一系列突变体影响其疗效,再次引发大规模人员流行和损失的风险持续存在。因此,有必要进一步研究针对变异病毒的抗病毒药物干预措施,尤其是在疫苗和特效药研制成功之前,为应对新发突发传染病做好前期药物储备。新的抗病毒药物研发生产必须投入大量的资金和时间,而采取“药物新定位”的策略,拓展已批准药物的适应症范围,可以降低药物的安全风险,减少研发投入成本,并缩短开发周期。鉴于目前抗病毒药物种类有限且其作用有限,提升人体自身免疫力被认为是对抗病毒最有效的方式。作为一种广谱抗病毒药物,干扰素被视为抑制多种呼吸道病毒复制和传播的重要天然因子。通过早期干预提高机体固有免疫,干扰素可能发挥关键作用,评估其在抗击COVID-19中的潜在作用是应对当前病毒大流行的一种有效的策略。在新冠疫情初期缺乏疫苗和特效药的情况下,中药的可获得性具有关键的重要性。最早的《新型冠状病毒感染诊疗方案》中也强调了中西医结合的防治方针。近年来,病毒性呼吸道传染病频繁暴发,中医药中的天然多糖及其衍生物已被证明具有抗多种病毒的生物活性,如SARS-CoV-1、甲型H1N1流感病毒等。研究表明,枸杞糖肽（Lycium barbarum Glycopeptide,LbGp）可以增强人体免疫力,从而有助于抵抗病毒感染。可见,挖掘传统中药中的有效成分,阐明其抗病毒和免疫调节作用机制,进一步发挥中药在SARS-CoV-2感染治疗中的作用,为应对突发新发传染病增强内生动力。本课题从Ⅲ型干扰素和枸杞糖肽两个方面进行探索,以SARS-CoV-2作为切入点,观察在病毒感染早期进行药物预防性干预对疾病的影响,评价两种药物在体内外抗病毒活性,阐明其在抗病毒和免疫调节作用机制,提出针对性的免疫策略,在后疫苗时代针对新冠病毒免疫逃逸变异和其他新发病毒性传染病的早期预防,进而预防和化解重大公共卫生危机具有极其重要的意义。一、Ⅲ型干扰素在抗SARS-CoV-2感染的作用和机制研究干扰素（Interferon,IFN）是人体产生的一类具有多功能活性的细胞因子,是先天免疫系统清除病毒感染的重要武器,鉴于其广泛的抗病毒效果以及良好的安全性,常被选为抗病毒药物联合治疗的一部分。干扰素分为3大型:I型干扰素（IFN-α和IFN-β）、II型干扰素（IFN-γ）和Ⅲ型干扰素（IFN-λ）,其中IFN-γ主要在免疫调节方面发挥作用,抵抗病毒感染的主要是I型干扰素和Ⅲ型干扰素。所有有核细胞均可以产生I型干扰素并且表达I型干扰素受体,在抵抗病毒感染时往往伴有炎症因子表达带来的病理损伤。而Ⅲ型干扰素主要产生于黏膜屏障,而且选择性的作用于黏膜上皮细胞和少部分免疫细胞,发挥抗病毒作用的同时控制了免疫病理损伤,是呼吸道抗病毒免疫中的良好效应分子。本课题拟使用细胞和叙利亚仓鼠感染模型评估Ⅲ型干扰素在体内外的抗病毒活性,阐明Ⅲ型干扰素抗SARS-CoV-2感染中的作用机制,明确其发挥抗病毒的重要生物学过程和关键靶标分子。（一）研究方法1.细胞层面上,使用Ⅲ型干扰素预处理NCI-H1650、Calu-3肺腺癌细胞系后,分别利用新冠假病毒和真病毒进行感染,检测荧光酶活性和细胞内病毒载量,评价Ⅲ型干扰素在体外的抗病毒活性。2.依托SARS-CoV-2仓鼠感染模型,在感染SARS-CoV-2前使用Ⅲ型干扰素预先滴鼻给药,检测肺组织匀浆中病毒载量和评估肺组织病理损伤情况,评价Ⅲ型干扰素在体内的抗病毒活性。3.结合文献调研,qRT-PCR初步验证Ⅲ型干扰素对多种新冠感染受体的表达影响;研究不同的给药策略,利用qRT-PCR、WB探索不同浓度梯度、不同时间梯度的干扰素刺激对ACE2和TMPRSS2的表达影响。4.以基因转录调控机制为主要切入点,研究Ⅲ型干扰素对重要新冠感染受体表达调控的具体机制。通过文献调研和生物信息学分析,筛选出调控ACE2和TMPRSS2基因的启动子和增强子并构建质粒,瞬时转染细胞后,利用双荧光报告基因实验探索Ⅲ型干扰素对受体转录水平的影响。结合前期实验结果,通过qRT-PCR、WB实验探索Ⅲ型干扰素对转录因子NR4A2表达水平的影响,对其敲低以展开回复实验。5.在细胞水平,利用新冠假病毒感染NCI-H1650、Calu-3肺腺癌细胞系,评估Ⅲ型干扰

关键词： SARS-CoV-2 Ⅲ型干扰素枸杞糖肽抗病毒药物新冠受体

枸杞糖肽对角膜碱烧伤小鼠角膜炎症反应及愈合的作用及其机制研究

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中国现代医学杂志 2024年第11期34卷 34-42页

作者：闫雅蓉刘菁华颜鑫霖井雅朋李轩天津医科大学眼科临床学院天津300070 南开大学医学院天津300071 天津市眼科医院研究所(天津市眼科学与视觉科学重点实验室) 天津300020

目的探讨枸杞糖肽(LbGp)在角膜碱烧伤损伤愈合中的作用及其机制。方法根据治疗方式不同将45只健康、SPF级、6~8周、雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(N组)、损伤对照组(PBS组)、LbGp治疗组(LbGp组),每组15只。PBS组和LbGp组小鼠右眼... 详细信息

目的探讨枸杞糖肽(LbGp)在角膜碱烧伤损伤愈合中的作用及其机制。方法根据治疗方式不同将45只健康、SPF级、6~8周、雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(N组)、损伤对照组(PBS组)、LbGp治疗组(LbGp组),每组15只。PBS组和LbGp组小鼠右眼复制碱烧伤模型,采用点眼联合结膜下注射的方式分别给予PBS溶液或LbGp溶液(10 mg/mL)治疗。治疗后第3天采用裂隙灯显微镜及HE染色观察各组小鼠角膜上皮修复情况和角膜组织结构;实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting及免疫组织化学染色技术检测各组小鼠角膜组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)的表达及核转录因子κB(NF-κB)的磷酸化水平。治疗后的第14天采用裂隙灯显微镜对角膜混浊程度进行评分,HE染色观察角膜组织结构。结果治疗后第3天LbGp组小鼠角膜上皮愈合速度快于PBS组(P<0.05)。N组、PBS组及LbGp组的NF-κB-p65、NLRP3、IL-1β及IL-6基因和蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05),PBS组均高于N组(P<0.05),LbGp组均低于PBS组(P<0.05)。LbGp组角膜基质中MPO染色阳性的中性粒细胞的浸润较PBS组减轻。治疗后第14天LbGp组小鼠角膜混浊评分低于PBS组(P<0.05)。结论LbGp治疗可以抑制小鼠角膜碱烧伤后NF-κB的激活及NLRP3、IL-1β的表达,从而减轻过度的炎症反应,促进小鼠角膜上皮再生及角膜结构恢复,有助于恢复角膜的透明性和完整性。

关键词：角膜碱烧伤炎症反应枸杞糖肽核转录因子κB NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 白细胞介素-1β

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枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

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中国中药杂志 2005年第7期30卷 534-538页

作者：徐顺霖黄峻田庚元南京医科大学第一附属医院江苏南京210029 中国科学院上海有机化学研究所上海200032

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入... 详细信息

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。

关键词：细胞钙超载枸杞糖肽激光扫描共聚焦显微系统荧光指示剂 KCl溶液细胞内钙浓度心肌细胞培养 MTT法检测心肌细胞缺氧缺氧模型正常对照组 L型钙通道 SD大鼠细胞活力标记技术动态变化 Cl刺激动态观察时间延长荧光强度

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枸杞糖肽对放射诱导人角质形成细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

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中国生物制品学杂志 2023年第11期36卷 1324-1328,1334页

作者：江思婧李静刘畅牟雁东西南医科大学口腔医学院四川泸州646000 四川省人民医院口腔科四川成都610072

目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbanun glycopeptide,LbGP)对放射诱导人角质形成细胞HaCaT损伤的保护作用及其机制。方法采用直线加速器(速率6 Gy/min)分别按4、8、12、16、20、24、28 Gy剂量对HaCaT细胞进行照射,CCK-8法检测细胞活性。以0... 详细信息

目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbanun glycopeptide,LbGP)对放射诱导人角质形成细胞HaCaT损伤的保护作用及其机制。方法采用直线加速器(速率6 Gy/min)分别按4、8、12、16、20、24、28 Gy剂量对HaCaT细胞进行照射,CCK-8法检测细胞活性。以0、0.05、0.1、0.5、0.8、1.0、1.5、3 mg/mL的LbGP作用HaCaT细胞4h,进行12 Gy剂量放射,CCK-8法检测细胞活性。将HaCaT细胞分为空白对照组(不加LbGP不放射)、放射组(12 Gy剂量照射)、LbGP+放射组(0.8 mg/mL LbGP作用24 h,12 Gy剂量照射),照射1 h后,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生量,WST-8法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)、p-Nrf2、NADPH氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平;分别于放射1、3、5 h后,qRT-PCR法检测Nrf2、HO-1、NQO1基因mRNA的转录水平。结果12 Gy放射辐射量可诱导约50%细胞死亡,0.8 mg/mL LbGP对放射细胞活性保护作用最佳。放射1 h后,与空白对照组比较,放射组HaCaT细胞内ROS含量显著增加(F=2.55,P0.05),HO-1蛋白含量明显增加(F=1.37,P<0.05),p-Nrf2蛋白含量显著下降(F=2.75,P<0.01);与放射组比较,LbGP+放射组HaCaT细胞内ROS含量明显降低(F=3.61,P<0.001),SOD活性明显升高(F=1.23,P<0.05),Nrf2,p-Nrf2、HO-1及NQO1蛋白含量均显著上升(F分别为4.00、2.25、6.25及1.27,P均<0.05)。放射1、3、5 h,与放射组比较,LbGP+放射组Nrf2、HO-1、NQO1基因mRNA转录水平均明显升高(F=0.20~36.00,P均<0.05)。结论LbGP可减轻放射对HaCaT细胞的氧化应激损伤,保护细胞活性,该作用可能是通过激活Nrf2及提高其下游抗氧化酶SOD、HO-1、NQO1水平而发挥作用的。

关键词：枸杞糖肽人角质形成细胞放射氧化应激细胞损伤

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枸杞糖肽缓解小鼠压力应激的神经机制研究

枸杞糖肽缓解小鼠压力应激的神经机制研究

作者：郭俊秀暨南大学

学位级别：硕士

慢性压力应激可能导致诸多精神疾病,其发病机制与下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴应激系统异常相关。近年来有研究显示压力应激可导致中枢神经系统的炎症反应;而枸杞糖肽（LbGp）作为枸杞的活性成分提取物具有免疫调节效果。因此,本课题拟... 详细信息

慢性压力应激可能导致诸多精神疾病,其发病机制与下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴应激系统异常相关。近年来有研究显示压力应激可导致中枢神经系统的炎症反应;而枸杞糖肽（LbGp）作为枸杞的活性成分提取物具有免疫调节效果。因此,本课题拟研究慢性压力应激影响内侧前额叶皮质（mPFC）的神经炎症反应,以及LbGp通过调节神经炎症缓解相关焦虑样行为的作用。通过7天慢性束缚,我们发现小鼠焦虑样行为增加,这一行为学表征与mPFC中锥体神经元树突发生异常相关,而LbGp灌胃可以显著缓解压力应激导致的焦虑情绪和树突异常。通过转录组测序,我们推测LbGp的抗焦虑效果可能同其缓解神经炎症相关,而对mPFC小胶质细胞激活情况的检测进一步证实了上述推断。此外,我们发现慢性压力应激可以显著降低小鼠血清中糖皮质激素（CORT）的含量,而LbGp可以使束缚小鼠血清CORT水平恢复正常。更重要的是,糖皮质激素受体拮抗剂RU486可以剥夺LbGp的抗焦虑和抗神经炎症效应。以上结果说明慢性压力应激可能通过促进mPFC神经炎症导致焦虑水平提高,而LbGp可以通过激活糖皮质激素受体（GR）相关通路,有效缓解慢性压力应激引起的神经炎症,并使小鼠的焦虑样行为得到改善。本项研究结果提示了枸杞活性成分的潜在抗焦虑作用和可能机制。

关键词：慢性压力应激焦虑样行为内侧前额叶皮质神经炎症糖皮质激素枸杞糖肽

枸杞糖肽对肌萎缩侧索硬化的治疗作用及其机制的探讨

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枸杞糖肽对肌萎缩侧索硬化的治疗作用及其机制的探讨

作者：徐晓兰电子科技大学

学位级别：硕士

目的:观察枸杞糖肽对肌萎缩侧索硬化的治疗作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:1、将32只SOD1G93A转基因雌性小鼠随机分为生理盐水组(TG-NS)和枸杞糖肽组(TG-Lb Gp),每组16只;同时将32只年龄性别相匹配的同窝野生型雌鼠随机分为生... 详细信息

目的:观察枸杞糖肽对肌萎缩侧索硬化的治疗作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:1、将32只SOD1G93A转基因雌性小鼠随机分为生理盐水组(TG-NS)和枸杞糖肽组(TG-Lb Gp),每组16只;同时将32只年龄性别相匹配的同窝野生型雌鼠随机分为生理盐水组(WT-NS)和枸杞糖肽组(WT-Lb Gp),每组16只。从小鼠90天龄开始,通过灌胃的方式给药,枸杞糖肽组小鼠给20 mg/kg Lb Gp,生理盐水组小鼠给等量生理盐水。2、观察小鼠体重变化、发病时间、生存周期以及病程。3、对小鼠脊髓组织进行免疫荧光染色以评估枸杞糖肽对星形胶质细胞的影响。4、应用免疫荧光染色技术和q PCR技术评估小鼠脊髓组织小胶质细胞激活的程度和表型的变化。5、q PCR检测小鼠腰段脊髓炎症因子m RNA相对表达量的变化。结果:枸杞糖肽治疗有效延长SOD1小鼠生存期约17.5%,延缓疾病进展,使疾病病程延长约35.1%。机制研究表明,枸杞糖肽可抑制星形胶质细胞增生和小胶质细胞过度激活,调节小胶质细胞的表型,抑制其向M1型极化,促进其向M2型极化,从而抑制神经炎症。结论:枸杞糖肽可能成为潜在的有效治疗ALS的药物。

关键词：肌萎缩侧索硬化枸杞糖肽神经胶质细胞神经炎症

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枸杞糖肽治疗牙周炎的实验研究

枸杞糖肽治疗牙周炎的实验研究

作者：刘聪电子科技大学

学位级别：硕士

牙周炎(Periodontitis)是一种损害牙齿支持组织完整性的慢性炎症性疾病,重度牙周炎不仅会导致牙齿脱落,还会增加动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、吸入性肺炎和癌症等全身疾病的风险。牙槽骨及牙周膜等牙周组织的修复与治疗是当前口腔领... 详细信息

牙周炎(Periodontitis)是一种损害牙齿支持组织完整性的慢性炎症性疾病,重度牙周炎不仅会导致牙齿脱落,还会增加动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、吸入性肺炎和癌症等全身疾病的风险。牙槽骨及牙周膜等牙周组织的修复与治疗是当前口腔领域研究热点。牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)作为种子细胞,在口腔工程领域广泛应用于再生修复,枸杞糖肽是枸杞多糖与五种不同的蛋白组成的糖缀合物,研究已表明其具有抗氧化、提高免疫力等作用。目前国内外关于枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)治疗口腔疾病的报道尚少,因此本研究以PDLSCs为基础,探索LbGP在体外及动物实验中的影响,为牙周炎的治疗及预防提供新的思路。目的:用LbGP培养PDLSCs,旨在研究LbGP对PDLSCs增殖、迁移、成骨分化的影响及作用机制,通过动物实验探索其治疗临床牙周病可能性,为LbGP在口腔中的应用提供前期理论支撑。方法:1、利用患者正畸手术拔除的第三磨牙(患者知情且同意),提取PDLSCs,通过流式细胞术(Flow Cytometry)、茜素红及油红O染色等方法鉴定其表征,采用不同浓度的LbGP培养PDLSCs,研究LbGP对细胞增殖、迁移、炎性因子、成骨分化的作用及潜在的调控通路。2、通过化学合成制备搭载LbGP的温敏水凝胶,测定其胶凝温度、胶凝时间及缓释情况。3、构建大鼠牙周炎模型,采用LbGP温敏水凝胶治疗,通过Micro-CT、HE染色、破骨细胞染色、免疫组织化学染色等方法评价牙周组织再生情况。结果:1、PDLSCs具有典型的间充质干细胞特征,表达CD90、CD29等标志蛋白,具备成骨分化及成脂分化潜能;LbGP可抑制促炎因子表达;促进PDLSCs增殖、迁移和成骨分化,促成骨机制与ERK1/2通路有关。2、成功制备的LbGP温敏水凝胶胶凝温度及时间满足使用条件,可持续缓释达7天。3、应用LbGP温敏水凝胶治疗后,与对照组相比,未见体内毒性,可明显减少牙槽骨吸收、破骨细胞生成、炎性蛋白IL6及IL1β表达,促进ERK1/2蛋白表达。结论:LbGP无体内毒性,可促进PDLSCs增殖、迁移、成骨分化,抑制促炎因子及牙槽骨吸收,其作用机制与ERK1/2信号通路密切相关。本研究表明LbGP可体内体外均有促成骨作用,为牙周炎的防治提供新的治疗策略。

关键词：牙周膜干细胞成骨分化枸杞糖肽牙周炎