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急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群及其NCR受体测定

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中国病理生理杂志 2007年第10期23卷 2063-2064页

作者：楼瑾汪明春李明聂李平广州医学院广东广州510182 深圳市第二人民医院血液内科深圳血液病研究所广东深圳518035

目的:探讨初发的急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群分布及自然细胞毒受体(NCR)的水平。方法:应用流式细胞仪技术测定26例初发急性非淋巴细胞白血病患者外周血NK细胞、NK细胞亚群、自然细胞毒受体。结果:初发急性非淋巴细胞白血病患者... 详细信息

目的:探讨初发的急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群分布及自然细胞毒受体(NCR)的水平。方法:应用流式细胞仪技术测定26例初发急性非淋巴细胞白血病患者外周血NK细胞、NK细胞亚群、自然细胞毒受体。结果:初发急性非淋巴细胞白血病患者外周血NK细胞明显低于对照组(P细胞明显低于正常对照组(P细胞中的表达均低于正常对照组(P细胞白血病发病可能与NK细胞及亚群减低,自然细胞毒受体表达降低有关。

关键词：白血病,非淋巴细胞,急性杀伤细胞,天然受体,自然细胞毒

肺结核患者临床特征与外周血流式细胞亚群的相关性分析

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中国防痨杂志 2020年第10期42卷 1080-1086页

作者：毛毅曾义岚吴桂辉江智豪范琳成都市公共卫生临床医疗中心结核科 610061 重庆医科大学医学检验技术系同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病临床研究中心上海市结核病(肺)重点实验室

目的了解肺结核患者临床特征与外周血流式细胞亚群[T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞]的相关性。方法连续性收集2019年1月1日至5月25日期间同济大学附属上海市肺科医院肺结核住院患者1000例的临床资料进行回顾性分析。将患者各临床特征... 详细信息

目的了解肺结核患者临床特征与外周血流式细胞亚群[T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞]的相关性。方法连续性收集2019年1月1日至5月25日期间同济大学附属上海市肺科医院肺结核住院患者1000例的临床资料进行回顾性分析。将患者各临床特征数据与外周血流式细胞亚群的检测值采用Eviews 8.0软件分别建立多元线性逐步回归模型,以明确各临床特征与外周血流式细胞亚群的检测值之间的相关性。结果(1)肺结核患者的肺部病灶范围及呼吸道标本抗酸染色涂片结果与CD3^+T细胞表达有关:肺部病灶范围越大、呼吸道标本抗酸染色涂片阳性程度越高,CD3^+T细胞数量越低(回归系数分别为-0.255、-0.499,P值分别为0.021、0.027)。(2)患者的年龄、性别、结核分子生物学检测结果与CD4^+T细胞表达有关:0~细胞数量低于其他年龄段患者(回归系数-4.710,P=0.031);男性CD4^+T细胞数量低于女性患者(回归系数-2.150,P=0.001);分子生物学检测阳性的患者CD4^+T细胞数量高于检测阴性的患者(回归系数1.433,P=0.030)。(3)初治患者CD8^+T细胞数量高于复治患者(回归系数1.247,P=0.029);呼吸道标本抗酸染色涂片阳性程度越高CD8^+T细胞数量越高(回归系数0.442,P=0.033)。(4)并发肺外结核者的NK细胞低于未并发肺外结核者(回归系数0.375,P=0.030)。结论肺结核患者的肺部病灶累及范围、呼吸道标本抗酸染色阳性与外周血流式细胞亚群CD3^+T细胞具有相关性;年龄、性别、结核分子生物学检测结果与CD4^+T细胞具有相关性;是否初治、呼吸道标本抗酸染色阳性与CD8^+T细胞具有相关性;是否并发肺外结核与NK细胞表达水平具有相关性。

关键词：结核,肺疾病特征 T淋巴细胞亚群杀伤细胞,天然数据说明,统计因果律评价研究

索拉非尼对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的鼻咽癌细胞杀伤敏感性的影响的研究

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解放军医学杂志 2009年第1期34卷 65-68页

作者：黄宇贤王杨崔斐崔彦芝吴秉毅郭坤元南方医科大学珠江医院血液科广州510282 南方医院肿瘤中心

目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High C... 详细信息

目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2High CNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2High CNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞)。流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率。乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率。结果分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CD16+CD56+(Allo-NK)细胞纯度大于90%。未处理组的ABCG2High CNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15%、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P细胞高表达NKG2D配体,使其对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

关键词：三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 基因,MDR 鼻咽肿瘤杀伤细胞,天然自然杀伤细胞激活受体

复发性生殖器疱疹患者外周血NK细胞受体和共刺激分子的表达

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中华皮肤科杂志 2009年第5期42卷 308-310页

作者：钱起丰甄琳李青广东省深圳市皮肤病防治研究所 518020

目的探讨NK细胞表面激活性受体（NKG2D、NKp46）和抑制性受体（NKG2A、KIR）以及共刺激分子（OX40、4—1BB、ICOS）的表达在复发性生殖器疱疹（RGH）发病中的作用。方法采用四色免疫荧光抗体染色，经流式细胞仪检测44例RGH患者外周血NK... 详细信息

目的探讨NK细胞表面激活性受体（NKG2D、NKp46）和抑制性受体（NKG2A、KIR）以及共刺激分子（OX40、4—1BB、ICOS）的表达在复发性生殖器疱疹（RGH）发病中的作用。方法采用四色免疫荧光抗体染色，经流式细胞仪检测44例RGH患者外周血NK细胞表达NKG2D、NKp46、NKG2A、KIR的水平及29例RGH患者NK细胞上OX40、4—1BB、ICOS分子表达。结果RGH患者外周血NK细胞表达激活性受体NKG2D和NKp46的百分比分别为（93．3±5．4）％和（88．9±8．7）％，均显著低于对照组的（96．9±2．5）％和（93．4±4．1）％，P值分别〈0．01。抑制性受体NKG2A、KIR的表达水平差异均无统计学意义（P〉0．05）。共刺激分子OX40表达下调，患者和对照组分别为（1．0±1．1）％和（1．8±1．7）％（P〈0．05）。结论单纯疱疹病毒感染能下调NK细胞激活性受体及共刺激分子表达，抑制NK细胞的活化，使病毒感染细胞逃逸NK细胞的天然杀伤作用。

关键词：疱疹,生殖器杀伤细胞,天然受体共刺激分子

人巨细胞病毒对自然杀伤细胞表面自然杀伤细胞2族成员受体表达的影响

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中华传染病杂志 2014年第4期32卷 199-203页

作者：顾绍庆李文静韦苇马晓蒙 Rupa Rana Shahi 赵媛江苏大学附属人民医院儿科镇江212013

目的观察人CMV对NK细胞表面自然杀伤细胞2族（NKG2）成员,包括NKG2A、NKG2C和NKG2D表达的影响.方法免疫磁珠法提取健康人PBMC中的NK细胞,与感染人CMV的人胚肺成纤维细胞（HELF）共培养24 h;同时设未感染CMV的HELF与NK细胞共培养组和N... 详细信息

目的观察人CMV对NK细胞表面自然杀伤细胞2族（NKG2）成员,包括NKG2A、NKG2C和NKG2D表达的影响.方法免疫磁珠法提取健康人PBMC中的NK细胞,与感染人CMV的人胚肺成纤维细胞（HELF）共培养24 h;同时设未感染CMV的HELF与NK细胞共培养组和NK细胞组.流式细胞技术检测各组NK细胞NKG2A、NKG2C和NKG2D的表达.组间比较采用Wilcoxon检验.结果感染CMV的HELF＋ NK细胞共培养组NKG2C和NKG2D表达水平为34.26％±7.99％和24.94％±5.24％,高于HELF＋NK细胞共培养组的26.31％±6.41％（Z=-3.285,P=0.001）和20.02％±6.80％（Z=-3.285,P=0.001）,也高于NK细胞组的25.78％±6.62％（Z=-3.211,P=0.001）和20.12％±6.75％（Z=-3.285,P=0.001）;而HELF＋NK细胞共培养组与NK细胞组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）.NKG2A在各组间表达差异亦无统计学意义（均P＞0.05）.感染CMV的HELF＋NK细胞共培养组NKG2A＋ NKG2C-为2.99％±2.62％,NKG2A＋NKG2D-为6.13％±2.44％,NKG2C＋ NKG2A-为26.62％±7.63％,NKG2D＋ NKG2A为20.44％±5.68％,而HELF＋ NK细胞组分别为4.44％±4.25％（Z=-2.240,P=0.025）、6.99％±2.33％（Z=-2.053,P=0.040）、19.52％±6.80％（Z=-2.800,P=0.005）和15.78％±7.48％（Z=-2.875,P=0.004）.NKG2A＋ NKG2C＋和NKG2A＋ NKG2D＋在各组间比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.结论人CMV感染可改变NK细胞受体的表达量,使NKG2C、NKG2D转导的活化性信号增强,NKG2A转导的抑制性信号减弱.

关键词：巨细胞病毒,人杀伤细胞,天然受体,细胞表面

侵袭性自然杀伤细胞白血病合并噬血细胞综合征一例并文献复习

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白血病．淋巴瘤 2020年第12期29卷 749-751页

作者：胡文雪吴涛薛锋范春丽王存邦白海解放军联勤保障部队第九四〇医院全军血液病中心兰州730050

目的探讨侵袭性自然杀伤细胞白血病(ANKL)的临床特点及治疗情况。方法对2019年7月解放军联勤保障部队第九四〇医院收治的1例ANKL合并噬血细胞综合征(HPS)患者的相关实验室检查、影像学、病理学结果及治疗情况进行回顾性分析,并复习相关... 详细信息

目的探讨侵袭性自然杀伤细胞白血病(ANKL)的临床特点及治疗情况。方法对2019年7月解放军联勤保障部队第九四〇医院收治的1例ANKL合并噬血细胞综合征(HPS)患者的相关实验室检查、影像学、病理学结果及治疗情况进行回顾性分析,并复习相关文献。结果患者为中年女性,以乏力伴全身皮肤瘀斑为首发症状,结合临床、骨髓象和免疫表型结果,确诊为ANKL合并HPS。首次给予VEAP(长春新碱+依托泊苷+阿糖胞苷+泼尼松)方案化疗,后行大剂量甲氨蝶呤及VELP(长春新碱+依托泊苷+左旋门冬酰胺酶+泼尼松)方案治疗,效果较好。后续建议行造血干细胞移植。结论ANKL是一种高度侵袭性恶性肿瘤,起病急,进展迅速,预后差,极易误诊、漏诊。临床对于起病急、发热、全血细胞减少合并HPS的患者,应及时行骨髓穿刺和免疫分型进行鉴别诊断,并积极诱导化疗,从而延长患者生存期。

关键词：杀伤细胞,天然白血病淋巴组织细胞增多症,噬血细胞性免疫表型分型

自然杀伤细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3影响的研究

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白血病．淋巴瘤 2010年第7期19卷 404-406,409页

作者：沈茜葛伯建陆德炎陆伟姜胜华江苏省南通市肿瘤医院肿瘤内科 226361 南通大学附属医院血液内科南通大学附属医院血液实验室

目的研究自然杀伤（NK）细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3杀伤及诱导凋亡的作用.方法 WST-1法观察不同效靶比的NK细胞对KM-3细胞的杀伤作用;流式细胞术检测Annexin-V＋/PI-凋亡细胞、线粒体跨膜电位.结果 NK细胞作用于KM-3细胞后,能显著杀... 详细信息

目的研究自然杀伤（NK）细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3杀伤及诱导凋亡的作用.方法 WST-1法观察不同效靶比的NK细胞对KM-3细胞的杀伤作用;流式细胞术检测Annexin-V＋/PI-凋亡细胞、线粒体跨膜电位.结果 NK细胞作用于KM-3细胞后,能显著杀伤KM-3细胞,呈剂量和时间依赖性（P〈0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞48 h后,Annexin-V＋/PI-细胞比例明显增加,呈剂量依赖性（P〈0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞效靶比为10：1时,Annexin-V＋/PI-细胞比例明显增加,呈时间依赖性（P〈0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞后,KM-3细胞线粒体跨膜电位明显降低,呈剂量和时间依赖性（P〈0.05）.结论 NK细胞能明显杀伤KM-3细胞并诱导其凋亡,均呈剂量和时间依赖性.

关键词：杀伤细胞,天然多发性骨髓瘤细胞凋亡 KM-3细胞株

NK细胞对人肝癌细胞的杀伤作用及其可能机制

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军事医学 2017年第9期41卷 775-783页

作者：王文秀习佳飞赵月何丽娟周军年范增张彪王海洋曾泉南雪岳文裴雪涛广西医科大学南宁530021 军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室血液安全保障技术研究北京市重点实验室北京100850 华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(... 详细信息

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(lactate dehydrogenase cytotoxicity assay)等体外实验验证NK-92细胞对多种肝癌细胞的体外杀伤作用。同时建立人肝癌细胞株HepG2的裸鼠皮下荷瘤模型,每只裸鼠分别在荷瘤后第2、9、16、23天共4次通过尾静脉注射1×10~7个NK-92细胞,对照组注射等体积PBS,密切观察实验组和对照组裸鼠移植瘤大小、体积、质量以及裸鼠存活状态。荷瘤30 d后活杀裸鼠,取肿瘤组织进行大体观察,并对肿瘤组织切片进行HE染色和免疫荧光检测,明确瘤内磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)蛋白的表达。结果体外长期培养的NK-92细胞能保持典型的NK细胞表型特征,细胞活性好,利用ELISA和LDH实验对NK-92细胞的体外杀瘤能力进行鉴定。结果表明,其对多种肝癌细胞系均具有很好的杀伤作用。裸鼠抑瘤实验结果显示,体内NK-92细胞对肝癌组织有较好的杀伤作用,实验组肝癌组织体积明显小于对照组,且肝癌组织免疫组化和免疫荧光结果均表明GPC3表达明显降低。初步显示,NK细胞可能通过杀伤GPC3阳性肝癌细胞来发挥其治疗作用。结论NK细胞治疗有望作为有效的肝癌治疗手段。该研究利用NK-92细胞系为研究对象,证明其在体外和体内均对肝癌细胞有很好的杀伤作用,同时初步表明其对肝癌的杀伤作用机制可能是通过杀伤肝癌组织内的GPC3阳性细胞;该研究对进一步提高NK细胞对肝癌的治疗作用及明确其作用机制奠定了基础。NK细胞除抗肿瘤作用外对多种细菌和病毒等病原体有很好的杀伤作用,同时对进一步拓展NK细胞的应用范围提供了参考。

关键词：杀伤细胞,天然癌细胞,肝细胞毒作用磷脂酰肌醇蛋白聚糖类

骨髓瘤RPMI 8226细胞体外逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步研究

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中华肿瘤防治杂志 2011年第17期18卷 1349-1353页

作者：王秀菊尹松梅马丽萍李益清聂大年谢双峰肖洁中山大学孙逸仙纪念医院血液科广东广州510120

目的:探讨骨髓瘤细胞RPMI 8266逃逸NK细胞免疫杀伤的机制。方法:流式细胞仪检测K562和8266细胞表面MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ类分子的表达。4hLDH释放法测定效靶比20∶1时阻断前后NK细胞对2种细胞杀伤活性变化。观察效靶比20∶1时NK细... 详细信息

目的:探讨骨髓瘤细胞RPMI 8266逃逸NK细胞免疫杀伤的机制。方法:流式细胞仪检测K562和8266细胞表面MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ类分子的表达。4hLDH释放法测定效靶比20∶1时阻断前后NK细胞对2种细胞杀伤活性变化。观察效靶比20∶1时NK细胞对药物处理后RPMI 8226细胞杀伤活性变化、RPMI 8226细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达及NK细胞对RPMI 8266细胞的克隆形成率的影响。结果:K562细胞高表达MICA/B和ULBP 1～3分子;RPMI 8266细胞表达HLA-Ⅰ类分子,2株细胞NKG2D配体表达差异有统计学意义,P细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,P值均细胞的杀伤活性基本无变化,P值均>0.05。抗W6/32单抗封闭8266细胞表面HLA-Ⅰ类分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性无上升(P=0.721),而对RPMI 8266细胞的杀伤活性上升,P=0.000。1/2IC50的三氧化二砷处理后RPMI8226细胞ULBP2、3配体升高(P=0.000),NK细胞对8266细胞的杀伤活性与对照组相比差异有统计学意义,P=0.001;1/2IC50硼替佐米处理后RPMI 8226细胞表面各NKG2D配体无变化,P>0.05。NK细胞对K562细胞克隆形成抑制率为(63.48±6.78)%,对RPMI 8226细胞为(23.71±2.39)%,P=0.000。结论:RPMI8266细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制可能与该细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,低表达NKG2D的配体MICA/B和ULBP1～3分子有关。

关键词：杀伤细胞,天然多发性骨髓瘤肿瘤逃逸