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新型冠状病毒原始株和流行株IgG抗体组合识别Omicron BA.5流行株感染的研究

中华预防医学杂志 2024年第9期58卷 1354-1359页

作者：储金金田华李楚楚李志锋董晨孔筱筱彭杰夫许可胡建利鲍倡俊朱立国江苏省疾病预防控制中心急性传染病防制所南京210009 江苏省现场流行病学培训项目南京210009 江苏省新发突发重大传染病病原微生物重点实验室江苏省疾病预防控制中心南京210009

目的探讨新型冠状病毒特异性IgG抗体组合在识别Omicron BA.5流行株感染的应用。方法选择新冠高强度流行后的Omicron BF.7/BA.5自然感染人群、疫苗免后健康人群和免疫突破感染Omicron BF.7/BA.5病例为研究对象,应用间接ELISA法检测血清... 详细信息

目的探讨新型冠状病毒特异性IgG抗体组合在识别Omicron BA.5流行株感染的应用。方法选择新冠高强度流行后的Omicron BF.7/BA.5自然感染人群、疫苗免后健康人群和免疫突破感染Omicron BF.7/BA.5病例为研究对象,应用间接ELISA法检测血清原始株和流行株特异性IgG抗体滴度,并比较不同人群血清特异性IgG抗体水平。应用ROC曲线探索新型冠状病毒原始型Spike IgG抗体(WT-S-IgG)和新型冠状病毒Spike(Omicron BA.5)IgG抗体(BA.5-S-IgG)两种抗体滴度以及两种抗体滴度比值在识别流行Omicron BA.5株感染中的应用价值,为病原体诊断提供技术支撑。结果免疫突破感染Omicron BF.7/BA.5病例的WT-S-IgG和BA.5-S-IgG两种抗体滴度水平明显高于Omicron BF.7/BA.5自然感染人群和疫苗免后健康人群(均P抗体识别Omicron BA.5流行株感染ROC曲线下面积分别为0.947和0.961。BA.5-S-IgG与WT-S-IgG抗体滴度比值识别流行株感染AUC为0.873,当该比值为0.855时,灵敏度及特异度分别为80%和90%。按照感染者的感染后时长分类,BA.5-S-IgG与WT-S-IgG抗体滴度的比值识别≤30 d和>30 d流行株感染的ROC曲线下面积分别为0.887和0.863,灵敏度和特异度均达到80%以上。结论BA.5-S-IgG和WT-S-IgG两种血清抗体滴度及其比值在识别Omicron BA.5流行株感染具有较高应用价值。

关键词：新型冠状病毒间接ELISA IgG抗体抗体组合

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抗新型冠状病毒中和抗体组合的筛选

抗新型冠状病毒中和抗体组合的筛选

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作者：张绪磊广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronaviru s 2,SARS-CoV-2)感染引起的全球新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease,COVID-19)的大流行,导致了严重的公共卫生负担和社会经济危机。中和抗体... 详细信息

研究背景由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronaviru s 2,SARS-CoV-2)感染引起的全球新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease,COVID-19)的大流行,导致了严重的公共卫生负担和社会经济危机。中和抗体已被证明对治疗轻度和中度COVID-19患者非常有效。然而,由病毒快速突变产生的一系列O micron亚型株逃逸了大多数商业化的治疗性抗体。面对不断变异的新冠病毒以及单一抗新冠病毒中和抗体面临的耐药威胁,筛选或设计靶向SARS-CoV-2高保守位点的广谱中和抗体以及抗体的组合可能是解决病毒变异株免疫逃逸的有效措施。迄今为止,还没有一种鸡尾酒抗体或广谱抗体被证明对突变介导的抗体逃逸完全免疫。综合考虑,开发靶向不同表位的抗体组合可以为COVID-19提供额外的治疗选择。前期实验研究中我们利用B细胞培养结合抗体克隆技术,从SARS-CoV-2感染康复患者外周血中筛选出一系列靶向新冠病毒不同表位的特异性抗体。抗体依据与病毒S糖蛋白结合分为NTD、RBD和S2特异性抗体。本研究拟探讨特异性抗体对Omicron的中和活性以及对其关键突变位点的结合能力,以筛选出有效中和不同变异株的抗体组合。第一部分Omicron变异株关键突变位点对人源中和抗体识别的影响研究内容及目的:采用定点突变的方法构建了含有Omicron关键突变位点的S1质粒,利用捕获ELISA法分析抗体825、843、809、826和846与突变位点S1蛋白的结合能力,明确关键突变位点对抗体识别的影响,预测对5株抗体产生逃逸的突变位点可能有哪些。研究方法:1.关键突变位点质粒的构建及表达:设计好含关键突变位点的引物,经PCR扩增含有突变位点的目的序列,转化目的序列到DH5α感受态细胞,挑克隆送测序,测序结果与模板质粒序列经SnapGene 比较,如为目的突变位点序列,扩大生产质粒,经转染到HEK293T细胞中进行突变位点蛋白的表达。2.捕获ELISA方法:用鼠抗包被ELISA板,可捕获表达成功的突变位点S1蛋白抗原,加入筛选出来的中和抗体,再加入带有HRP标记的羊抗人IgG(H+L),在底物TMB催化下显色。分析抗体与含Omicron关键突变位点S1蛋白抗原的结合情况。研究结果:1.一系列关键突变位点的选择依据大量文献报道,本实验总结了一些造成已获批准的COVID-19治疗性抗体逃逸的关键突变位点 T19I,del 24-26,A27S,G142D,del 143-145,S371L,S371F,S373P,S375F,D405N,K417N,N440K,G446S,E484A,Q493R,G496S,Q498R,N501Y,Q493R+G496S,Q493R+Q498R。2.关键突变位点质粒的构建与表达应用SnapGene软件将生工生物公司反馈的测序结果与模板序列进行比对分析,结果表明,利用点突变方法成功构建了含20处关键突变位点的质粒。将上述构建的部分关键突变位点质粒转染HEK293T细胞进行表达,经Western Blot分析表达鉴定,所有关键突变位点蛋白成功表达,条带大小正确。3.关键突变位点抗原稀释度的选择为接下来的ELISA实验做准备,避免所用抗原过度饱和,提高实验的灵敏性,本研究对表达的关键突变位点抗原进行梯度稀释,用特异性抗体对抗原进行了定量,选择相应的抗原稀释度。4.含Omicron关键突变位点的S1蛋白对抗体结合能力的影响809、826和843对带有单点突变S371F、S375F和G446S的S1蛋白的结合能力降低,S371F和S375F降低了 809、826、825和843对S1蛋白的结合能力。T19I、S371F和del143-145降低了 NTD区域单抗846对S1蛋白的结合能力,RBD区域的突变位点对846抗体基本不会产生影响。综上,抗体809、826、825、843对NTD区域的关键突变位点有较好的结合能力,结合能力减弱主要集中在S371F、S375F和G446S位置;846对带有突变的T19I、del143-145和S371F蛋白结合能力降低。结论:5株抗体对大部分Omicron关键突变位点有较好的结合能力。S371F、S375F和G446S 降低了抗体 809、826、825、843 的结合能力,T19I、del143-145 和 S371F 降低了 846抗体的结合能力,预示这些位点的突变有可能使5株抗体对Omicron变异株的中和作用降低或产生逃逸。第二部分基于流式细胞技术SARS-CoV-2假病毒中和实验方法的建立及人源中和抗体对Omicron变异株中和活性的评估研究内容及目的:建立SARS-CoV-2假病毒中和系统,并探讨已获得针对SAR

关键词： SARS-CoV-2 Omicron变异株中和抗体假病毒中和活性免疫逃逸抗体组合

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低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化的组织学及免疫组化特点

低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化的组织学及免疫组化特点

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作者：刘娟北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化(low-grade endometrial stromal sarcoma with smooth muscle differentiation,LGESS-SMD)是子宫少见的间叶性肿瘤,由于其组织学表现不典型,形态学及免疫组化与低级别子宫内膜间质肉瘤(low-gra... 详细信息

目的:低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化(low-grade endometrial stromal sarcoma with smooth muscle differentiation,LGESS-SMD)是子宫少见的间叶性肿瘤,由于其组织学表现不典型,形态学及免疫组化与低级别子宫内膜间质肉瘤(low-grade endometrial stromal sarcoma,LGESS)及高度富于细胞性平滑肌瘤(Highly cellularleiomyoma,HCL)有重叠,日常工作中常给诊断造成困难。随着妇科微、无创手术的广泛开展,送检标本常常比较破碎,难以判断肿瘤生长方式及边界浸润等情况,使诊断更加困难。本文以LGESS-SMD为研究对象,并以单纯的LGESS及HCL为对照,通过组织病理学观察及免疫组化研究,找出其形态特点及免疫组化表达规律,筛选最佳的鉴别诊断抗体组合,为低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化的诊断、鉴别诊断提供依据。材料与方法:实验对象为北京协和医院手术切除标本,所有标本经中性缓冲福尔马林固定8～72小时,自动脱水机脱水,常规石蜡包埋,制备厚度4微米连续切片,用于HE染色及免疫组化染色。所有切片均由2名资深妇科病理亚专业病理医师分别双盲组织学观察、免疫组化观察及评分。对于诊断有分歧的病例则在多头镜下,共同协商确定。组织学诊断依据2014年WHO妇科肿瘤的分类标准,组织学观察指标包括肿瘤生长方式、肿瘤细胞形态、肿瘤中是否存在厚壁血管以及CD34所显示的血管构架类型等。免疫组化染色包括肌源性标记物Desmin、SMA、Caldesmon及Calponin;子宫内膜间质标记包括CD10;另加染CD34用于显示肿瘤及子宫肌层中的血管网络结构。肌源性及子宫内膜间质标记根据其染色强度及阳性细胞比例分别评为0～3分共4个等级。其中0分为全阴性,阳性细胞比例0%;1分为弱阳性,阳性细胞比例Desmin>Caldesmon。CD10染色提示LGESS-SMD阳性率显著低于LGESS,而HCL病例则CD10全部为阴性。CD34染色显示正常子宫平滑肌层脉管为长裂隙的海绵状,中央有大血管及较少数量的毛细血管;LGESS通常为一定数量的螺旋动脉及大量的毛细血管;HCL中为厚壁血管及毛细血管。CD34能很好的显示出浸润性肿瘤(LGESS及LGESS-SMD)区域和子宫固有肌层的关系。结论:首先,结合肿瘤生长方式,并应用SMA、Desmmin、Caldesmon、CD10及CD34抗体组合,可有效诊断及鉴别诊断LGESS-SMD、LGESS和HCL。其次,CD34染色有助于区分子宫固有肌层的肿瘤是否为浸润性生长。第三,间质中是否有厚壁血管对于鉴别LGESS和LGESS-SMD有参考价值。最后,肿瘤浸润性生长时,无论CD10表达结果如何,只要有一种肌源性标记肿瘤细胞阳性数大于30%就诊断为LGESS-SMD;但是如果肌源性标记均为阴性或是小于30%的阳性表达,并且CD10为阳性则应该诊断为LGESS。根据以上结果,本文提出了 LGESS-SMD、LGESS与HCL的诊断与鉴别诊断的流程图。

关键词：低级别子宫内膜间质肉瘤伴平滑肌分化低级别子宫内膜间质肉瘤高度富于细胞性平滑肌瘤鉴别诊断抗体组合

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细胞块切片及免疫组化在恶性浆膜腔积液诊断中的应用体会

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中国现代医生 2011年第28期49卷 114-115,133,F0003页

作者：斯向东李庆浙江省金华市中医院病理科浙江金华321017

目的探讨运用细胞块切片结合免疫组化方法鉴别诊断腺癌与增生间皮细胞。方法对44例经证实的恶性浆膜腔积液患者,采用细胞学涂片与细胞块切片结合CEA、CK7、WT-1、Calretinin(CR)免疫组化检测研究。结果细胞块切片结合免疫组化的检出率... 详细信息

目的探讨运用细胞块切片结合免疫组化方法鉴别诊断腺癌与增生间皮细胞。方法对44例经证实的恶性浆膜腔积液患者,采用细胞学涂片与细胞块切片结合CEA、CK7、WT-1、Calretinin(CR)免疫组化检测研究。结果细胞块切片结合免疫组化的检出率明显优于常规细胞学涂片(P抗体。结论细胞块切片结合免疫组化是鉴别腺癌细胞与增生间皮细胞的有效方法,CEA、CK7、CR的抗体组合具有较高的临床应用价值。

关键词：恶性浆膜腔积液免疫组化细胞块切片抗体组合

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